Вы вошли как Гость
Текущая дата: Пятница, 2024-04-26, 1:34 AM
|
Автоматизированная система окрашивания (автостейнер)
|
|
| Maxim | Дата: Четверг, 2010-04-15, 5:05 PM | Сообщение # 31 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Да, всегда отличный результат и при использовании ацетона и спирта в окраске Грама. Анилин нужно убирать.
Кстати, карбол-ксилол - тоже пережиток прошлого и жуткая гадость (для лаборантов).
Я потратил несколько лет на то, чтобы удалить карболку, ртуть, хлороформ, толуол, бензол и даже ксилол максимально из технологического процесса (проводки и окраски) в нашей лаборатории. На это ушло много сил, особенно на убеждение лаборантов, что эти вещества крайне вредны для здоровья. Теперь все счастливы и довольны, что этот вред минимизирован.
Бихромат калия и бензидин используются все же несравненно реже и в гораздо меньшем количестве, чем ксилол и аналоги.
Вот остается только один реактив, который никак не удается убрать из процесса приготовления препаратов - это ксилол. Без него не получаются препрараты - это среда для заключения (полистирол или DPX). Все остальные этапы окраски прекрасно делаются без ксилола.
А то, что в процессорах не делаются гистохимические окраски - не согласен. Я сам видел достаточно большие и зигруженные лаборатории, в которых партиями красят и ШИК с альциановым синим и азур-эозин и даже серебрят.
За рубежом постоянно проводят мониторинг испраений только двух основных реактивов - кислол и формальдегид.
|
| |
| |
| Чакона | Дата: Четверг, 2010-04-15, 11:03 PM | Сообщение # 32 |
|
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 109
Статус: Offline
| Quote (Maxim) Кстати, карбол-ксилол - тоже пережиток прошлого и жуткая гадость (для лаборантов). Отчего же? Если тяга хорошая... По-моему, очень неплохая просветляющая среда. Без него, разумеется, можно, но с ним - как будто получается лучше. Quote (Maxim) Я потратил несколько лет на то, чтобы удалить карболку, ртуть, хлороформ, толуол, бензол и даже ксилол максимально из технологического процесса (проводки и окраски) в нашей лаборатории. На это ушло много сил, особенно на убеждение лаборантов, что эти вещества крайне вредны для здоровья. Теперь все счастливы и довольны, что этот вред минимизирован. Я тоже планирую перейти на изопропанол. Quote (Maxim) А то, что в процессорах не делаются гистохимические окраски - не согласен. Я сам видел достаточно большие и зигруженные лаборатории, в которых партиями красят и ШИК с альциановым синим и азур-эозин и даже серебрят. Я говорю исключительно про текущую рутинную патоморфологию и не имел ввиду какие-то сверхкрупные медицинские центры-небоскребы, где для гистохимии можно устроить отдельную лабораторию. Конечно, если лаба занимается, например, экспериментальными гломерулонефритами - там грех в автостейнер ШИК не пустить. Дело не в технической невозможности, а просто в ненужности. Кстати, раз Вы делаете в ручную серебрянные методы - может, подскажете, где заказать хлорное золото? 
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Пятница, 2010-04-16, 9:12 PM | Сообщение # 33 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Quote (Чакона) Отчего же? Если тяга хорошая... По-моему, очень неплохая просветляющая среда.
Никаких перимуществ перед обычным ксилолом, кроме того, что не годится для многих гистохимических окрасок (выцветают).
А также ксилол и прочие ароматические соединения - это признанные канцерогены.
Помните, что ксилол как и карболка проникают в организм двумя путями: через лекгие и через кожу. Нет таких перчаток, которые устойчивы к ксилолу и карболке. В обоих случаях ксилол задерживается минимум на 6-10 дней в жировой ткани, а потом медленно метаболизируется через почки. При повторном воздействии куммулируется. Нектороые подробности и ссылки можно найти здесь:
Annals of Diagnostic Pathology 2007; Vol.11(5): 334-339. Если нужно, могу запросить текст у автора.
А здесь написано о том, чем опасен ксилол и как его удалить из гистологической лаборатории:
Annals of Diagnostic Pathology 2009; Vol.13(4): 246-256. Имеется полный текст. Проводка с изопропанолом имеет много преимуществ перед методом со спиртом и ксилолом. Но эта тема должна обсуждаться отдельно. Quote (Чакона) может, подскажете, где заказать хлорное золото?
Да, в понедельник подниму бумаги и напишу где заказывали. Мы купили его всего 4-5 лет назад и без особых нервов и проблем. Теперь этой ампулы хватит очень надолго. Кстати, если нет хлорного золота, то и без него можно работать или подобрать метод, в котором оно не требуется. Очень много методов выявляют те же стурктуры, но несколько разными способами. Какие структуры интересуют и какой именно метод серебрения?
|
| |
| |
| Чакона | Дата: Суббота, 2010-04-17, 2:16 AM | Сообщение # 34 |
|
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 109
Статус: Offline
| Quote (Maxim) Никаких перимуществ перед обычным ксилолом, кроме того, что не годится для многих гистохимических окрасок (выцветают).
А также ксилол и прочие ароматические соединения - это признанные канцерогены. Да не такие уж и признанные... Согласно данным IARC, ксилол весьма слабый канцероген и то, в очень высоких дозах. Вот нефротоксичность его актуальна, да - быстрее умереть от интоксикации, чем дождаться ксилольного рака. Формалин тоже к канцерогенам относят в некоторых списках, а его воздействия избежать куда труднее (вообще, я отношусь к этим всем "канцерогенам" с некоторым скепсисом - они нас настолько плотно окружают, начиная от мебели из ДСП и копченой колбасы и кончая радиоактивным гранитом набережных - что опасаться следовых паров ксилола кажется несколько наивным; я много работал с по-настоящему сильными канцерогенами, типа метилнитрозомочевины: если их не есть за завтраком, то особой опасности они не представляют). Quote (Maxim) Да, в понедельник подниму бумаги и напишу где заказывали. Мы купили его всего 4-5 лет назад и без особых нервов и проблем. Теперь этой ампулы хватит очень надолго. Кстати, если нет хлорного золота, то и без него можно работать или подобрать метод, в котором оно не требуется. Очень много методов выявляют те же стурктуры, но несколько разными способами. Какие структуры интересуют и какой именно метод серебрения? Для чернения срезов после серебрения ретикулиновой стромы по Футу. Очень обяжете, ибо потребность велика (диффдиагностика ателектазов и интерстициальных пневмоний, выяснение гистогенеза мышиных опухолей, на которые жалко антител и т.д.).
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Понедельник, 2010-04-19, 5:33 PM | Сообщение # 35 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| В приложении протокол окраски для ретикулярных волокон, которым любезно поделился Rene Buesa. Я перевел его на русский язык. Пользуюсь им сам и он получается в других российских лабораториях с очень хорошими результатами.
От себя могу добавить:
1. Чтобы сеть волокон не прерывалась, тощина срезов должна быть не меньше 5-6 мкм.
2. Продолжительное воздействие раствора хлорного золота может вызвать перекрашивание ретикулярных волокон и они будут выглядеть красными при заключении стекол.Добавлено (2010-04-19, 5:33 PM)
---------------------------------------------
Как обещал, по хлорному золоту.
На упаковке прочел следующее: золтохлористоводородная кислота (ч), массовая доля золота не менее 48%. Производитель: ОАО "Аурат", г. Москва. Это предприятие существует и поныне. Сегодня зашел на их сайт и там есть все контакты (ссылки пока еще не научился прикреплять, извините). В Google можно найти и других производителей и любых крупных поставщиков реактивов, которые продают это. Вот что рекомендовал по хранению реактива J. Kiernan в окрятбре 2005 года в Histonet:
Хлорное золото (означает терахлорауриновую кислоту или ее динатриевую соль) не нужно хранить в холодильнике и оно не светочувствительное. Водные растворы хранятся годами в стеклянных сосудах на обычной полке. Они медленно ухудшаются при обычном использовании, становятся светло-желтыми с тонким сероватым блеском и могут быть повторно восстановлены.
Метод восстановления прост, и вы восстановите половину оригинального хлорного золота. Относительно деталей см.:
Stain Technology 52:245-248 (1977).
(Лично у меня нет доступа к этому журналу и этой статьи) А вот так правильно пригтовить реактивы для окраски:
1% Основной раствор – 1 мл пузырек в 99 мл дистиллированной воды. Разбить пузырек с хлорным золотом с помощью алмазного карандаша и поместить пузырек в большую небьющуюся стеклянную бутыль. Прилить половину воды (примерно 45 мл). Накрыть крышкой и сильно трясти. Когда пузырек разобьется, прилить еще 45 мл дистиллированной воды. Профильтровать.
0,1% - 10 мл основного раствора 1% хлорного золота и 90 мл дистиллированной воды.
0,2% - 20 мл основного раствора 1% хлорного золота и 80 мл дистиллированной воды.
(AFIP, Laboratory methods in histotechnology, 1994, Chapter 3).
|
| |
| |
| Чакона | Дата: Среда, 2010-04-21, 3:51 AM | Сообщение # 36 |
|
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 109
Статус: Offline
| Да, спасибо. Вы еще обещали назвать место, где можно купить хлорное золото.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Среда, 2010-04-21, 6:03 AM | Сообщение # 37 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| ОАО "Аурат". www.aurat.ru
Адрес: Россия, Москва, 125438, 4-й Лихачёвский пер., д.6
тел. (495) 1533589; факс: 2342506.
почта: office@aurat.ru
я думаю, у них можно уточнить координаты отдела продаж или дистирбьютора.
Мы покупали реактив почти 5 лет назад. Изменились и схемы закупок и у нас уже нет даже того поставщика, через которого мы его покупали. Хорошо, что производитель остался.
|
| |
| |
| eshengals | Дата: Среда, 2011-07-20, 1:30 PM | Сообщение # 38 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 6
Статус: Offline
| Есть вопрос по поводу автостейнера. Нам ставят AUTOSTEINER XL Leica, говорят надо поставить фильтр на воду. Но ведь в протоколах используется дистиллят, по крайней мере до гематоксилина. Я задумалась - не подпортит ли водопроводная вода, пусть и фильтрованая (это ж просто механическая очистка), качество окраски препаратов. Инженер говорит, что вручную дистиллят заливать не вариант - прибор будет постоянно выдавать ошибку. Можно, конечно, попробовать, что получится, но есть надежда на коллективный разум))) Коллеги, у кого есть подобный прибор с автоматической подачей воды, как вы вышли из ситуации?
|
| |
| |
| SOVA | Дата: Четверг, 2011-07-21, 6:42 PM | Сообщение # 39 |
 Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 81
Статус: Offline
| Приветствую! Нам недавно поставили стенер, но MEDITE от Stormoff. Работает от проточной водопроводной воды. Стоит обычный механический фильтр. Но у нас в городе очень плохое качество воды. Сильно ожелезнена. Не всегда фильтр все улавливает, и на дне ванн появлеется ржавые крупинки. Стараемся срзу все промыть и проверить. Качество промывки отличное. С дистиллированной водой мне кажется возни много, но может есть смысл и ей работать. На нашу удачу, приобретена модель , работающая как стиральная машинка.
|
| |
| |
| eshengals | Дата: Понедельник, 2011-07-25, 5:48 PM | Сообщение # 40 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 6
Статус: Offline
| Наш прибор тоже как стиральная машина))) - подключается к холодной воде центрального водоснабжения, отработанную воду сливает в канализацию. И вода в Екатеринбурге тоже не фонтан. По сути вопрос и был в том, не портит ли промывка в водопроводной воде качество окраски препаратов. Нас учили (когда еще по баночкам все сами перекладывали), что надо в гистологической батарее до гематоксилина использовать исключительно дистиллят, иначе случится страшное...(что именно, не знаю, никогда даже и не пытались преступить это священное правило)))). Но если у вас все хорошо красится с водопроводной водой, значит тоже так и сделаем. Спасибо за помощь.
|
| |
| |
| SOVA | Дата: Понедельник, 2011-07-25, 8:15 PM | Сообщение # 41 |
|
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 81
Статус: Offline
| eshengals, попробуйте покрасить пробную партию того, чего не страшно запортачить, например аппендиксы, или плаценты. Вам конечно придется приспосабливать протокол окораски под стейнер. Есть разница между руками и машиной. она неприклонна, и четко отмеряет время в каждом сосуде, в отличиеот рук и настроения лаборанта. Еще все зависит и от зрелости гематоксилина, яркости вашего эозина, какой он спиртовый или водный. Но какое чудо, когда освобождается время лаборанта на что то другое, более творческое и необходимое для патолога, например для сложных окрасок. У нас еще программа окрсаки шеек матки по Папаниколау на стейнере стоит. Выручает конечно. В будюющем переход на Ван _гизон и альциановый миний. Последние тогда.ю когда закупим сухие реактивы и отработаем протокол руками, как советовал Maxim. Совет. Меняйте почаще фильтр. Мы сегодня сменили 1 фильтр, стоял 3,5 мес ( лаборанты никак слесарей позвать не могли). так там такая на нем жуть скопилась. мы купили обычный механический фильтр и сменные кассеты к нему. Обошлось в пределах 1000 рублей. Но душа сейчас спокойнее. Добавлено (2011-07-25, 8:15 PM)
---------------------------------------------
Сорри за опечатки, клавиатура не срабатывает.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Понедельник, 2011-07-25, 9:51 PM | Сообщение # 42 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Очищенная вода для таких машин, как стейнер нужна как минимум для того, чтобы не пришлось кланяться техникам и слесарям.
Поэтому систему очистки иметь за разумную цену всегда полезно. Даже простейшая недорогая система очистки с общими фильтрами, фильтом обезжелезивания, фильтром тонкой очистки будет вполне сносно готовить промывочную воду под окраску Г-Э. А если еще и мембранный фильтр и блок деоинизации поставить - это просто изумительно. Не стоит подключать дистиллятор. Воды и электроэнергии уходит уйма, жара, испарения, а толку мало. Установка для деионизации типа "Медиана-фильтр" или что-то аналогичное будут очень полезными.
По всем канонам промывка перед красителем делается в дистиллированной воде, если нет других указаний. Тем самым мы гарантируем, что не занесем избытка щелочи в кислый краситель (вода во многих регионах слабощелочная из-за избытка солей) и наборот. Именно потому, что игнорируется это правило, первые партии с новым гематоксилином и эозином окрашиваются хорошо, а потом лаборанты говорят, что красители "сдохли" и выливают старые и заливаютновые реагенты. Проблема решается подкислением растворов, имеющих кислую рН. Это и гематоксилин и эозин. Избыток воды, даже дистиллированной также сокращает срок "жизни" красителей, поэтому избыток воды принято стряхивать со стекол.
Но подщелоченная вода бывает полезна на этапе подсинивания ядер после окраски гематоксилином и дифференцировки. В идеале ее такую воду замещают либо буферными растворами с рН около 7.4-8.0 или т.н. подсинивающими растворами. Этим достигается красивый синий цвет ядер.
Еще один важный момент состоит в том, какие структуры использовать в качестве контроля для Г-Э. Чаще это аппендикс или плацента, поскольку здесь пристутвуют практически все структуры, которыми можно продемонстрировать оттенки обоих красителей.
И очень важно понимать, какой толщины срезы окрашиваются в одной и той же партии. Если все срезы имеют одинаковую толщину, то в стейнере будут получаться результаты одинакового качества (разумеется, протокол необходимо оттестировать руками перед программированием стейнера). Если же в лаборатории работают микротомами, качество которых оставляет желать лучшего, то срезы будут иметь разную толщину в одной партии и тогда никаких претензий к стайнеру быть не может.
Возвращаясь к системе очистки рекомендую перед любым фиьтром поставить "грязевик" типа "Honic", который отлично удерживает макроскопически заметную грязь и ржавчину из труб. Это мы видим, что в лаборатории поставили новый пластиковый водопровод, но под землей проложены трубы еще в надцтатом году и при отключении воды хотя бы на один час перед тем, как получить на вид не ржавую воду, ее нужно спускать минут 20-30.
|
| |
| |
| eshengals | Дата: Среда, 2011-07-27, 6:25 PM | Сообщение # 43 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 6
Статус: Offline
| Большое всем спасибо за исчерпывающую информацию))) У нас НИИ, поэтому поток материала гораздо меньше, чем в клинике. Фильтров, думаю, хватит на дольше.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Понедельник, 2011-08-01, 9:41 PM | Сообщение # 44 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Уважаемый eshengals!
Если не секрет, какой у Вас поток идет ежедневно? Сколько блоков в год делаете? (просто интересно).
|
| |
| |
| eshengals | Дата: Среда, 2011-08-03, 1:54 PM | Сообщение # 45 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 6
Статус: Offline
| В нашем случае уместнее говорить о годовом потоке, потому что он крайне неравномерен. В год около 2000-3000 образцов, может чуть больше. При этом иногда бывает слишком много желающих отправить материал в проводку именно сегодня - корзины от Leica TP1020 не хватает. Ну и соответственно, что касается окраски, то неделю никто не красит, а бывает в день по 80 стекол.
|
| |
| |
|
|
