Автоматизированная система окрашивания (автостейнер) - Страница 2 - Форум
[ Новые сообщения · Участники · Правила форума · Поиск · RSS ]
Вы вошли как Гость
Текущая дата: Четверг, 2017-08-17, 4:50 PM

Страница 2 из 4«1234»
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Автоматизированная система окрашивания (автостейнер) (Методика окрашивания)
Автоматизированная система окрашивания (автостейнер)
CekcyiДата: Воскресенье, 2009-02-01, 4:25 PM | Сообщение # 16
Генерал-майор
Группа: Модераторы
Сообщений: 182
Репутация: 4
Статус: Offline
Завидую Вам коллега! У Вас лаборанты с "золотыми" руками. А если нет школы лаборантов-гистологов и руки пока только "деревянные"? Приходится все ставить с головы на ноги. Путь долгий... А там, глядишь, и до забуференного формалина со стандартами в ИГХ доберемся :'( Школа по онкогематологии прошла не даром, есть цели biggrin
 
VladpathologДата: Воскресенье, 2009-02-01, 4:28 PM | Сообщение # 17
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Репутация: 13
Статус: Offline
Quote
А если нет школы лаборантов-гистологов и руки пока только "деревянные"
- дефектуру написать - действует порой очень даже ...правда в условиях нехватки кадров и это не метод.
 
CekcyiДата: Воскресенье, 2009-02-01, 4:37 PM | Сообщение # 18
Генерал-майор
Группа: Модераторы
Сообщений: 182
Репутация: 4
Статус: Offline
Сор из избы не выносим, если плохо с препаратами в отделении, значит врачи виноваты, а не лаборанты. Пытаюсь действовать иначе - сделал хорошо - научи лаборанта, потом если хуже становится поправь, не достаточно этого, тогда только административный ресурс можно включать, но до этого еще не доходило. biggrin
 
VladpathologДата: Воскресенье, 2009-02-01, 4:46 PM | Сообщение # 19
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Репутация: 13
Статус: Offline
Quote
научи лаборанта

у нас лаборанты друг-друга учат.
 
CekcyiДата: Воскресенье, 2009-02-08, 0:27 AM | Сообщение # 20
Генерал-майор
Группа: Модераторы
Сообщений: 182
Репутация: 4
Статус: Offline
Quote (Vladpatholog)
у нас лаборанты друг-друга учат.

Когда-нибудь мы к этому тоже придем cool

Добавлено (2009-02-08, 0:27 Am)
---------------------------------------------
Друзья!
Хочу поделиться "радостной" новостью...
На нас в текущем году запланировали 3 000 РУБЛЕЙ в месяц (нас это всех бюджетников!)
В общем встаем через две недели...
О результатах отпишусь biggrin

 
ЧаконаДата: Среда, 2010-04-14, 6:10 PM | Сообщение # 21
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 105
Репутация: 5
Статус: Offline
Quote (Vladpatholog)
у нас лаборанты друг-друга учат.

А я вот сам учу. Ибо некому. За пять-шесть месяцев, если вовремя поддавать по заднице за плохие срезы, получается вполне себе нормальный лаборант

Насчет аутостейнера. Удивляюсь я тутошним проблемам. В лабе стоит аутостейнер Leica. Использовал самую обычную схему окраски г.-э., без всяких там блуингов и гематоксилинов Джилла (еще не хватало), с гематоксилином Карацци ручной готовки. Получается очень хорошо.

 
PatologoanatomДата: Среда, 2010-04-14, 10:45 PM | Сообщение # 22
___
Группа: Администраторы
Сообщений: 750
Репутация: 11
Статус: Offline
Quote (Чакона)
За пять-шесть месяцев, если вовремя поддавать по заднице за плохие срезы

Не рекомендовал бы так грубо обходиться, а то могут привлечь за домогательства всякого рода. shock

Лаборанты-гистологи это самые лучшие и ценные люди в нашей специальности!
Ксати, в цивилизованном мире в апреле проходит неделя лабораторных профессионалов, почет и уважение на работе, подарки и.т.д. Ссылка.

 
MaximДата: Среда, 2010-04-14, 10:58 PM | Сообщение # 23
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 503
Репутация: 25
Статус: Offline
Quote (Cekcyi)
Представляю фото. Материал - игольная биопсия предстательной железы, разумеется все с одного блока и одинаковой толщины (4 мкм) ДО и ПОСЛЕ

Уважаемый коллега!
Мне кажется, что у Вас бледность препарата вызвана недостатком эозина в срезах. Все это легко исправить.
У меня нет автостайнера и мы не закупаем никаких импортных реактивов, кроме порошка гемактоксилина.
Эозин делаем 0.5% на 30% этиловом спирте (10 г эозина растворить в 1.5 литре дистиллированной воды, хорошо перемешать, чтобы небыло осадка + 500 мл 95% этанола. По капле добавлять ледяную уксусную кислоту - всего 20 капель (не больше!), пермешивать после каждой капли 10-15 секунд). В протоколе до и после окраски - промывка в дистиллированной воде несколько секунд, затем обезвоживание в спиртах или ацетонах (чем привыкли), затем ксилол. Раствор эозина фильтровать ежедневно перед окраской и доливать до уровня из основного раствора. Со временем сила раствора может ослабнуть (особенно если пользоваться обычной водой из-под крана перед эозином). Добвьте 1 каплю ледяной уксусной кислоты на каждые 100 мл раствора и он снова оживет.
Чтобы оттенок эозина был не такой красный, воспользуйтесь желтоватым эозином или эоином Y. Эозин В может давать такой красноватый оттенок.
Будьте осторожны с подсинивающим реагентом (Bluieng reagent). Если он содержит аммиак, иногда срезы могут отпадать от стекол. Мы не пользуемся подсинивающими рагентами - наша водопроводная вода достаточно щелочная для подсинивания гематоксилина после дифференцирования солянокислым спиртом. Если нужно все же использовать подсинивание, смело пользуйтесь фосфатным буфером с рН 7 и более. Можно возиться и с 0.1% водным углекислым литием и с 0.1% углекислым натрием (пищевой содой), Scott water (смесь бикарбоната калия, хлористого кальция и сернокислого магния) или даже добавить куски мрамора в емкость, где подсиниваются срезы - все это эффективно работает, но предпочтения у каждой лаборатории свои.
Остается еще немало ньюансов в приготовлении гематоксилина. Я предпочитаю делать его сам, себестоиомось окраски стекла обходится примерно 2 коп/стекло (1 литр расходуется примерно на 3-5000 стекол). Коммерческий в разы дороже, а 40 минту в месяц (20 минут раз в две недели) потратить на приготвление гематоксилина вполне приемлемо.
 
ЧаконаДата: Среда, 2010-04-14, 11:05 PM | Сообщение # 24
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 105
Репутация: 5
Статус: Offline
Quote (Patologoanatom)
Не рекомендовал бы так грубо обходиться, а то могут привлечь за домогательства всякого рода.

Имея некий опыт в алхимии превращения обыкновенных биохимиков в добротных лаборантов-гистологов - могу сказать, что незаменимость этих кадров несколько преувеличена, и идет это из советского времени, когда все приходилось делать на санных микротомах, точить и править ножи, киты для окраски (импрегнация по Футу, Вартин-Старри и др.) отсутствовали как класс. Сейчас вот, при наличии хороших ротационных мелкотомов со сменными бритвами, современного оборудования для проводки, окраски и заливки - хистолоджи текнишн получается быстро и просто практически из ЛЮБОГО неофита.

Quote (Patologoanatom)
Ксати, в цивилизованном мире в апреле проходит неделя лабораторных профессионалов, почет и уважение на работе, подарки и.т.д. Ссылка.

Сейчашний мой лаборант - к.б.н. (она раньше изучала экспрессию генов с помощью ПЦР). Боюсь, что такое поздравление она воспримет как гнилую издевку.

Quote (Maxim)
Мы не пользуемся подсинивающими рагентами - наша водопроводная вода достаточно щелочная для подсинивания гематоксилина

Все верно, эти блуинги - коммерческий развод.

Quote (Maxim)
затем обезвоживание в спиртах или ацетонах (чем привыкли), затем ксилол.

Я еще карбол-ксилол в батарею вставляю. Отличное просветляющее средство, кстати, особенно полезное, если не использовать абсолютный этанол (не будет этой знаменитой мути в ксилоле).

Сообщение отредактировал Чакона - Среда, 2010-04-14, 11:22 PM
 
MaximДата: Среда, 2010-04-14, 11:41 PM | Сообщение # 25
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 503
Репутация: 25
Статус: Offline
Quote (Чакона)
идет это из советского времени, когда все приходилось делать на санных микротомах, точить и править ножи, киты для окраски (импрегнация по Футу, Вартин-Старри и др.) отсутствовали как класс. Сейчас вот, при наличии хороших ротационных мелкотомов со сменными бритвами, современного оборудования для проводки, окраски и заливки

Это Вам опять же повезло, что такое хорошее снабжение.
А у нас так и осталось все оборудование на уровне 60-х и не наша вина в том. Просто приходится выкручиваться и выживать с тем, что имеем и в рамках существующего бюджета. Да и большая часть гистологических лабораторий России имеет такое же оснащение и старинные технологии.
Действительно, за рубежом, там где все автоматизировано, лабораторные помощники загружают и выгружают кассеты из процессора, стойки со стеклами в стайнеры и каверслипперы. Для этих опреаций особого ума и образования не нужно - главное четкое исполнение (руководители лабораторий экономят таким образом на зарплате лаборантов). Лаборанты же заливают блоки, режут, красят гистохимию и ИГХ, готовят растворы.
Но, невзирая на всю эту автоматизацию, назревает новая проблема, о которой у нас еще не горворят, пока в лабораториях еще есть достаточно старых кадров и тех, кто умеет все делать руками и думать головой: как проводить и красить, если поломался процессор или стайнер? Как выполнить окраску, если купили набор, а окраска не получается, и ждать следующей закупки некогда? За рубежом сейчас все чаще стали сталкиваться с такой проблемой, когда молодежь не может делать вручную, что можно было бы. И здесь нужны грамотные и опытные работники и хорошая подготовка. Дело патологов - диганостика, а лаборантов - технология.

Жесткими требованиями можно и нужно исправлять ситацию, когда для работы все есть ,а лень мешает. Как исправить ситуацию, когда лаборанты хотят делать лучше, а нечем?
Кому стучать и по какому месту?

 
ЧаконаДата: Четверг, 2010-04-15, 0:01 AM | Сообщение # 26
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 105
Репутация: 5
Статус: Offline
Quote (Maxim)
Жесткими требованиями можно и нужно исправлять ситацию, когда для работы все есть ,а лень мешает. Как исправить ситуацию, когда лаборанты хотят делать лучше, а нечем?
Кому стучать и по какому месту?

Кабы я знал... Мне - да, повезло. Но и ручками я какое-то время тоже поработал, без стейнеров и тишью процессоров.

Quote (Maxim)
Но, невзирая на всю эту автоматизацию, назревает новая проблема, о которой у нас еще не горворят, пока в лабораториях еще есть достаточно старых кадров и тех, кто умеет все делать руками и думать головой: как проводить и красить, если поломался процессор или стайнер? Как выполнить окраску, если купили набор, а окраска не получается, и ждать следующей закупки некогда? За рубежом сейчас все чаще стали сталкиваться с такой проблемой, когда молодежь не может делать вручную, что можно было бы. И здесь нужны грамотные и опытные работники и хорошая подготовка. Дело патологов - диганостика, а лаборантов - технология.

А вот это фигня. Дело в том, что автоматические проводки-заливки-окраски-заключения (резку все же лучше делать не автоматически) - только лишь повышение эргономичности и аккуратности работы, а так никаких особых нововведений не содержат, по сравнению с Вальдейерами, Соболевыми и Ромейсами. Греть парафин в колбе на плитке (в термостате) или в парафиновой ванне заливочной станции - суть процесса заливки не меняется. И потом, за рубежом в случае поломки никакой катастрофы не возникнет - все оборудование там обслуживает фирма, которую тотчас же вызовут и поломку исправят (Впрочем, у меня в лабе стоит-таки пустой термостат на всякий такой случай - все же в России живем).

Да, и еще один момент. Хотя аутостейнер позволяет забивать в него много программ окраски - все-таки реально даже Ван-Гизон на нем не делаем, а про ШИК или там Гимзу какую-нибудь и говорить нет смысла - это все только ручками (не будешь же из-за нескольких стекол в неделю заполнять реактивами большие ванны и гонять по ним почти пустые кассеты). Массона или Фута вообще никакой дурак в стейнере делать не будет. Полагаю, что наши коллеги за бугром тоже в таких случаях обходятся без агрегатов.

Сообщение отредактировал Чакона - Четверг, 2010-04-15, 0:21 AM
 
MaximДата: Четверг, 2010-04-15, 0:24 AM | Сообщение # 27
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 503
Репутация: 25
Статус: Offline
Да, старые мастера честно и открыто описывали предлагаемые методы и даже отмечали, пробовали они сами его делать или нет.
Вот поэтому до сих пор их читают, им доверяют и цитируют их.
Сейчас все больше стало коммерческих наборов (производители чего-то боятся; деньги, дескать зарабатывают), состав засекречен: чтобы техник не навредил, а только честно исполнял. Разуммется физические и химические принципы никто не отменял и не отменит. Просто отбивают охоту узнавать и уметь использовать. Грамотный техник не навредит и с самодельными реактивами.
 
ЧаконаДата: Четверг, 2010-04-15, 0:32 AM | Сообщение # 28
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 105
Репутация: 5
Статус: Offline
Quote (Maxim)
Сейчас все больше стало коммерческих наборов (производители чего-то боятся; деньги, дескать зарабатывают), состав засекречен: чтобы техник не навредил, а только честно исполнял.

Это про какие такие наборы, что их даже не воспроизвести?
Я таких не знаю.
Реально нужны киты на серебрянные методики, ибо проще купить набор, чем геморроиться с самопальными реактивами (впрочем, последнее возможно при избытке времени, энтузазизма и старых запасов). Еще вот мне как-то понадобился Грам-Вейгерт - и что? Оказалось, что анилиновое масло достать довольно трудно (и это в Москве!), куда проще купить набор.

Сообщение отредактировал Чакона - Четверг, 2010-04-15, 0:36 AM
 
MaximДата: Четверг, 2010-04-15, 0:52 AM | Сообщение # 29
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 503
Репутация: 25
Статус: Offline
Грам-Вейгерт не единственный метод для окраски бктерий. Есть еще Brown-Brenn, Brown-Hopps, Twort и другие, которые имеют одинаковую химическую основу.
Я пользуюсь методом Грама.
Довести срезы до дистиллированной воды любым принятым в лаборатории способом.
1% водный кристаллический (генциановый фиолетовый) 1 мин, промыть дист. водой.
Раствор Люгля (водный раствор) несколько секунд, промыть дист. водой.
Ацетон (до обесцвечивания среза) или 95% этанол, промыть подкисленной дистлиированной водой (1 капля CH3COOH).
1% водный нейтральный красный 30 секунд.
Обезводить, просветлить, заключить.
Я с анилином делал окраску много лет назад (всего 3-4 раза), пока не нашел вполне подходящую замену ему (спирт или ацетон).
Не знаю, что сейчас поставляют в наборах по Граму.
Анилин (аминобензол, анлиновое масло) и пятнадцать лет назад, и сейчас очень просто купить в любой фирме, торгующей реактивами. (Лично я не хочу возиться с канцерогенами, даже в наборах!) Другие красители также доступны в порошках за копейки. Сранвите со стоимостью любого аналогичного набора в любой фирме. Таже песня и с серебром. Однажды купить по минимальной упаковке реактивов - и можно работать 100 лет. И таже однажды все разводиться и разливается по капельницам и пользоваться можно ничуть не хуже наборов, а деньги потратить на что-то более важное и нужное.
 
ЧаконаДата: Четверг, 2010-04-15, 11:21 AM | Сообщение # 30
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 105
Репутация: 5
Статус: Offline
Quote (Maxim)
Ацетон (до обесцвечивания среза) или 95% этанол, промыть подкисленной дистлиированной водой (1 капля CH3COOH).

Я правильно понимаю, что с ацетоном или со спиртом, но без анилина все-таки Грам получается плохо?

Quote (Maxim)
Я с анилином делал окраску много лет назад (всего 3-4 раза), пока не нашел вполне подходящую замену ему (спирт или ацетон).

А насчет канцерогенности анилина - Бог с Вами... По-моему, в микротехнике вообще об этом беспокоиться странно... Тот же дихромат калия или бензидин...

Добавлено (2010-04-15, 11:21 Am)
---------------------------------------------
Пардон, из контекста следует, что замена спиртом или ацетоном все-таки вполне заменяет анилин.

 
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Автоматизированная система окрашивания (автостейнер) (Методика окрашивания)
Страница 2 из 4«1234»
Поиск: