Вы вошли как Гость
Текущая дата: Пятница, 2024-04-19, 11:11 PM
|
Проводка и заливка
|
|
| doctorbi | Дата: Пятница, 2010-12-10, 7:57 PM | Сообщение # 181 |
|
Рядовой
Группа: Проверенные
Сообщений: 6
Статус: Offline
| Приветствую Вас уважаемые коллеги! Сегодня я сделал пробную проводку разных образцов тканей по схеме, который предложил господин Maxim (изопропанол,вазелиновое масло...), получилось весьма неплохо, но только жировая ткань получилась очень ломкая- вся крошится...Может объясните в чем моя ошибка!? В наших краях это первая попытка с изопропанолом...буду очень признателен за любую помощь.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Пятница, 2010-12-10, 8:51 PM | Сообщение # 182 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Уважаемый doctorbi!
Рад приветствовать Вас в рядах "зеленых". Теперь у Вас есть безопасный метод для персонала и окружающей среды.
Проверьте толщину Вашх тканей на вырезке. Жировые ткани лучше делать толщиной не более 2 мм, тогда все бует Ок!
Пришлите мне сообщение на адрес Maxim_71@mail.ru и мы пообщаемся подробнее. Имеется целый ряд публикаций по этому вопросу, я перешлю их Вам.Добавлено (2010-12-10, 8:51 PM)
---------------------------------------------
Уважаемый doctorbi!
А еще проверьте фиксацию: 24 часа, 10% нейтральный забуференный формалин, 2мм толщиной (для жировых тканей), соотношение фиксатор:ткань не меньше 20:1. Если все это так, у Вас не должно быть никаких трудностей.
|
| |
| |
| doctorbi | Дата: Суббота, 2010-12-11, 7:34 AM | Сообщение # 183 |
|
Рядовой
Группа: Проверенные
Сообщений: 6
Статус: Offline
| Спасибо господин Maxim! Проверю фиксацию...
|
| |
| |
| ludvik | Дата: Суббота, 2010-12-11, 9:55 PM | Сообщение # 184 |
|
Лейтенант
Группа: Проверенные
Сообщений: 34
Статус: Offline
| Уважаемые коллегит! насчет мелочи( "гастрики и прочее) - не уверена, что залвают их правильно в формалин. Оставлять на сутки у себя в формалине и потом промывать минут 15 или сколько?
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Понедельник, 2010-12-13, 7:09 PM | Сообщение # 185 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Гастрики дело действительно тонкое. Их фиксация тоже должна быть не менее 24 часов не взирая на маленькие размеры (фиксация - реакция химическая, она заканчивается не ранее 24 часов в кусочках от 0 до 4 мм, а проникает фиксатор кусочки за считанные часы).
У эндоскопистов тоже большие проблемы с закупкой правильного формалина и многие из них прото просят у нас фиксатор. Нам не жалко отдать пару раз в год по 1.5 литра (обычно им этого достаточно). Если время от взятия до доставки в лабораторию составляет 24 часа или больше, мы сразу проводим их. В остальных случаях оставляем до следующего дня. Промываем в проточной воде, чтобы удалить избыток эозина. Хватает 3-5 минут (сами кусочки маленькие). Дальше - проводка.
Самый простой и лучший способ для нас сделать так, чтобы клиницисты пользовались нашим формалином (дать м просто или продать, или показать, где купить).Добавлено (2010-12-13, 7:09 PM)
---------------------------------------------
Уважаемые пользователи минерального (вазелинового) масла!
При закупке этого продукта обязательно обращайте внимание на ВЯЗКОСТЬ.
Она должна быть не выше 12 сантистоксов.
Все неудачи при приготовлении смесей масла и изопропанола возникают либо от ысокой вязкости масла, либо от изопропанола с концентрацией ниже 99.7%.
|
| |
| |
| ludvik | Дата: Воскресенье, 2011-01-09, 4:28 PM | Сообщение # 186 |
|
Лейтенант
Группа: Проверенные
Сообщений: 34
Статус: Offline
| Коллеги! как все-таки правильно получить 10% формалин из закупаемого 40%(39  формалина( формальдегида) и как правильно сделать 10%нейтральный формалин? Спасибо
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Воскресенье, 2011-01-09, 4:55 PM | Сообщение # 187 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Уважаемая Ludvik!
Quote (ludvik) как правильно сделать 10%нейтральный формалин?
Об этом написано в разделе форума: Иммуногистохимия - технические вопросы - фиксаторы - сообщение 16. Приложенный файл.
или здесь: http://ihc.ucoz.ru/forum/17-210-2
В продаже есть только 37% формалин - он же формальдегид. И вам повезет, если до Вас он доедет не выпавшим в осадок. Если есть осадок - хорошо взболтайте канистру и наливайте прямо белую взвесь. Позже она растворится в буфере. Проверьте рН хотя бы индикаторной бумагой.
|
| |
| |
| ludvik | Дата: Понедельник, 2011-01-10, 10:58 AM | Сообщение # 188 |
|
Лейтенант
Группа: Проверенные
Сообщений: 34
Статус: Offline
| Спасибо за ответ. Я думаю, что в больничном аптечном разведении для операционного и биопсийного материала об этом не думают. Надо делать раствор самим и рассылать
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Понедельник, 2011-01-10, 11:53 AM | Сообщение # 189 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Заинтресованные в качестве гистологических ответов клиницисты сами просят у нас формалин и мы им даем его. Для того, чтобы снабдить готовым раствором все обслуживаемые отделения (у нас их около 30), нужны усилия (и время!) не только лаборантов, готовых делать этот раствор в большом количестве, а и средства. Разумеется, медсестры хирургических отделений никогда не дойдут до таких тонкостей, как забуферивание формалина. Эту проблему должно решать руководство гистологической лаборатории на уровне местного управления здравоохранения. У нас этого не случилось...
|
| |
| |
| вивьен | Дата: Вторник, 2011-01-18, 4:54 PM | Сообщение # 190 |
 Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 40
Статус: Offline
| Доброго дня уважаемые коллеги! Заинтересовалась методикой проводки тканей по схеме, который предложил господин Maxim (изопропанол,вазелиновое масло) и депарафинизациею моющим средством. Коллектив лаборантов отделения ждет-недождется опробовать эти методики, но оказалось не просто купить неодходимое. Масло вазелиновое есть только с вязкостью 16 сСт, а насколько я поняла, требуется вязкость 12 сСт максимально. Вопрос: получится ли на более вязком масле или нет?
Спасибо
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2011-01-18, 7:47 PM | Сообщение # 191 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Уважаемая Вивьен! Более вязкое масло (>12 cSt при 50оС) не будет смешиваться с изопропанолом - произойдет расслаивание жидкости. Смысл однородных смесей масла и спирта в том, что это особенные жидкости, в которых одновременно идут два процееса: заканчивается удаление воды и начинается пропитывание жидким парафином = минеральным маслом. Позже жидкий прафин замещается твердым. Вспомните старые руководства по гистологической технике - они рекомендовали пропитывать сначала мягким парафином, а потом твердым. Это имеет смысл, но было забыто, поскольку гистологические ииследования стали популярными и массовыми, началось упрощение и в жертву срокам зачастую приносили качество. Действительно, купить подходящее вазелиновое масло очень сложно, в косметической промышленности используются тяжелые масла, поэтому на рынке они превалируют. Не покупайте вазелинове масло, соответствующее ГОСТу. Оно тоже тяжелое. Однако, есть простой и дешевый выход. Купите в ближайшем автомагазине автомобильное масло И-20А (вертенное масло) и смело пользуйтесь им (не дороже 45 р/л). У него вязкость 11.5 cSt при 50оС, нет добавок. Это масло имеет желтый цвет. В нем есть минимум примесей, которые на качество препаратов не влияют. Белое масло - очищенное. Из-за процедур очистки его цена возрастает в 3-4 раза (120-160р). Все остальное - торговые и транспортные накрутки. Мы пользовались маслом И-20А больше года с отличными результатами. Нам будет интересно знать Ваше мнение и впечталения лаборантов.
|
| |
| |
| вивьен | Дата: Среда, 2011-01-19, 12:52 PM | Сообщение # 192 |
|
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 40
Статус: Offline
| Спасибо, уважаемый коллега, будем пробовать.
|
| |
| |
| SOVA | Дата: Среда, 2011-01-26, 6:06 PM | Сообщение # 193 |
 Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 81
Статус: Offline
| Уважаемый Maxim! Спасибо за ответв ЛС. Весь форум проводки и заливки я даже распечатала для своих лаборантов.
Уважаемые коллеги! Пытаюсь найти причину дубления материала среди ваших советов. Мы пока на пути перехода на изпропиловую проводку. Слишком мы далеко от центров и больших промышленных городов. Ближайших город 250 км, но и там изопропилового спирта не сыскать. Одна надежда на состоятельность электронных торгов и закупку нам изопропанола. В лаборатории работает метод спирт-хлороформ.Так ли я поняла -  дубление материала возможно из за агрессивности самой методки спирт-хлороформ ввиду обезвоживания материала и постоянной его ротации в гистопроцессоре? Сегодня для сравнения запустили АГТ-шку нашу. Там стаканчит только стучит. Надеюсь на получение разницы и на скорый переход на изопропанол.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Среда, 2011-01-26, 8:27 PM | Сообщение # 194 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Уважаемая SOVA! Чтобы ткани не дубились можно сделать следующее: 1. Проверьте адекватность фиксации (Форум » ИММУНОГИСТОХИМИЯ » Технические вопросы » Фиксаторы » сообщение 16 и приложение). Если материал неверно фиксирован - с ним будет происходить все, что угодно, кроме ожидаемых вещей. Фиксация должна быть одинаковой дл всех без исключения объектов. Никто не знает, каким испытаниям будет подвергнут кусочек в дальнейшем. Поэтому готовность должна быть одинаковая у всех. 2. Напишите Ваш проткол проводки и график смены реагентов. Попробуем разобраться с проблемой. Хлороформ штука вредная, но учитывая ваши специфические условия попытаемся навести порядок теми реактивами, которые имеются. Все поправимо. А пока я подозреваю слишком длительное и мощное обезвоживание в спиртах (этанол 95% обладает дубящим действием).
|
| |
| |
| SOVA | Дата: Пятница, 2011-01-28, 7:37 PM | Сообщение # 195 |
|
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 81
Статус: Offline
| Добрый вечер уважаемые Maxim!
Схема проводки у нас слеующая:
1.формалин 24 час;
2.вода в 3-х чашках по 1 часу;
3. 95% спирт I- 1 час;
4. 95% спирт II- 1 час;
5. 95% спирт III- 1час;
6. 95% спирт IV-1,5 час;
7. 95% спирт V- 1,5 час;
8. Хлороформ I- 1,5 час;
9. Хлороформ II- 1,5 час;
10. Парафин I- 1 час;
11. Парафин II -1 час;
Чашки объемом 1,8 л. Спирт меняем при каждом запуске первую чашку все переставляя и последний чистый, с учетом наводнения не разводим . Парафин 1 раз в неделю. Хлороформ 1 раз в неделю (иногда по необходимости) Корзина загружена на 60%. Запуск материала раньше делали каждый день, заполняемость корзины была 30-40% ( 50% когда урожай с плацентами по 6 -7 завязок). Но с целью экономии спирта (расход повышен ввиду здоровых чашек) перешли на запуск через 1 день. Вчера провели эксперимент: загрузили нашу АГТ-шку. Она благополучно застряла в 2 спирте. С утра лаборатны все провели автоматически переставляя сосуды (хандрит каруселька). Мелкий материал дубовый, шейки все горбом встают на стекле.
Схема банальная, но с внедрением нового оборудования вообще перестала работать.
|
| |
| |
|
|
