Вы вошли как Гость Текущая дата: Пятница, 2024-04-19, 9:57 PM
Автоматизированная система окрашивания (автостейнер)
|
|
Cekcyi | Дата: Воскресенье, 2009-02-01, 4:25 PM | Сообщение # 16 |
Генерал-майор
Группа: Модераторы
Сообщений: 182
Статус: Offline
| Завидую Вам коллега! У Вас лаборанты с "золотыми" руками. А если нет школы лаборантов-гистологов и руки пока только "деревянные"? Приходится все ставить с головы на ноги. Путь долгий... А там, глядишь, и до забуференного формалина со стандартами в ИГХ доберемся :'( Школа по онкогематологии прошла не даром, есть цели
|
|
| |
Vladpatholog | Дата: Воскресенье, 2009-02-01, 4:28 PM | Сообщение # 17 |
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| Quote А если нет школы лаборантов-гистологов и руки пока только "деревянные" - дефектуру написать - действует порой очень даже ...правда в условиях нехватки кадров и это не метод.
|
|
| |
Cekcyi | Дата: Воскресенье, 2009-02-01, 4:37 PM | Сообщение # 18 |
Генерал-майор
Группа: Модераторы
Сообщений: 182
Статус: Offline
| Сор из избы не выносим, если плохо с препаратами в отделении, значит врачи виноваты, а не лаборанты. Пытаюсь действовать иначе - сделал хорошо - научи лаборанта, потом если хуже становится поправь, не достаточно этого, тогда только административный ресурс можно включать, но до этого еще не доходило.
|
|
| |
Vladpatholog | Дата: Воскресенье, 2009-02-01, 4:46 PM | Сообщение # 19 |
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| у нас лаборанты друг-друга учат.
|
|
| |
Cekcyi | Дата: Воскресенье, 2009-02-08, 0:27 AM | Сообщение # 20 |
Генерал-майор
Группа: Модераторы
Сообщений: 182
Статус: Offline
| Quote (Vladpatholog) у нас лаборанты друг-друга учат. Когда-нибудь мы к этому тоже придем Добавлено (2009-02-08, 0:27 Am) --------------------------------------------- Друзья! Хочу поделиться "радостной" новостью... На нас в текущем году запланировали 3 000 РУБЛЕЙ в месяц (нас это всех бюджетников!) В общем встаем через две недели... О результатах отпишусь
|
|
| |
Чакона | Дата: Среда, 2010-04-14, 6:10 PM | Сообщение # 21 |
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 109
Статус: Offline
| Quote (Vladpatholog) у нас лаборанты друг-друга учат. А я вот сам учу. Ибо некому. За пять-шесть месяцев, если вовремя поддавать по заднице за плохие срезы, получается вполне себе нормальный лаборант Насчет аутостейнера. Удивляюсь я тутошним проблемам. В лабе стоит аутостейнер Leica. Использовал самую обычную схему окраски г.-э., без всяких там блуингов и гематоксилинов Джилла (еще не хватало), с гематоксилином Карацци ручной готовки. Получается очень хорошо.
|
|
| |
Patologoanatom | Дата: Среда, 2010-04-14, 10:45 PM | Сообщение # 22 |
___
Группа: Администраторы
Сообщений: 755
Статус: Offline
| Quote (Чакона) За пять-шесть месяцев, если вовремя поддавать по заднице за плохие срезы Не рекомендовал бы так грубо обходиться, а то могут привлечь за домогательства всякого рода. Лаборанты-гистологи это самые лучшие и ценные люди в нашей специальности! Ксати, в цивилизованном мире в апреле проходит неделя лабораторных профессионалов, почет и уважение на работе, подарки и.т.д. Ссылка.
|
|
| |
Maxim | Дата: Среда, 2010-04-14, 10:58 PM | Сообщение # 23 |
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Quote (Cekcyi) Представляю фото. Материал - игольная биопсия предстательной железы, разумеется все с одного блока и одинаковой толщины (4 мкм) ДО и ПОСЛЕ Уважаемый коллега! Мне кажется, что у Вас бледность препарата вызвана недостатком эозина в срезах. Все это легко исправить. У меня нет автостайнера и мы не закупаем никаких импортных реактивов, кроме порошка гемактоксилина. Эозин делаем 0.5% на 30% этиловом спирте (10 г эозина растворить в 1.5 литре дистиллированной воды, хорошо перемешать, чтобы небыло осадка + 500 мл 95% этанола. По капле добавлять ледяную уксусную кислоту - всего 20 капель (не больше!), пермешивать после каждой капли 10-15 секунд). В протоколе до и после окраски - промывка в дистиллированной воде несколько секунд, затем обезвоживание в спиртах или ацетонах (чем привыкли), затем ксилол. Раствор эозина фильтровать ежедневно перед окраской и доливать до уровня из основного раствора. Со временем сила раствора может ослабнуть (особенно если пользоваться обычной водой из-под крана перед эозином). Добвьте 1 каплю ледяной уксусной кислоты на каждые 100 мл раствора и он снова оживет. Чтобы оттенок эозина был не такой красный, воспользуйтесь желтоватым эозином или эоином Y. Эозин В может давать такой красноватый оттенок. Будьте осторожны с подсинивающим реагентом (Bluieng reagent). Если он содержит аммиак, иногда срезы могут отпадать от стекол. Мы не пользуемся подсинивающими рагентами - наша водопроводная вода достаточно щелочная для подсинивания гематоксилина после дифференцирования солянокислым спиртом. Если нужно все же использовать подсинивание, смело пользуйтесь фосфатным буфером с рН 7 и более. Можно возиться и с 0.1% водным углекислым литием и с 0.1% углекислым натрием (пищевой содой), Scott water (смесь бикарбоната калия, хлористого кальция и сернокислого магния) или даже добавить куски мрамора в емкость, где подсиниваются срезы - все это эффективно работает, но предпочтения у каждой лаборатории свои. Остается еще немало ньюансов в приготовлении гематоксилина. Я предпочитаю делать его сам, себестоиомось окраски стекла обходится примерно 2 коп/стекло (1 литр расходуется примерно на 3-5000 стекол). Коммерческий в разы дороже, а 40 минту в месяц (20 минут раз в две недели) потратить на приготвление гематоксилина вполне приемлемо.
|
|
| |
Чакона | Дата: Среда, 2010-04-14, 11:05 PM | Сообщение # 24 |
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 109
Статус: Offline
| Quote (Patologoanatom) Не рекомендовал бы так грубо обходиться, а то могут привлечь за домогательства всякого рода. Имея некий опыт в алхимии превращения обыкновенных биохимиков в добротных лаборантов-гистологов - могу сказать, что незаменимость этих кадров несколько преувеличена, и идет это из советского времени, когда все приходилось делать на санных микротомах, точить и править ножи, киты для окраски (импрегнация по Футу, Вартин-Старри и др.) отсутствовали как класс. Сейчас вот, при наличии хороших ротационных мелкотомов со сменными бритвами, современного оборудования для проводки, окраски и заливки - хистолоджи текнишн получается быстро и просто практически из ЛЮБОГО неофита. Quote (Patologoanatom) Ксати, в цивилизованном мире в апреле проходит неделя лабораторных профессионалов, почет и уважение на работе, подарки и.т.д. Ссылка. Сейчашний мой лаборант - к.б.н. (она раньше изучала экспрессию генов с помощью ПЦР). Боюсь, что такое поздравление она воспримет как гнилую издевку. Quote (Maxim) Мы не пользуемся подсинивающими рагентами - наша водопроводная вода достаточно щелочная для подсинивания гематоксилина Все верно, эти блуинги - коммерческий развод. Quote (Maxim) затем обезвоживание в спиртах или ацетонах (чем привыкли), затем ксилол. Я еще карбол-ксилол в батарею вставляю. Отличное просветляющее средство, кстати, особенно полезное, если не использовать абсолютный этанол (не будет этой знаменитой мути в ксилоле).
Сообщение отредактировал Чакона - Среда, 2010-04-14, 11:22 PM |
|
| |
Maxim | Дата: Среда, 2010-04-14, 11:41 PM | Сообщение # 25 |
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Quote (Чакона) идет это из советского времени, когда все приходилось делать на санных микротомах, точить и править ножи, киты для окраски (импрегнация по Футу, Вартин-Старри и др.) отсутствовали как класс. Сейчас вот, при наличии хороших ротационных мелкотомов со сменными бритвами, современного оборудования для проводки, окраски и заливки Это Вам опять же повезло, что такое хорошее снабжение. А у нас так и осталось все оборудование на уровне 60-х и не наша вина в том. Просто приходится выкручиваться и выживать с тем, что имеем и в рамках существующего бюджета. Да и большая часть гистологических лабораторий России имеет такое же оснащение и старинные технологии. Действительно, за рубежом, там где все автоматизировано, лабораторные помощники загружают и выгружают кассеты из процессора, стойки со стеклами в стайнеры и каверслипперы. Для этих опреаций особого ума и образования не нужно - главное четкое исполнение (руководители лабораторий экономят таким образом на зарплате лаборантов). Лаборанты же заливают блоки, режут, красят гистохимию и ИГХ, готовят растворы. Но, невзирая на всю эту автоматизацию, назревает новая проблема, о которой у нас еще не горворят, пока в лабораториях еще есть достаточно старых кадров и тех, кто умеет все делать руками и думать головой: как проводить и красить, если поломался процессор или стайнер? Как выполнить окраску, если купили набор, а окраска не получается, и ждать следующей закупки некогда? За рубежом сейчас все чаще стали сталкиваться с такой проблемой, когда молодежь не может делать вручную, что можно было бы. И здесь нужны грамотные и опытные работники и хорошая подготовка. Дело патологов - диганостика, а лаборантов - технология. Жесткими требованиями можно и нужно исправлять ситацию, когда для работы все есть ,а лень мешает. Как исправить ситуацию, когда лаборанты хотят делать лучше, а нечем? Кому стучать и по какому месту?
|
|
| |
Чакона | Дата: Четверг, 2010-04-15, 0:01 AM | Сообщение # 26 |
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 109
Статус: Offline
| Quote (Maxim) Жесткими требованиями можно и нужно исправлять ситацию, когда для работы все есть ,а лень мешает. Как исправить ситуацию, когда лаборанты хотят делать лучше, а нечем? Кому стучать и по какому месту? Кабы я знал... Мне - да, повезло. Но и ручками я какое-то время тоже поработал, без стейнеров и тишью процессоров. Quote (Maxim) Но, невзирая на всю эту автоматизацию, назревает новая проблема, о которой у нас еще не горворят, пока в лабораториях еще есть достаточно старых кадров и тех, кто умеет все делать руками и думать головой: как проводить и красить, если поломался процессор или стайнер? Как выполнить окраску, если купили набор, а окраска не получается, и ждать следующей закупки некогда? За рубежом сейчас все чаще стали сталкиваться с такой проблемой, когда молодежь не может делать вручную, что можно было бы. И здесь нужны грамотные и опытные работники и хорошая подготовка. Дело патологов - диганостика, а лаборантов - технология. А вот это фигня. Дело в том, что автоматические проводки-заливки-окраски-заключения (резку все же лучше делать не автоматически) - только лишь повышение эргономичности и аккуратности работы, а так никаких особых нововведений не содержат, по сравнению с Вальдейерами, Соболевыми и Ромейсами. Греть парафин в колбе на плитке (в термостате) или в парафиновой ванне заливочной станции - суть процесса заливки не меняется. И потом, за рубежом в случае поломки никакой катастрофы не возникнет - все оборудование там обслуживает фирма, которую тотчас же вызовут и поломку исправят (Впрочем, у меня в лабе стоит-таки пустой термостат на всякий такой случай - все же в России живем). Да, и еще один момент. Хотя аутостейнер позволяет забивать в него много программ окраски - все-таки реально даже Ван-Гизон на нем не делаем, а про ШИК или там Гимзу какую-нибудь и говорить нет смысла - это все только ручками (не будешь же из-за нескольких стекол в неделю заполнять реактивами большие ванны и гонять по ним почти пустые кассеты). Массона или Фута вообще никакой дурак в стейнере делать не будет. Полагаю, что наши коллеги за бугром тоже в таких случаях обходятся без агрегатов.
Сообщение отредактировал Чакона - Четверг, 2010-04-15, 0:21 AM |
|
| |
Maxim | Дата: Четверг, 2010-04-15, 0:24 AM | Сообщение # 27 |
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Да, старые мастера честно и открыто описывали предлагаемые методы и даже отмечали, пробовали они сами его делать или нет. Вот поэтому до сих пор их читают, им доверяют и цитируют их. Сейчас все больше стало коммерческих наборов (производители чего-то боятся; деньги, дескать зарабатывают), состав засекречен: чтобы техник не навредил, а только честно исполнял. Разуммется физические и химические принципы никто не отменял и не отменит. Просто отбивают охоту узнавать и уметь использовать. Грамотный техник не навредит и с самодельными реактивами.
|
|
| |
Чакона | Дата: Четверг, 2010-04-15, 0:32 AM | Сообщение # 28 |
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 109
Статус: Offline
| Quote (Maxim) Сейчас все больше стало коммерческих наборов (производители чего-то боятся; деньги, дескать зарабатывают), состав засекречен: чтобы техник не навредил, а только честно исполнял. Это про какие такие наборы, что их даже не воспроизвести? Я таких не знаю. Реально нужны киты на серебрянные методики, ибо проще купить набор, чем геморроиться с самопальными реактивами (впрочем, последнее возможно при избытке времени, энтузазизма и старых запасов). Еще вот мне как-то понадобился Грам-Вейгерт - и что? Оказалось, что анилиновое масло достать довольно трудно (и это в Москве!), куда проще купить набор.
Сообщение отредактировал Чакона - Четверг, 2010-04-15, 0:36 AM |
|
| |
Maxim | Дата: Четверг, 2010-04-15, 0:52 AM | Сообщение # 29 |
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Грам-Вейгерт не единственный метод для окраски бктерий. Есть еще Brown-Brenn, Brown-Hopps, Twort и другие, которые имеют одинаковую химическую основу. Я пользуюсь методом Грама. Довести срезы до дистиллированной воды любым принятым в лаборатории способом. 1% водный кристаллический (генциановый фиолетовый) 1 мин, промыть дист. водой. Раствор Люгля (водный раствор) несколько секунд, промыть дист. водой. Ацетон (до обесцвечивания среза) или 95% этанол, промыть подкисленной дистлиированной водой (1 капля CH3COOH). 1% водный нейтральный красный 30 секунд. Обезводить, просветлить, заключить. Я с анилином делал окраску много лет назад (всего 3-4 раза), пока не нашел вполне подходящую замену ему (спирт или ацетон). Не знаю, что сейчас поставляют в наборах по Граму. Анилин (аминобензол, анлиновое масло) и пятнадцать лет назад, и сейчас очень просто купить в любой фирме, торгующей реактивами. (Лично я не хочу возиться с канцерогенами, даже в наборах!) Другие красители также доступны в порошках за копейки. Сранвите со стоимостью любого аналогичного набора в любой фирме. Таже песня и с серебром. Однажды купить по минимальной упаковке реактивов - и можно работать 100 лет. И таже однажды все разводиться и разливается по капельницам и пользоваться можно ничуть не хуже наборов, а деньги потратить на что-то более важное и нужное.
|
|
| |
Чакона | Дата: Четверг, 2010-04-15, 11:21 AM | Сообщение # 30 |
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 109
Статус: Offline
| Quote (Maxim) Ацетон (до обесцвечивания среза) или 95% этанол, промыть подкисленной дистлиированной водой (1 капля CH3COOH). Я правильно понимаю, что с ацетоном или со спиртом, но без анилина все-таки Грам получается плохо? Quote (Maxim) Я с анилином делал окраску много лет назад (всего 3-4 раза), пока не нашел вполне подходящую замену ему (спирт или ацетон). А насчет канцерогенности анилина - Бог с Вами... По-моему, в микротехнике вообще об этом беспокоиться странно... Тот же дихромат калия или бензидин... Добавлено (2010-04-15, 11:21 Am) --------------------------------------------- Пардон, из контекста следует, что замена спиртом или ацетоном все-таки вполне заменяет анилин.
|
|
| |
|
|