Проводка и заливка - Страница 16 - Форум
 
Проводка и заливка - Страница 16 - Форум
[ Новые сообщения · Участники · Правила форума · Поиск · RSS ]
Вы вошли как Гость
Текущая дата: Пятница, 2016-12-09, 10:41 AM

Страница 16 из 34«1214151617183334»
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Проводка и заливка (Детали разныя)
Проводка и заливка
MaximДата: Вторник, 2011-02-15, 10:55 AM | Сообщение # 226
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Quote (Январь)
У нас в наличие есть криостат (не замораживающий столик с жидким СО2 или азотом, а именно криостат) - может кто то занимается резкой материала на нем, нам тоже интересно как вы это делаете (тяжело получить хороший срез с лимфоузлов, с обычной ткани - более менее)

Вот вебстраница очень большого мастера по заморозке (Stephen Peters): http://www.pathologyinnovations.com/
Кроме рекламы своих полезных штучек для криостата там море всяких методических тонкостей по этму вопросу. Кроме текста и картинок есть видео. Он даже книгу выпустил недавно (на нее есть ссылка на его странице). Единственный минус - на английском.

Добавлено (2011-02-15, 10:55 Am)
---------------------------------------------

Quote (SOVA)
В сообщении 213 я привела фото гастриков. Вы попросили протокол ШИК реакции. Мы работаем с готовым набором из Биовитрума. Его тоже можно корректировать?

Уважаемая SOVA!
Готовый набор конечно очень трудно корректировать. Но если не получаются картинки, которые поместил производитель на своем сайте, то, воможности две: либо лаборанты где-то отклоняются от рекомендаций (это корректируется), либо дело в реактивах (не корректируется). Фото на сайте производителя вашего набора хорошие. Значит, скорее всего, дело в исполнении.
Анализ прост - посмотреть, как красит тот, у кого хорошо получается и как делают другие. А вот добиться от других отличной окраски, если у них в стереотипе есть какая-то системная ошибка - безумно трудно: они свято верят в то, что делают все идеально и никакие аргументы на них не действуют. На пути к качеству необходима еще и готовность исполнителя идти навстречу качеству. В этих случая помогает командировка в другие лаборатории на несколько дней, если такая возможность есть.

RAlexandr!
Кассеты делаются из пластика, устойчивого к любым химическим реактивам, использующимся в проводке и действию температуры, а также к кислотам и щелочам. Они даже спокойно выдерживают многократное кипячение в мыльном растворе (для удаления парафина). И как любой пластик - плавятся при нагреве выше температуры его плавления (чаще выше 100оС). Я не знаю, из какого пластика делаются кассеты.

 
RAlexandrДата: Вторник, 2011-02-15, 6:57 PM | Сообщение # 227
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 22
Репутация: 2
Статус: Offline
спс, я предложил но мне просто лаборанты сказали что через 2-3 проводки начинают коробить кассеты, отлетать крышки и их приходится завязывать в марлю.
еще вопрос - гастрики, вы как кладете - один случай (от 1 до 6 кусочков)=1 кассете?


Сообщение отредактировал RAlexandr - Вторник, 2011-02-15, 6:59 PM
 
MaximДата: Вторник, 2011-02-15, 9:20 PM | Сообщение # 228
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
RAlexandr!
Пусть ваши лаборанты не врут, что кассеты перестают защелкиваться через 2-3 проводки. Мы работаем ими по несколько лет. Нормальный ресурс для кассеты год. Мы пользуемся китайскими и кипятим их каждый раз после заливки.
Разумеется, эта дурацкая практика - кипятить кассеты. Мера эта вынужденная из-за бюджетного происхождения.
Бывает, что некоторые кассеты перестают защелкиваться после 30-50 заливок, но повально это не происходит никогда.

Гастрики тоже дело скандальное. Часть наших патологов считает, что в одну кассету должен идти один кусочек. Тогда вроде как есть гарантия получения информации с него. Другие не против того, чтобы в одну кассету помещать несколько кусочков. Некоторые эндоскописты не маркируют локализацию взятых кусочков и присылают несколько в одном пузырьке. Получается "один блок - несколько кусочков". Я заливаю их много лет самостоятельно и всегда просматриваю, сколько в срез попало кусочков. Ни разу не разошлось количество в макроописании и на стеклах.
Тонкость этих подходов может заключаться в следующем. Если исследование гастробиопсий - платное удовольствие, то патологи да и лаборанты могут спекулировать правилом "один кусок - один блок", приводя массу всевозможных аргументов за.
Если это дело бесплатное (как у нас), то никому не интересно возиться с 5 блоками от одного пациента вместо одного. Эти пять блоков потом превращаются в 15 стекол (ГЭ, альциановый синий + ШИК, метиленовый синий)Х5. А пациентов как правило за день около 10.
Другое дело, когда нормальный вдумчивый эндоскопист все обозначает и к направлению прилагает 3-5 пузырьков с указанием каждой локализации. Тогда работает правило "кусочки одной локализации - один блок" и спорить здесь не о чем.

Очень интересно знать, а как в других учрежениях решаются эти вопросы.

 
RAlexandrДата: Среда, 2011-02-16, 0:00 AM | Сообщение # 229
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 22
Репутация: 2
Статус: Offline
Maxim,
спасибо так и предполагал: наши эндоскописты шлют по флаконам, 1флакон - 2к с опухоли ректосигмоида, 2 фл- 1 кус полипа селезеночного угла и т.д.

удалось достать два 50л-мешка б/у (1 раз) кассет (от биовитрума) из соседней больницы, им закупают для гистпроцессора и они у них одноразовые. Попробую для прокладок одноразовые халаты, беспокоит, только что бронхо- и гортано-биоптаты и так микроскопические, какбы не затерялся в такой большой кассете cry

 
MaximДата: Среда, 2011-02-16, 6:34 AM | Сообщение # 230
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
RAlexandr!
Мы так и делаем: помещаем мелкие биопсии в матриал от одноразовых халатов. Размер вкладыша 6.5 см х 2.7 см. Ничего никуда не теряется, даже мелочь.
Более лучший способ: добыть ленту для пакетиков для чая. Запаковка обычным термоаппаратом типа "молния" (раньше так целлофан запаивали). Я не пробовал - не могу купить ленту. В порядке эксперимента пожертвовал несколькими пакетиками для чая - все работает отлично.

Интересные ваши коллеги. Если у них кассеты одноразовые, то почему они не заливают на кассетах? По идее должны оставаться одни крышки. Если им еще и кольца заливочные кольца закупают, то они жируют.
Я поищу где в форуме есть рецепт очистки кассет от парафина.

Из предыдущих сообщений в этой же теме:

Quote
Кассеты после проводки загружаем в кастрюлю с 2% жидкого моющего средства, доводим до кипения, помешивая и оставляем остывать. Парафин собирается на поверхности. Кассеты промываются, сушатся и потом снова идут в работу


Сообщение отредактировал Maxim - Среда, 2011-02-16, 5:26 PM
 
RAlexandrДата: Среда, 2011-02-16, 6:16 PM | Сообщение # 231
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 22
Репутация: 2
Статус: Offline
Maxim, спс все это я переписал и дал лаборантам.

коллеги имеют даже заливочную станцию (полную) но используют ее как парафинонагреватель: т.е. после проводки в гистпроцессоре в кассетах, они выкладывают из кассет биопсии на большой металлический лоток (поддон), и из носика чайника заливают всю партию за 1,5-2 мин (150-250 блоков). охлаждают и режут ножом на блоки. сказали что им лень возиться и заливать каждый блок отдельно (30сек*250 блоков=2 часа).
а у нас (облонкодиспанцер) сейчас период радостного ожидания, попали в 2 госпрограммы (онкология и развитие медицины) предложили заказать аппаратуру - все что угодно (но с обоснованием). заказал гистпроцессор, стейнер, аппарат для заключения, новые микроскопы (сказали любые) иммуногистостейнер, и т.д., все кроме расходки.
у нас врачей не хватает, совсем, да и с лаборантами туговато. не могут (или не хотят) платить за весь объем работы (по вакантам).

 
MaximДата: Среда, 2011-02-16, 7:34 PM | Сообщение # 232
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
RAlexandr!
Век живи - век удивляйся. Я бы вашим коллегам дал первое место по абсурдности исполнения процесса заливки!
И что, до сих пор им никто не настучал по голове и не оторвал руки за такое новаторство?!
В их процессе заливки следующее недопустимо:
1. Никак нельзя начинать работать с второй кассетой, пока первая не залита. Это все равно, что срезы от нескольких блоков поместить плавать на воде, а потом выловить их без ошибки.
2. При заливке кусочек опускается в расплавленный парафин, ориентируется, а потом застывает. Для этого на заливочном центре есть маленькая охлаждающая плата. Иначе окружающий парафин не будет поддерживать кусочек при микротомии и вокруг кусочка будут пузырьки воздуха.
3. Чтобы парафин хорошо выливался из носика чайника он должен быть нагрет выше 75оС. А это у же риск потери некоторых антигенов при ИГХ.
4. Мелкие кусочки могут всплыть и стенки кист в срезах вряд ли будут ориентированы как положено.
5. Сравнивая их способ заливки с описанным в статье "Стандарты продуктивности для гистологических лабораторий"
Annals of Diagnostic Pathology Vol. 14 (2010), pp.107-124 (она есть на главной странице этого вебсайта), где сравнивали способы приготовления препаратов в 221 лаборатории США и 104 из 24 других стран с загрузкой 600-116000 случаев в год о таком прогрессивном способе заливки не упомянуто. Да и разработчики самой последней заливочной системы от фирмы Sakura долго ломали голову над кассетами, позволяющими не вмешиваться человеку в процесс заливки, и признали, что их параформенные вставки все еще не являются совершенными на 100%.
Ваши коллеги всех их обошли? Или они просто идут не в ту сторону?
Им-то и заливочный центр нельзя было давать. И поэтому даже кассеты не используют в качестве крепежа для блоков. (Интересно, а в использовании аппарата для проводки они тоже что-то такое придумали?)
Я не советую Вам или кому-либо еще повторять так процесс заливки.
 
RAlexandrДата: Среда, 2011-02-16, 8:24 PM | Сообщение # 233
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 22
Репутация: 2
Статус: Offline
ну чес говоря у нас во многих ПАО заливают так :(, потому как 1 лаборант делает работу в среднем за 4-х, а в некоторых местах за 8-х (такой деффицит кадров) никто не хочет ехать на север. при том что работа оплачивается администрацией в среднем на 1,5-2 ставки - особенно после того как отменили бригадный подряд в связи с новой системой оплаты по физлицам (вакантные ставки администрацией просто ликвидированы).
о ИГХ врачи и лаборатны думают меньше всего - т.к. ближайшая ИГХ от нас в 1500 км!!! в областном центре и области ИГХ не существует как класс даже в онко диспанцере (где я работаю, а объем ок 40тыс номеров с учетом пересмотра всего онкоматериала со всей области, при том что 5 мес в году работает 1 врач, физически я даже не представляю как тут делать ИГХ sad ). нет ПАБюро, все пао под главными врачами больниц, а они не хотят закупать ни антитела ни даже минимальное оборудование для ручной работы. сходная ситуевина в большинстве пао sad

Добавлено (2011-02-16, 8:24 PM)
---------------------------------------------

Quote (Maxim)
Сравнивая их способ заливки с описанным в статье "Стандарты продуктивности для гистологических лабораторий" Annals of Diagnostic Pathology Vol. 14 (2010), pp.107-124

не пускает сайт меня к этой статье sad видать не созрел исчо.
 
SOVAДата: Вторник, 2011-03-29, 7:01 PM | Сообщение # 234
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 81
Репутация: 5
Статус: Offline
Maxim, и уважаемые коллеги! Добрый вечер! Подскажите, кто сталкивался с проблемой заворачивания краев кусочков ткани на стекле, напрмер в шейках, гастриках? В шейках это особенно раздражает, когда не могу разглядеть пласт плоского эпителия?
 
MaximДата: Среда, 2011-03-30, 1:02 AM | Сообщение # 235
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Любые заверты по краям, будь то шейка. кости, гастрики или коже - это чаще результат избыточного обезвживания. Оно наступает из-за плохой фиксации формалином (чаще у клиницистов гадкий формалин и нашим хорошим мы уже ничего исправить не в силах - можем только дать им свой хороший). Или фиксация менее 24 часов. Вселенная не изменится от нашего желания или требования кого-либо сделать анализ быстрее - мы должны тщательно следовать законам химии и физики. Не будет перекрестного связывания, - будет коагуляция спиртами. Если когауляция обратимая - можно исправить смачиванием водой блока при резке. Дойти до нужной глубины. Намочить блок теплой водой. Выдержать 1 минуту и затемпопробовать получить первые 2-3 хороших среза. Глубже срезы будут хуже.
Если срезы получаются ничего, а потом на стекле все заворачивается, есть более наглый способ: развести 1-2 капли обычного клея ПВА на 1 мл дист воды и намазать стекло. Высушить. Затем выловить нужный срез. Сушить до утра при комнатной температуре вертикально. Утром покрасить обычным способом, мягко обращаясь со срезом. Даже жаренные лазером образцы удерживаются и не закручиваются. Или клеить на поли-L-лизиновые или плюс-стекла.
Еще одна (менее вероятная причина) - поджаривание из-за горячего пинцета при заливке. Просто тихо проследите из-за плеча за процессом. Пинцет после нагрева на спиртовке не должен обжигать тыльную сторону руки при касании. На холодный пинцет цепляются кусочки ткани и парарфин.
 
nastjaДата: Вторник, 2011-04-05, 8:17 PM | Сообщение # 236
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 64
Репутация: 6
Статус: Offline
Здравствуйте!
Подскажите, пожалуйста, можно ли "уместить" обе батареи для окраски в 12 кювет?
Сейчас у нас пропись такая :
ксилол
ксилол
ксилол
спирт96
спирт96
спирт90
спирт70
спирт50
дистиллят
гематоксилин

эозин
дистиллят
спирт50
спирт70
спирт 90
спирт96
спирт96
ксилол
ксилол
ксилил
заключение
Это всё в стаканчиках. Соответственно веду по 2 стекла.

Теперь появилась батарея на 12 кювет
Можно ли чем-нибудь пожертвовать для уменьшения количества ёмкостей?
Или лучше заказать вторую батарею?

Спасибо.

 
MaximДата: Вторник, 2011-04-05, 8:42 PM | Сообщение # 237
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Уважаемая nastja!
До 12 позиций сократится без ущерба для качества не получится. Прийдется каждую позицию менять почти через партию.
Лучше поставьте 2 батареи.
Есть вопросы:
Какой гематоксилин используете?
Каким образом добиваететсь синих ядер, полоская срезы только в одной смене дист воды после гематоксилина и при этом еще и красные оттенки в эозине?
Какой смысл в спритах 50, 70, 90?

Я бы вел в стаканчиках как минимум по 4 стекла, но переносил каждое стекло по одному.
С введеним батарей появляется возможность окрашивать по 25 стекол за раз. Это очень выгодно.
Я пользуюсь одной такой батареей, но все равно у меня есть еще 3-4 дополнительных емоксти с водой и дифференцирующим раствором и подсинивающим для гематоксилина (это 0,5л пластиковые ведерки).

Большой поток окраски в нашей лаборатории организован так:
4 уайт-спирита (ксилол)
4 изопропанола
Вода (2 параллельно)
4 гематоксилина (параллельно)
4 воды (по 2 паралельно и промывка избытка гематоксилина проточной водой: т.е. это еще 2-3 смены)
солянокислый спирт
3 воды (последовательно)
эозин
вода
4 изопропанола (последовательно)
4 ксилола (по 2 параллельно).
Сложно описать общую последовательность действий, поскольку идет сразу много партий. Пока окраска одних идет, двигаются другие и т.п.
Не задерживаем только в солянокислом спирте и эозине. Все остальное по мере движения потока.
Там еще и заключение в полистирол делается.

 
nastjaДата: Четверг, 2011-04-07, 3:12 PM | Сообщение # 238
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 64
Репутация: 6
Статус: Offline
Уважаемый Мaxim, большое спасибо за ответ. Мы используем гематоксилин Харриса, готовый. После него стекла стоят в проточной воде, потом эозин и снова вода ( не проточная, а дистиллят).

Низкие концентрации спиртов для того, чтобы переход спирт-вода был более плавным.

 
MaximДата: Четверг, 2011-04-07, 7:05 PM | Сообщение # 239
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Уважаемая Nastja!
Гематоксилин Harris регресиивный, то есть требует дифференцировки и последующего подсинивания.
Мы пользуемся гематоксилином Lillie, он тоже регрессивный.
Строго говоря, последовательность для регрессивных гематоксилинов должна быть такой:
ксилолы, спирты, дист вода, гематоксилин, 2-3 смены водопроводоной воды, солянокислый спирт или водная соляная кислота, 3 водопроводных воды (если щелочная) (если щелочи мало, нужно вводить подсинивающий раствор), затем дист вода, эозин, вода, спирты, ксилолы.
Важно помнить, что эозин плохо окрашивает после подщелоченной воды. А гематоксилин не синеет в подкисленной воде.
Поэтому последние воды должны быть каждый раз свежими.
 
nastjaДата: Четверг, 2011-04-07, 10:24 PM | Сообщение # 240
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 64
Репутация: 6
Статус: Offline
Спасибо за ответ. Теперь я поняла, почему срезы стали плохо прокрашиваться эозином. Нужно вернуть этап дистиллированной воды. Попробую в субботу.
 
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Проводка и заливка (Детали разныя)
Страница 16 из 34«1214151617183334»
Поиск: