Вы вошли как Гость
Текущая дата: Четверг, 2024-04-25, 4:06 PM
|
Проводка и заливка
|
|
| первопроходец | Дата: Четверг, 2012-11-29, 5:35 PM | Сообщение # 361 |
 Лейтенант
Группа: Проверенные
Сообщений: 51
Статус: Offline
| Уважаемый Максим, к сожалению мой формалин не дал никаких результатов 
В сегодня в партии были: 1 биоптаты после перекиси
2 биоптаты после формалина на дист воде
3 биоптаты после моего формалина
Нет четкой тенденции, привязанной к фиксации, результаты такие:
все препараты в общей массе плохие( бесструктурные), почему-то 1 нормальный после моего формалина и 1 нормальный после формалина на дист воде???
У меня скоро голова лопнет анализировать проводку.окраску,фиксацию.Что интересно: мелкие эрозии ш/м и биоптаты пищевода( у них не такая рыхлая слизистая) как в учебнике, кожи сегодня как всегда резались плохо,но микро на ура.Вот такая петрушка,чувствую себя полной дурой.Может слишком чистые реактивы пересушивают гастро? Почему цвет ядер в них синеватый, а во всем другом красивый фиолетово-сиреневый( у меня Карацци)?ПОМОГИТЕ!!!
Сообщение отредактировал первопроходец - Четверг, 2012-11-29, 5:36 PM |
| |
| |
| Maxim | Дата: Четверг, 2012-11-29, 8:06 PM | Сообщение # 362 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Уважаемая первопроходец!
О биоптатах:
Я соглсаен с Вами, похоже период обезвоживания этанолом (2х15 мин) слишком велик.
Уже давно не работал с этанолом и ацетоном. попробуйте сокртить спирты до 2 х 5 мин, промежуточную смесь спирт-хлороформ до 10 мин, хлороформ 2 х 10 мин, парафин:хлороформ 15 мин, 2 х 20-30 мин парафины. Это должно немного помочь.
Тем не менее, мне не дает покоя фиксатор. После хорошей фиксации ткани могут выдерживать очень серьезные стрессы. Тем не менее, у Вас почти все не выдержало. Значит, дело в фиксации.
Что-то с формалином. Если аптека поклялась делать, как Вы велели, и они сделали так и с вашим формалином тоже была проблема, я думаю, здесь дело в исходном формалине -концентрате. Откуда и чей был формалин-концентрат? Где он хранился? Был ли в концентрате осадок и брали ли Вы для раствора саму муть, а не надосадочную жидкость? Как выглядел рабочий раствор фиксатора (прозрачный, без мути, осадка, со специфическим запахом)?
Не стоит случайно хорошо получившиеся картинки брать за эталон. Все не так просто. Будем анализировать поэтапно и также поэтапно исправляться. Все можно исправить,нужно найти причину.Добавлено (2012-11-29, 8:06 PM)
---------------------------------------------
Гематоксилин должен быть синего цвета, а не фиолетового. Гематоксилин - это индикатор с рН перехода 5,0-6,0. Ниже 5 - его цвет красноватый, выше 6 - синий. Ядра должны окрашиваться в синий цвет. Фиолетовый цвет говорит о плохо отмытой кислоте (в состав Карации входит соляная кислота (если этот гематоксилин соответствует оригинальной прописи), и она придает красноватый оттенок раствору.
Докраска эозином также не должна быть избыточной и маскировать гематоксилин. В правильно окрашенном препарате удается различить без труда 4 оттенка эозина.
|
| |
| |
| первопроходец | Дата: Четверг, 2012-11-29, 8:56 PM | Сообщение # 363 |
|
Лейтенант
Группа: Проверенные
Сообщений: 51
Статус: Offline
| Спасибо за советы,завтра проведу по сокращенной проводке.Концентрат стоял в лаборатории в 5 л бутыли( как питьевая вода) с аптекарской биркой.даже по сроку годности еще годен,прозрачный,осадка нет вообще.Рабочий раствор прозрачный,запах как обычно
Карацци приготовлен до меня не знаю как.Сама краска синяя, без красноватого оттенка,срезы при дифференцировке в теплой воде синеют,после эозина красноватые. после спирта перед ксилолом фиолетоватые.К сожалению у меня умер телефон с фотоаппаратом, на выходных возьму камеру и в понедельник все досконально сфотографирую
А ядра после Карацци и должны быть сине-фиолетовые насколько я знаю
Сообщение отредактировал первопроходец - Четверг, 2012-11-29, 9:01 PM |
| |
| |
| Maxim | Дата: Пятница, 2012-11-30, 6:49 AM | Сообщение # 364 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| После любого квасцового гематоксилина ядра синие и никакие другие.
После железного - черные, и никакие другие.
|
| |
| |
| первопроходец | Дата: Воскресенье, 2012-12-09, 0:10 AM | Сообщение # 365 |
|
Лейтенант
Группа: Проверенные
Сообщений: 51
Статус: Offline
| Ну вот еще один пробел в моих знаниях 
После укороченной проводки тот же результат, нет структуры и всеДобавлено (2012-12-09, 0:10 AM)
---------------------------------------------
Экспозицию при окраске отработала
Операционный материал почти хорош(проводила и пунктаты простат и копчиковые ходы и мелкие папилломы), а вот простая атерома в плотной капсуле огорчила - на срезе была белая и резалась с трудом.
Гастробиопсии по прежнему не имеют четкой гистологической картины, в чем дело просто не знаю, толстая кишка и пищевод нормальные.
Выбила себе компьютер, а зав.отд. новый микроскоп(хоть отечественный,но все же лучше старого) там есть возможность подключения камеры, но ее конечно же не купили(600$).
Попробую найти у знакомых микроскоп с камерой,очень хочу показать Вам гастрики,может по их виду догадаетесь в чем дело 
Сообщение отредактировал первопроходец - Пятница, 2012-11-30, 10:43 PM |
| |
| |
| Maxim | Дата: Воскресенье, 2012-12-09, 1:20 PM | Сообщение # 366 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Атеромы всегда противные. Если капсулу не разрезать до фиксации - получится абсолютная гадость и срез вообще не получится. В них бывает даже кальций, тогда без декальцинации не обойтись, а в этом процессе растворится весь бесструктурный кальций и опять ничего не останется. Вообще же в атреомах по сути должна получиться только окружающая ткань и капсула, а внутри просто бесструктурные массы.
Про гастрики ничего не могу сказать, особенно, если из одного кабинета в один день приносят материал, часть из которого нормальная, а часть нет.
Наверное, стоит один раз посмотреть и определиться.
|
| |
| |
| первопроходец | Дата: Суббота, 2013-01-05, 0:06 AM | Сообщение # 367 |
|
Лейтенант
Группа: Проверенные
Сообщений: 51
Статус: Offline
| ПОЗДРАВЛЯЮ всех с наступившим 2013 годом,желаю профессионализма, творческих свершений и большого человеческого счастья, когда с радостью идешь на работу и с еще большей радостью возвращаешься домой!  :
|
| |
| |
| intheusa9459 | Дата: Понедельник, 2013-01-14, 3:05 PM | Сообщение # 368 |
|
Рядовой
Группа: Проверенные
Сообщений: 5
Статус: Offline
| С прошедшими праздниками всех! Подскажите пожалуйста можно ли заменить этиловый спирт в батарее для покраски на изопропиловый, хотим отказаться от покупки этилового вообще. кто-нибудь пробовал? как результаты?
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Понедельник, 2013-01-14, 11:15 PM | Сообщение # 369 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Многие лаборатории так уже давно делают и очень даже довольны. Не откладывайте дела в долгий ящик - смело заменяйте этанола на ИПА (изопропанол) и вперед!
Главное - регулярно менять реактивы и все будет ок.
Мы так делаем с 2007 года.
|
| |
| |
| intheusa9459 | Дата: Среда, 2013-01-23, 7:18 PM | Сообщение # 370 |
|
Рядовой
Группа: Проверенные
Сообщений: 5
Статус: Offline
| Спасибо! думаю расход спирта в отделениях нашего бюро резко снизится)) Хотя спасибо мне за это никто не скажет, кроме бухгалтерии(
Сообщение отредактировал intheusa9459 - Среда, 2013-01-23, 7:19 PM |
| |
| |
| mistermm | Дата: Среда, 2013-02-27, 4:55 PM | Сообщение # 371 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 17
Статус: Offline
| Коллеги, снова прошу совета. У нас в отделении появился гистопроцессор Excelsior, соседи подсказали схему проводки на изопропаноле - 9 смен (I-III по 30 мин., IV-VII по 1 часу, VIII-IX по 3 часа, 3 парафина 1+3+3 часа). Итого 19 часов. Качество операционного материала не устраивает. Лаборанты говорят, что куски пересушены, срезы закручиваются, плохо расправляются на воде (Твин не помогает). Что видим мы - срезы часто фрагментированы, с разрывами, в лимфоузлах проплешины. Хотим вернуться к стандартной схеме проводки, вшитой в аппарат - 6 изопропанолов по 1 часу и 3 ксилола по 1 часу. Прошу прокомментировать ситуацию. По проф. Криволапову проводка в изопропаноле ещё дольше, а тут и так "пересушивание". Насчёт толщины кусочков - стараемся, чтобы было не больше 3 мм, но не всегда получается... Фиксация в формалине ровно сутки.
Сообщение отредактировал mistermm - Среда, 2013-02-27, 7:45 PM |
| |
| |
| Maxim | Дата: Среда, 2013-02-27, 11:12 PM | Сообщение # 372 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Сам Excelsior вполне годный аппарат.
По фиксации вопросы:
1. Формалин 10% нейтральный забуференный?
2. Кто производитель формалина?
3. Фиксация сутки - это для вырезанных кусочков (т.е. после вырезки)?
4. После фиксации промываете в воде 20-30 мин кассеты от избытка формалина?
Важное значение имеет качество реагентов. Проверьте, все ли с ними в порядке.
Количество дегидратантов 9 и 19.5 часов в них на мой взгляд великовато.
Но трудно бывает удалить изопропанол из срезов, замещая его парафином. Именно поэтому производители и предалагют поднимать температуру в первом парафине до вплоть до 75оС. Тогда ИПА испраряется в горячем парафине (я не сторониик таких мер).
Добавка ксилола сводит на нет все преимущества проводки ИПА-парафин.
Фрагментация и разрывы в срезах - порождение неправильной фикации.
Проплешины или дырки (как от моли) на парфиновом срезе - следствие получения тонких срезов сразу после грубой подрезки. После грубых срезов первые 5-6 тонких срезов нужно просто выбросить, а поседующие уже выбирать и монтировать на стекла.
Срезы толще 3 мм будут обязательно плохо проводиться не взирая автоматизацию проводки.
Когда наладите свой процесс, пожалуйста поделитесь своими наблюдениями и выводами, нам всем это важно и интересно. У любого из нас может возникнуть подобная ситуация и мы уже будем знать, что делать.
|
| |
| |
| mistermm | Дата: Среда, 2013-02-27, 11:38 PM | Сообщение # 373 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 17
Статус: Offline
| Maxim, спасибо за такой подробный ответ. Формалин хороший - 10% нейтральный забуференный от БиоВитрума. Вырезка у нас примерно заканчивается в 15:00 (вырезаем мы нефиксированный материал), после вырезки кусочки, завязанные в марлевые мешочки (да, не удивляйтесь..), переносятся в трехлитровую банку с формалином. На следующее утро, после окончания предыдущего цикла проводки в автомате и промывки его, куски закладываются в автомат (это примерно в 11-12 часов). Проводка с отложенным стартом - начало в 15:00, до того времени куски автомат держит в формалине. Промывка в воде, получается, отсутствует. Фиксация выходит почти ровно сутки. Вообще у нас была мысль фиксировать материал дольше, но тогда автомат не даст никакого выигрыша во времени.
Глупый вопрос - а какие преимущества проводки ИПА-парафин, кроме простоты?.
Насчет выбрасывания тонких срезов после грубой подрезки - завтра спрошу у лаборантов, делают ли они так!
По поводу 3 мм - это ведь требования именно к изопропанольной проводке?
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Четверг, 2013-02-28, 0:03 AM | Сообщение # 374 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| 3 мм - это требования к любой проводке. В толстых кусках идет диффузия медленнее.
Еще несколько вопросов: сколько кусчков попадает в трехлитровую банку (примерно)?
Не в холодном месте находится банка с формалином и узелками?
Мешочки еще живы во многих лабораториях. Мы их извели всего лишь 7 лет назад. И вам рекомендуем сделать тоже самое.
От них мало толку. Диффузия между кусочками очень затруднена особенно в процессоре.
Ксилол делает куски очень хрупкими и твердыми при избыточном действии.
А еще он безумно вредный для персонала. И проникает через легкие и через кожу. И ни один тип перчаток не защищает от него.
Ведь не просто же так по всему миру предалают очень много заменителей его?
Мы, например, очень даже спокойно без него обходимся и стали счастливы. Чего и вам желаем.
|
| |
| |
| mistermm | Дата: Четверг, 2013-02-28, 0:28 AM | Сообщение # 375 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 17
Статус: Offline
| Просто в некоторых, по крайне мере, руководствах указывается размер вырезаемого кусочка 1,5х1х0,5 см.
В банке кусков 150. Стоит она на подоконнике...
Переход на кассеты - следующий шаг, возможный уже, но который мы никак не сделаем
У нас ксилол пока жив на этапе покраски - депарафинизация и просветление...
|
| |
| |
|
|
