Проводка и заливка - Страница 10 - Форум
 
Проводка и заливка - Страница 10 - Форум
[ Новые сообщения · Участники · Правила форума · Поиск · RSS ]
Вы вошли как Гость
Текущая дата: Пятница, 2016-12-09, 10:43 AM

Страница 10 из 34«12891011123334»
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Проводка и заливка (Детали разныя)
Проводка и заливка
MaximДата: Пятница, 2010-07-23, 3:27 PM | Сообщение # 136
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Уважаемый Vladpatholog!
Я очень рад, что у Вас идет движение к лушчему и есть первые результаты.
В отношении проводки мы с Буэсой в статье статистически показали, что разницы между ИПА+масло и ацетон - уайт-спирит нет.
Буэса также показал в своей работе, что при сравнении спирт-ксилола и ИПА-этанол-масло также никакой разницы статистически не выявлено.
В отношении депарафинирования также мы не нашли статистических отличий между традицонными способами депарафинирования и мыльным раствором.
Вся разница в безопасности для персонала, окружающей среды, дешевизне и некотром упрощении методов.
Что касается этапов после эозина: дистиллированная вода - промыть и далее сушить в термостате до полного высыхания. Обычно достаточно 5-10 минут. Затем заключение. Никаких растрескиваний, мути и серого песка быть не должно. Пробуйте смело.

Добавлено (2010-07-23, 3:27 PM)
---------------------------------------------
Перекрас при окраске в партиях бывает как и недокрас одианоково часто. Мы обычно окрашиваем по 20-25 стекол одновременно. Есть срезы толще и тоньше. Обычно ориентируются либо на тонкие, либо на толстые срезы. Главное - четко отдифференцировать гематоксилин.
Еслииспользуется прогрессивная формула, например Mayer, тогда перекраска не наступает и дифференцировка не нужна. Это один из вариантов выхода.
Другая трудность - отмывка эозина. В толстых срезах его больше и вымывается оттуда дольше. Поэтому тонкие срезы будут бледнее. Тут рецептов нет - по одному стеклу никто возиться нет смысла, особенно если в день красится партий 30-40. Поэтому надо стараться получить одинаковую толщину. Это стандартизация вырезки, фиксации, проводки и микротомии. Все это привести в порядок очень сложно и трудно, но можно при овместных усилиях всех сотрудников.

Vladpatolog, а этот срез (из ответа №126) был проведен с ксилолом или с маслом?
И еще один вопрос: а для чего такое количество ксилолов и спиртов в батарее для окраски? Как часто все это меняется, после скольки стекол выливаются первые реагенты?

 
VladpathologДата: Пятница, 2010-07-23, 3:45 PM | Сообщение # 137
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Репутация: 13
Статус: Offline
этот срез выполнен с маслом и изопропанолом. депарафинизация фэйри. Фокус с фэйри вообще на ура шел.
 
VladpathologДата: Пятница, 2010-07-23, 3:46 PM | Сообщение # 138
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Репутация: 13
Статус: Offline
А ксилолы в конце и карбол-ксилол, лаборанты относят к просветлению. Я говорю - уберите ксилолы вообще со стола, а они смотрят и не понимают. Утверждают, что они просто необходимы.
______________________
Они считают, что после эозина просто необходимо все эти ксилолы пробежать.
____________
Как часто смены идут не интересовался.
И вот еще вопрос вопросик: что все-таки после эозина? Т..е. у нас так -( эозин)-(вода)-(спирт1)-(спирт2)-(спирт3)-(спирт4)-(спирт5)-(спирт+фенол+ксилол)-(карбо+ксилол)-(карбол+ксилол)-(ксилол1)-(ксилол2)-(ксилол3) -(ксилол4)-(покрываем)-(сушим).
Что лишнее?
Максим, вот еще тезис из вашей статьи:
Quote
6. После окраски перед заключением удаляют лишнюю воду...

Т.е., что - после эозина сполоснуть в воде и сушить - потом полистерол? А они не "скукошатся" пока сушу их?
 
ЧаконаДата: Пятница, 2010-07-23, 7:25 PM | Сообщение # 139
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 105
Репутация: 5
Статус: Offline
Quote (Vladpatholog)
Т.е., что - после эозина сполоснуть в воде и сушить - потом полистерол? А они не "скукошатся" пока сушу их?

Вот-вот. Я так когда-то делал, чтобы окраску по Гимзе, чувствительную к спирту, не испортить (сушил минут 15 на воздухе). Смотреть можно, но скукоживание нежных структур было.

Добавлено (2010-07-23, 7:25 PM)
---------------------------------------------
Впрочем, давайте не будем рассуждать - а просто попробуем. Одно-два испорченных (да и то - не испорченных, а лишь несколько худшего качества) стекол, и то, даже в самом плохом случае того стоят. Может, после фейри и при просушке в термостате все получается лучше.

 
VladpathologДата: Пятница, 2010-07-23, 7:40 PM | Сообщение # 140
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Репутация: 13
Статус: Offline
Хорошо бы если Maxim, все же разместил фото как выглядят срезы после этакой сушки, но про фэйри я тоже не верил - а оно очень даже работает...может и здесь зря я сомневаюсь.
Мне вот важно - после эозина, что Максим делает потом - вода и сушить что-ли? Или все же есть спирты?
 
MaximДата: Пятница, 2010-07-23, 8:13 PM | Сообщение # 141
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
после эозина сполоснуть водой и сушить в термостате 5-10 минут. Никакого спирта или чего-то еще. Полистирол одновременно просветляет и консервирует.
Немного теории о том, почему мы видим окрашенные струткры и для чего кислол напишу чуть позже. Пока прилагаю фото.
10%NBF, ИПА-масло, фэйри - сушка в трмостате - полистирол.
Пока эти фотографии. Поищу еще.
Прикрепления: 7297607.jpg(232Kb) · 1699851.jpg(169Kb)
 
MaximДата: Пятница, 2010-07-23, 8:21 PM | Сообщение # 142
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Выше фото плаценты и метстаз рака молочной железы в лимфоузел. Окраска ШИК-альциановый синий х100.

Ниже - миокард аутопсийный и почка. Я специально даю большие увеличения.

Прикрепления: 2430791.jpg(106Kb) · 2962564.jpg(175Kb)
 
MaximДата: Пятница, 2010-07-23, 8:55 PM | Сообщение # 143
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
А вот еще пара фото, которые прислал Tony Henwood из Австралии. Он депарафинировал с ксилолом и без. Это минадилна, bcl-6 срезы с одного блока.

Добавлено (2010-07-23, 8:55 PM)
---------------------------------------------
В рутине мы пока еще не готовы использовать метод с фэйри. поскольку для того, чтобы затеваться с ним, нужна баня, в которой будут греться 4-6 емкостей для стоек со стеклами. Менять-то нужно через 2 партии, а у нас ежедневный поток более 30 партий.
Другое делов том, что у нас толстые стекла - толщиной 2 мм. Они подписаны тушью, так как нет матового края и тушь хорошо смывается водой и мыльными растворами. Нам нужно купить примерно 90 000 тонких стекол со шлифованным краем для работы в течение года. И водяную баню. Тогда программно перейдем. Когда делаю ИГХ я провожу мелкие партии через фэйри или когда есть партия гистохимии - для них у меня имеются тонкие стекла. А праллельно пользоваться и тем и другим методом смысла нет: или убирать все вредное со стола или не затеваться.
Кстати, окончательное обезвоживание высушиванием пригодно не для всех гистохимических окрасок. Часть методов все же требует обезвоживания ацетоном, посольку здесь заканчивается дифференцировка.

Прикрепления: 1244939.jpg(242Kb) · 6362909.jpg(233Kb)
 
ЧаконаДата: Пятница, 2010-07-23, 8:57 PM | Сообщение # 144
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 105
Репутация: 5
Статус: Offline
Фото довольно убедительные, однако, жаль, что нет миокарда с ксилолом с того же блока. Что мне не нравилось при простом высушивании - что в таких тканях, типа миокарда, пространства между клетками были намного больше (ощущение отека интерстиция), а лейкоциты в подслизистой кишки при колите выглядели как сдувшиеся воздушные шарики (или сушеные яблоки).
 
VladpathologДата: Суббота, 2010-07-24, 12:29 PM | Сообщение # 145
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Репутация: 13
Статус: Offline
С депарфинизацией не согласен - если есть хоть какая-то возможность, пусть даже частично уменьшить экспозицию нашего носа с ксилолом - нужно это делать. На счет простого высушивания после эозина - попробуем, посмотрим. Вопрос еще по депарафинизации. С bcl-6 понятно, там и температурное восстановление антигенов и pH9,0, но для ИГХ - ряд антител исключают использование высокотемпературных методик выявления антигенов (у нас ретривер для этих целей), а пропускание через фэйри предполагает, что раствор в общем довольно горяченький (пусть и время небольшое) - дак вот мы не разрушим нужные антигены?
 
MaximДата: Суббота, 2010-07-24, 5:36 PM | Сообщение # 146
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Температурная обработка при депарафинировании не должна повредить антгиенам, восстанавливаемых ферментами.
Tony Henwood сообщил мне, что он сравнивал депарафинирование 51 антитела, среди которых были:
Alpha Fetoprotein (ZSA06),
CD 34 (QBEND10)
CD 68 (PG-M1)
Keratin (Broad Spectrum) (AE1/AE3)
Keratin (Low Molecular Weight) (5D3)
Neuroblastoma (NB84a)
AFP лучше выглядел после депарафинирования мыльным раствором, в остальных случаях интенсивность окраски была эквивалентной. Все перечисленные антитела требовали ферментного восстановления антигенов. Статья находится в печати.
В любом случае, все нужно пробовать на контрольных стеклах, а потом сравнивать пары стекол слепым методом, тогда все станет понятно.
 
ЧаконаДата: Четверг, 2010-07-29, 2:09 PM | Сообщение # 147
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 105
Репутация: 5
Статус: Offline
Quote (Чакона)
Фото довольно убедительные, однако, жаль, что нет миокарда с ксилолом с того же блока. Что мне не нравилось при простом высушивании - что в таких тканях, типа миокарда, пространства между клетками были намного больше (ощущение отека интерстиция), а лейкоциты в подслизистой кишки при колите выглядели как сдувшиеся воздушные шарики (или сушеные яблоки).

Quote (С.А.Бобович. К вопросу о патолого-гистологических изменениях внутрисердечных ганглий, М., 1901, стр.47 )
Срез освобождался от парафина при помощи Ol.therebintini и xyloli в равных частях, обжимался пропускной бумагой и обливался б ы с т р о абсолютным алкоголем. Если алкоголь наливать недостаточно быстро, срезы высыхают вследствие испарения растворяющей смеси, и получается сморщивание клеток. Точно также облитые алкоголем срезы необходимо отжимать пропускной бумагой и б ы с т р о переносить в воду; без этой предосторожности на препаратах получаются сморщенныя клетки и искусственныя "перицллюлярные пространства" [....] Когда дифференцировка [в спирт-анилиновой смеси после окраски по Нисслю - Чакона] окончена, срезы необходимо сильно отжать пропускной бумагой и быстро налить Ol.cajeputi. Быстрое обливание необходимо опять-таки необходимо во избежание сморщивания нервных клеток.
 
MaximДата: Четверг, 2010-07-29, 4:43 PM | Сообщение # 148
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Вчера еще раз спецально повторил высушивание срезов после эозина. Никаких сморщиваний лимфоидных элементов и серого песка. Все отлично видно.
 
RomanДата: Воскресенье, 2010-08-15, 11:02 PM | Сообщение # 149
Просто профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 220
Репутация: 7
Статус: Offline
Попробовал сушку после эозина и заключение в полистирол - все хорошо. Главное лаборанты заинтересовались, но тень сомнения осталась у них. Вот теперь нужно убедить депарафинировать в моющем средстве и проводить без хлороформа.

От всего человека вам остается часть...
И. Бродский
 
MaximДата: Воскресенье, 2010-08-15, 11:09 PM | Сообщение # 150
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Я показывал этот метод многим лаборантам из других лабораторий, когда они приезжали к нам на стажировку. Последний раз это было на прошлой неделе. Обычно сомнения больше возникают на этапе обезвоживания и просветления перед заключением. А вот депарафинирование обычно вызывает восторг и воспринимается на ура. Сама идея кажеся безумной на фоне всех этих ксилоов, уайт-спиритов и т.д. Покажите один раз и в память это врежется навсегда. А когда прийдут к использованию, это уже вопросы другие.
 
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Проводка и заливка (Детали разныя)
Страница 10 из 34«12891011123334»
Поиск: