Проводка и заливка - Страница 26 - Форум
 
Проводка и заливка - Страница 26 - Форум
[ Новые сообщения · Участники · Правила форума · Поиск · RSS ]
Вы вошли как Гость
Текущая дата: Пятница, 2016-12-09, 4:26 PM

Страница 26 из 34«1224252627283334»
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Проводка и заливка (Детали разныя)
Проводка и заливка
MaximДата: Четверг, 2013-02-28, 6:47 AM | Сообщение # 376
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Вот эти 0.5 см толщины и делают свое черное дело. Диффузия на такой глубине идет не так быстро, как в 0.3 см.
Площадь же может быть не более кассеты, это около 2.5х2см. От краев кассеты толже должно быть расстояние до стенок.

На подоконнике не должно быть холодно. В холодном формалине процесс фиксации замедляется.
И вообще, проверьте формалин покупаемый. Не может быть так, что все реактивы и расписание правильное, а результат отвратный. Попробуйте у себя найти канистру с фиксатором из другой партии (если есть) или попробуйте формалин другого производителя (хотя бы образец).
А аутопсиный ткани получаются хорошо или тоже гадостные?
 
mistermmДата: Четверг, 2013-02-28, 4:26 PM | Сообщение # 377
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 17
Репутация: 0
Статус: Offline
Видимо, дело и правда в том числе в толщине кусков. Биопсийный материал (его часто мы пускаем вместе с операционным по ночной проводке) почти всегда лучше операционного. И секционный (правда, он у нас бывает крайне редко) - его мы вырезаем фиксированным и, видимо, тонкие аккуратные кусочки легче получаются + фиксация дольше.

Что сделали сегодня. Банки с формалином на подоконнике оказались прохладными на ощупь - поставили их на батарею. В схеме проводки температуру формалина сменили с комнатной на 37 градусов - в этом формалине куски будут находиться в течение 3 часов перед началом собственно проводки.

Про выкидывание первых тонких срезов после грубой подрезки лаборанты, как я понял, не знали. Они ориентируются на внешний вид среза - говорят, мы же видим, что без дырок )
 
MaximДата: Четверг, 2013-02-28, 10:09 PM | Сообщение # 378
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Мы ставим после вырезки кассеты в банках с формалином прямо в термостат 40оС. Тогда фиксацию можно считать законченой через 18 часов. Выше нагревать нельзя. Утром мы начинаем проводку и ведем ее ручками.

В процессорепосле формалина поставьте одну станцию с водой для отмывки избытка формалина. И дело пойдет на лад.

Невооруженным взглядом очень трудно заметить дырки в срезе, которые имеют размеры порядка 20 мкм. А под микроскопом будет очень хорошо все видно.
Иллюстрация в приложении. Это фотка из книги G.Rolls 101 Steps for better histology. Pdf-версию можно скачать с сайта LeicaBiosystems свободно.
Имеется и русский перевод этой книги, но я не знаю, кто распространяет
Прикрепления: ___.pdf(78Kb)
 
mistermmДата: Четверг, 2013-02-28, 10:41 PM | Сообщение # 379
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 17
Репутация: 0
Статус: Offline
У нас всего 1 термостат на 60 градусов.
В процессоре нельзя выбрать этап с водой. Только если обмануть его и вместо формалина во вторую канистру для формалина залить воду и запрограммировать минут на 5?
Да, картинка прямо, как у нас. Файл на английском скачал, спасибо за ссылку. На русском не находится.
 
MaximДата: Четверг, 2013-02-28, 10:48 PM | Сообщение # 380
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Разумеется, процессору докладывать доподлинно не нужно, что вы льете в него. Это для вашего понимания нужно.
5 минут мало. Хотя бы 20 минут. Воду эту менять нужно как и формалин после каждой закладки материала.
Русский перевод этой книги был выпущен под ред Г.А. Франка и П.Г. Малькова.
Я приложил слайд из своей презентации по микротомии, над которой еще работаю.
 
mistermmДата: Четверг, 2013-02-28, 11:01 PM | Сообщение # 381
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 17
Репутация: 0
Статус: Offline
Мы и так уже его обманываем - вместо ксилола загружаем изопропанол ))
Книжку полистал - очень много нюансов, на которые зачастую не обращают внимание...
Хм, после каждой закладки... Мы меняем всё раз в неделю (в среднем за раз загружается 150, максимум 200 кусков). И лаборанты говорят, что после смены реагентов куски становятся хуже - плотнее и проч. Что касается наших врачебных впечатлений - не получается установить корреляцию. Приступами как-то всё бывает. Сегодня от одного лаборанта смотрел материал - биопсии, включая шейки матки, отличные, а операционный материал очень плохой. Опять же мысли про размеры кусков закрадываются. Вообще, решил создать коллекцию фото проблемных препаратов. Выложу сюда как-нибудь.
 
MaximДата: Четверг, 2013-02-28, 11:07 PM | Сообщение # 382
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Это абсолютный бред, что после смены реактивов все становится хуже. Формалин должен быть свежим каждый раз для каждой новой партии кусочков. Пока будете послоскать их в грязи, будете получать непонятные результаты. И концов никто никогда не найдет. На фиксации, как и на любых других вещах экономить нельзя. Попробуйте делать все в свежем формалине и будет вам счастье.
 
mistermmДата: Пятница, 2013-03-01, 5:32 PM | Сообщение # 383
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 17
Репутация: 0
Статус: Offline
Согласен с Вами, но реалии таковы, что перейти на каждодневную смену формалина мы сможем только во втором полугодии. Сегодня залили в процессор воду для полоскания после формалина. Формалин в банках, в которых ночуют кусочки, решили менять 3 раза в неделю.
 
MaximДата: Пятница, 2013-03-01, 5:38 PM | Сообщение # 384
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Хорошо, можно обойтись при таком раскладе без формалина в процессоре. Полоскать водой перед загрузкой, а задержку делать в первом изопропаноле. Но в банки всегда лейте свежий формалин (КАЖДЫЙ ДЕНЬ!) и помещайте в него кусочки после вырезки. Этого должно хватить. Думаю, это разумный компромисс.
 
mistermmДата: Вторник, 2013-03-05, 10:34 PM | Сообщение # 385
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 17
Репутация: 0
Статус: Offline
Первые результаты обнадеживающие ) Что мы сделали - формалин стали менять чаще (все-таки пока 3 раза в неделю), банки с формалином теперь стоят в теплом месте - на батарее, в проводку включили этап промывки водой после формалина. Из плохих и ужасных препараты стали неплохими, так скажем. Хотел приложить фотографии, но что-то не вижу соответствующей кнопки для их загрузки.
 
Oksana)Дата: Пятница, 2013-06-28, 1:26 PM | Сообщение # 386
Майор
Группа: Пользователи
Сообщений: 7
Репутация: 2
Статус: Offline
Здравствуйте! Работаю в НИИ, материал - органы крыс и мышей. Пытаюсь обкатать Вашу проводку из сообщения 4. После прочтения всей ветки обнаружила, что кусочки у меня большие 0,5 х 0,4 х 0,6 (печень и г.мозг). Исправлю.
У меня 2 вопроса (для особо сообразительных): 1 - исходя из прописи сообщения 4 - тритон не надо добавлять? 2. лимфоузлы мышей (приблизительно 0,1 х 0,1) можно проводить по этой прописи? В ксилольной прописи крупные куски и мелкие имеют разную пропись. Заранее спасибо
 
MaximДата: Суббота, 2013-06-29, 7:55 AM | Сообщение # 387
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Уважаемая Oksana),
Ткани грызунов содержат очень мало воды, поэтому для них требуется совершенно иное расписание в любых реагентах.
Важно, чтобы ксочки были вырезаны не толще 3 мм! Площадь - не более кассеты.
Проводка с маслом выглядит так:
1. Изопропанол 70% 30 мин
2. Изопропанол 80% 30 мин
3. Изопропанол 95% 30 мин
4. Изопропанол 99% 30 мин
5. Изопропанол:минеральное масло 5:1 50oC 60 мин
6. Изопропанол:минеральное масло 2:1 50oC 60 мин
7. минеральное масло 50оС 1.5 ч (или до утра)
8. Парафин 60oC 30 мин
9. Парафин 60oC 30 мин
10. Парафин 60oC 20 мин
11. Парафин 60oC 20 мин.

Концентрации изопропанола приблизительные, они
получаются такими после проводки нескольких партий.
Для начала, чтобы не сильно уплотнить материал,
сделайте именно такие концентрации, а потом
"передвигайте растворы влево".
Это расисание уже используется несколько лет в лабораториях Шоттландии и США.
Интересно будет узнать о Ваших результатах.
 
Oksana)Дата: Суббота, 2013-06-29, 8:24 AM | Сообщение # 388
Майор
Группа: Пользователи
Сообщений: 7
Репутация: 2
Статус: Offline
Спасибо большое за ответ! Обязательно отпишусь. Уточню: грызуны любые? И крысы и мыши? Я спрашиваю, потому что величина органов существенно отличается. ...А-а-а, видимо, дошло. Кусочки-то у всех должны быть толщиной 3мм. Кассет у меня нет, и в обозримом будущем не предвидится. Хоть масло бы купили (пока у меня минеральное, из автомагазина). Раньше (и в п/а лаборатории и звериный материал), при ксилольной проводке кусочки были примерно 0,5 х 0,5 х 0,5, а теперь, видимо, длину-ширину увеличить, оставляя маленькую толщину. И еще один дурацкий вопрос: а ориентировать при заливке плоскостью же, не ребром? Попыталась подрезать мозг до 0,3 - развалился... На неделе, при заборе материала, еще надо будет покрутить, чтобы приноровиться.
 
MaximДата: Суббота, 2013-06-29, 10:39 AM | Сообщение # 389
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
По содержанию влаги ткани разных видов грызунов практически не отличаются.

Любой материал ориентируется интересующим патолога образом.
В патологии обычно важно видеть не только саму опухоль, но и взаимоотношение с прилежащими тканями, прорастание в сосуды, близость к поверхности и краям резекции.
Общие правила ориентировки: кожа и слизистые - должны попасть все слои и подлежащая  ткань.
Трубчатые органы - все слои органа (чаще поперечный разрез)
Паренхиматозные оганы - капсула и слои или структуры ввода-вывода (бронхи в легких или протоки в железах)
В каждом конкретном случае цель исследования диктует способ ориентировки.

Вырезая кусочки площадью 2х2 см и толщиной 3 мм обычно подразумевается, что куосчки будут залиты плоскостью вниз.

Мозг лучше сначала фиксировать 2-3 суток, затем вырезать и потом снова дофиксировать. Тогда не должен развалиться.

Если нет кассет, их лучше попросить хотя бы несколько десятков в дружественных лабораториях. Это не такая дорогая расходка. Их можно использовать много раз. При проводке в марле кусочки слипаются друг с другом и диффузия реагентов между ними минимальна. Нужно хотя бы 2-3 раза в час перемешивать кусочки в марле, тогда будет хоть какой-то толк. Кусочки в марле завязывать лучше по одному. Одним словом, на марле разоритесь быстрее (мы работали десятки лет так, пока не дошло до сознания. Учитесь на наших ошибках). И вообще сейчас продают кассеты все, кому не лень.

P.S. Дурацких и глупых вопросов не бывает, бывают дурацкие и глупые ответы.
 
Oksana)Дата: Суббота, 2013-08-03, 8:55 PM | Сообщение # 390
Майор
Группа: Пользователи
Сообщений: 7
Репутация: 2
Статус: Offline
Спасибо большое! Все поняла, про слипаются - это просто ужас. Постараюсь продемонстрировать результат.

Добавлено (2013-08-03, 8:55 PM)
---------------------------------------------
Уважаемый Maxim! Безмерная моя Вам благодарность! Теперь я тоже обзавелась кассетами! Есть, конечно, "некоторая" разница! Поскольку у меня на все-про все одни руки - я могу в полной мере оценить всю прелесть! Вопросы следующие: при ксилольной проводке у нас материал всегда промывался 12 часов в проточной воде (оставляли на ночь). Насколько я поняла из ветки, промывка должна продолжаться в пределах 2 часов? У меня фиксация в 10% формалине гораздо более 72часов. И еще - можно ли все лимфоузлы от одного мыша поместить в одну кассету? По площади им там более, чем просторно. Кроме того, из Ваших сообщений очень понравилось, что можно не заливать на кубики, но на моих блоках без кубиков резать не получилось - плохо фиксируются. У меня тоже харьковский микротом, теперь вот к нему "приколхозили" держатель для одноразовых лезвий, предназначенный для санных микротомов. Заливаю в чашки Петри, затем режу на блоки. Может, высота блоков должна быть больше?

 
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Проводка и заливка (Детали разныя)
Страница 26 из 34«1224252627283334»
Поиск: