Железный гематоксилин

Чакона

Дата: Среда, 2010-04-14, 6:20 PM | Сообщение # 1

Полковник

Группа: Патоморфологи

Сообщений: 109

Репутация: 5

Статус: Offline

Давным-давно метод окраски железным гематоксилином был очень популярен у гистологов и патоморфологов. Когда-то его рекомендовали для ядерной дрокраски при использовании метода ван-Гизон, а также для выявления миофибрилл в рабдомиосаркомах, лейомиосаркомах и миоэпителиомах. В хороших руках дает четкие черно-белые препараты, чем-то напоминающие контрастные рисунки тушью. Очень отчетливая картина хроматина. Недостатки - довольно продолжителен (впрочем, есть модификация Гурвича, которая этот недостаток исправляет) и не позволяет описывать препарат с позиций эозинофилии-базофилии.

Пользовался ли кто-то на форуме этой методикой? Какие впечатления?

Сообщение отредактировал Чакона - Среда, 2010-04-14, 6:21 PM

Maxim

Дата: Среда, 2010-04-14, 10:12 PM | Сообщение # 2

Профессионал

Группа: Модераторы

Сообщений: 555

Репутация: 25

Статус: Offline

Не могу с Вами согласиться по поводу "древности" этого метода. Каждая гистологическая лаборатория практически ежедневно и сегодня пользуется окраской Van Gieson, которая включает обязательный этап - окраску ядер железным гематоксилином.
Железных гематоксилинов достаточно много. Мне известно более 20 различных формул этого красителя (уверен, о чем-то еще не слышал).
Лучший метод из всех железных гематоксилинов - гематоксилин Heidenhain. Это не мое мнение, а гистотехнологов по обе стороны Атлантики и экватора. Правда, делается окраска двое суток. Есть более быстрые методы (около 10-15 минут), и в любом из них важно использовать сертифицированный краситель и неиспорченные (негидролизованные) растворы солей. Признак гидролиза солей железа: выпадение осадка или изменение цвета раствора на зеленый. Обычно используется спиртовой раствор гематоксилина. Он хранится очень долго в отдельной емккости.
Преимущества железного гематоксилина: черная четкая окраска хроматина и некоторых других структур (веретена деления и т.д.). А также правильно выполненная окраска не извлекается солянокислым спиртом.
Методы с железным гематоксилином действительно годятся для черно-белой микрофотографии. Но тогда, когда были разработаны большинство этих методов (до 50-х годов 20 века) не было компьютеров и систем редактирования изображений. Сейчас любое цветное изображение можно представить в черно-белом цвете, если необходимо.
Если хотите видеть эозинофилию и базофилию - остановите свой выбор на других окрасках (квасцовый гематоксилин-эозин или азур-эозин). В азур-эозине сложнее, потому что еще прибавляется метахромазия...
Гематоксилин-эозин позволяет получить очень красивую и четкую окраску хроматина при фиксации 10% нейтральным забуференным формалином и адекватной проводке. Есть масса способов и ухищрений, чтобы добиться красоты в окраске гематоксилин-эозин, и если исполнитель видел и знает, как это сделать - Вам очень повезло.
Если вы хотите приблизить качество своих микрофотографий к нарисованным картинкам в старых гистологичеких руководствах - это бесполезное занятие, поскольку при рисовании рисуют те структуры, которые видны в нескольких плоскостях, а фотография отображает только то, что находится в плоскоксти фокуса - все, что не в фокусе получается в виде теней, особенно на больших увеличениях. Лучше разоритесь на рисовальную пластинку к микроскопу.
Для окраски поперечной исчерченности более подходящим является окраска фосфорновольфрамовым гематоксилином Mallory (P.T.A.H.). Поперечная исчерченность сине-черная и красиво контрастирует с яркокрасным коллагеном. Модификаций этой окраски также несколько, в зависиомсти от наличия реактивов (в основном протрав).
Удачи!
Максим.

Чакона

Дата: Среда, 2010-04-14, 10:47 PM | Сообщение # 3

Полковник

Группа: Патоморфологи

Сообщений: 109

Репутация: 5

Статус: Offline

Хм... На самом деле, я неплохо владею микротехникой, в том числе и методикой Гейденгайна. Так что технические подробности мне ни к чему - они хорошо известны, да и легко находимы в руковдствах (у того же Меркулова). Ван-Гизон вовсе не требует обязательного железного гематоксилина - отличная окраска идет и с любым другим. Про фосфорномолибденовый гематоксилин я также прекрасно осведомлен. Забуференный формалин - в моей лаборатории стандартный фиксатор, никогда иначе и не готовим. Гематоксилин-эозин - настолько деревянная методика, что "некрасиво" может идти только у совсем уж клинических кретинов.

Вопрос был о другом - многие ли из коллег все еще используют Ж.Г.? Я его делал всего несколько раз, да и то - только "для души", а 100% знакомых патологов вообще никогда таких препаратов не видели (университетский курс гистологии не в счет).