Вы вошли как Гость
Текущая дата: Пятница, 2024-04-19, 9:27 AM
|
Проводка и заливка
|
|
| Maxim | Дата: Среда, 2013-08-07, 0:19 AM | Сообщение # 391 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Оксана, я очень рад, что Вы смогли ощутить радость улучшения своей же работы. Одноразовые лезвия - хорошо. Теперь следующй шаг. Те же самые продавцы предлагают зажим для кассет для тех же харьковских микротомов. Также не дорого.
Для заливки у них же купите несколько видов заливочных форм железных и вы вообще забудете о чашках Петри, вырезании кубиков из парафина, да и сэкономите на парафине здорово, в таких формах расход его минимальный. Сверху форма прикрывается дном от кассеты, застыывает и эту кассету можно зажимать в блокодержателе микротома. Вот и колодка.
Если до этого не дойдет -добудьте где-нибудь металлические уголки-формочки, высотой 2 см, чтобы они создавали кубик с площадью 1х1 дюйм и заливайте в них спокойно. После застывания блоки хорошо охладите, лучше в морозилке до утра и тогда не нужны будут никакие колодки. Собственно говоря, парафин для заливки должен быть твердым, тогда он лучше подерживает ткани. Не все парафины хорошо справляются с этой задачей. Поищите на рынке тугоплавкие варианты (58-60оС). Ткани грызунов достаточно плотные и их лучше заливать в такой парафин.
Лимфоузлы в одну кассету поместить можно, но желательно, чтобы они не слипались. Для этой цели выпускают кассеты с переборками внутри. Может, вам повезет найти такие. Их не все продают, но они не дороже любых других.
Промывки в воде хватит 1 час и полчаса, независимо от времени фикасции. Нужно просто избавиться от избытка фиксатора в кусочках для проводки.
|
| |
| |
| Daniil | Дата: Понедельник, 2013-08-12, 1:39 PM | Сообщение # 392 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 2
Статус: Offline
| Господа, помогите с переводом терминов на английский язык - пытаюсь общаться на тему гистологических проводок с европейцами:
- гистологическая проводка
- Формалин, забуференный или незабуференный
- Формалин на физрастворе
- Осветление
Сообщение отредактировал Daniil - Понедельник, 2013-08-12, 1:44 PM |
| |
| |
| Maxim | Дата: Понедельник, 2013-08-12, 6:10 PM | Сообщение # 393 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| гистологическая проводка - tissue processing
формалин - 10% formaline
забуференный - buffred 10% formaline
незабуференный - unbuffered 10% formaline
Осветеление, если имеется в виду просветление (напр. в ксилоле) - clearing with xylene
Успешных контактов.
|
| |
| |
| Daniil | Дата: Вторник, 2013-08-13, 1:29 PM | Сообщение # 394 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 2
Статус: Offline
| Максим, благодарю Вас!
|
| |
| |
| первопроходец | Дата: Четверг, 2013-10-03, 5:59 PM | Сообщение # 395 |
 Лейтенант
Группа: Проверенные
Сообщений: 51
Статус: Offline
| Уважаемый Максим, хочу выразить Вам огромную признательность за все , что Вы делаете в нашем маленьком , но очень важном гистологическом мире. К сожалению мой роман с госпиталем пришел к концу после того, как начмед решил нагрузку считать не препаратами ,а пациентами ( очень напрягала наша выработка в %). Предложил считать 26 папиллом от одного больного, как 1 номер(препарат).Я отказалась и сейчас счастливо отрабатываю последний месяц контракта.Верю, что все будет хорошо и очень надеюсь подискутировать с Вами еще, т.к. передо мной засветила молекулярная биология в верификации опухолей.Если на просторах Матушки России и других стран есть лаборатории каменного века с ручной проводкой, могу проконсультировать по любому поводу:)))
С признательностью,Первопроходец.
Сообщение отредактировал первопроходец - Четверг, 2013-10-03, 6:00 PM |
| |
| |
| Maxim | Дата: Четверг, 2013-10-03, 7:46 PM | Сообщение # 396 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Очень жаль, что людям приходится менять место работы из-за такой глупости руководства, но, похоже, большому виднее. Что ж, пусть глядит...
Вам хочу пожелать и далее приносить пользу в нашей области. Как видите, поле для деятельности можно найти всегда. Молекулярная биология - это абсолютно другой мир, но там тоже используют наши парафиновые блоки и срезы, поэтому, я уверен, что Вы не раз вернетесь к предшествующим этапам, ведь качество молекулярных исследований прямо зависит от предшествующих этапов.
|
| |
| |
| mistermm | Дата: Пятница, 2013-10-04, 9:37 PM | Сообщение # 397 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 17
Статус: Offline
| Первопроходец, простите, а у Вас зарплата сдельная?
Сообщение отредактировал mistermm - Пятница, 2013-10-04, 9:38 PM |
| |
| |
| первопроходец | Дата: Воскресенье, 2013-10-06, 11:39 PM | Сообщение # 398 |
|
Лейтенант
Группа: Проверенные
Сообщений: 51
Статус: Offline
| Нет,не сдельная, но по результатам ежемесячного, годового и т.д. отчетов мы, наглецы, просим интенсивность, премию и вообще... Почему-то голой ставки( около 200 зеленых) нам не хватает, вот и клянчим, еще и бумажками с приказами прикрываемся. Ну кому это понравится? 
|
| |
| |
| mistermm | Дата: Понедельник, 2013-10-07, 1:41 AM | Сообщение # 399 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 17
Статус: Offline
| Понятно..
|
| |
| |
| nastja | Дата: Понедельник, 2013-10-21, 1:53 AM | Сообщение # 400 |
|
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 64
Статус: Offline
| Уважаемый Maxim!
Мы попробовали депарафинирование с Фейри и окраску без ксилола. Результат понравился. Рутинным метод не будет, т.к. есть стейнер.
Остались некоторые вопросы.
Вот эта почка получилась хорошо.
А здесь канальцы прокрасились неравномерно. Не понятно, то ли депарафинирование неполное, то ли препарат такой.
Вот этот препарат невооруженным глазом:
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Четверг, 2013-10-24, 6:41 AM | Сообщение # 401 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Nastja!
Я рад, что вы смогли попробовать метод депарафинирования с фэйри.
В этих препаратах, особенно в 2 последних, заметно, что депарафинирование было неполным. От этого и белые пятна.
Убедитесь, что перед депарафинированием срезы хорошо высушены и раствор хорошо перемешан.
Стейнер штука хорошая для массовых вещей, но он может также давать не очень хорошие результаты, особенно, если в лаборатории прохладно. Понадобится подогрев первых станций.
|
| |
| |
| nastja | Дата: Суббота, 2013-10-26, 7:39 PM | Сообщение # 402 |
|
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 64
Статус: Offline
| Maxim, спасибо за ответ!
У нас еще возник такой вопрос: можно ли, промыв кассеты от формалина, оставлять их на продолжительное время в изопропаноле? И, если можно, то в какой концентрации. Из-за особенностей графика мы пользуемся отсроченным запуском в карусели и промывать непосредственно перед проводкой не получается.
И ещё вопрос. Нередко посылают мозг, из-за него приходится часто менять спирты. Есть ли какие-нибудь особенности проводки именно мозга?
Подумываем проводить его вручную с маслом.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Суббота, 2013-10-26, 10:11 PM | Сообщение # 403 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Nastja,
70% изопропанол или 70% этанол прекрасная среда для задержки тканей и архива. После хранения в ней получается ИГХ и молекулярные тесты, а после формалина мало что можно сделать. Смело задерживайте в нем ткани на нужный срок.
Тем не менее, я бы делал промывку в воде и фиксацию вне карусели, а задержку в первой станции. Даже можно не готовить специально новый 70% ИПА, а пользоваться тем, который приходит в первую станцию после смен реагентов.
С тканями мозга мы никогда проблем никаких не испытывали. В масле они проводятся очень хорошо. Мозг содержит много всяких жиров, поэтому смена спиртов обязательна. Можно вырезать его не толще 2 мм, тогда лучше проведется. Следите за тщательной пропиткой в парафинах. В карусели их 2 или 3. Этого мало, и я рекомендую добавить еще 1-2 смены парафина по 1 часу вручную. Для мога важна не только фиксация, но и полное обезжиривание и хорошее пропитывание.
|
| |
| |
| вивьен | Дата: Понедельник, 2013-11-25, 4:06 PM | Сообщение # 404 |
 Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 40
Статус: Offline
| Доброго дня, уважаемые коллеги!
Позвольте порадоваться за Ваши успехи, Nastja, в депарафинировании без ксилола.
Пытались сделать без ксилола в нашей лаборатории, но зрезы смываются в первом горячем фери. Стекла забелкованы. Сушка препаратов и при комнатной температуре и в термостате. В чем проблема не могу понять.
Была ли у Вас подобная ситуация и каково было решение.
А проводка з ИПА и маслом идет хорошо.
|
| |
| |
| Oksana) | Дата: Среда, 2013-11-27, 9:14 AM | Сообщение # 405 |
|
Майор
Группа: Пользователи
Сообщений: 7
Статус: Offline
| Здравствуйте, уважаемый Maxim!
Делюсь полученными результатами:
Разница между проводками (ксилол и ИПА-масло) огромная. Спасибо Вам большое! Даже лаборанты, которые ходили следом и говорили, что ничего из этого не выйдет и загублю весь материал примолкли, теперь стали чаще заглядывать - что я там делаю.
Но идеально пока у меня не получается, к сожалению. Прошу Вашего совета.
Материал:крыски-мышки-свинки.
фиксация 10% формалином биовитрума 72ч и больше.
вырезала кусочки толщиной не более 3мм (на радость лаборантам.которые у меня в руках для первых двух крысиных сердец штангенциркуль увидели. До этого кусочки 0,5х0,5х1см вырезались).
В кассете по 2 (если крупные) или 4 кусочка. После парафинов в кассете лежат отдельно.
отмывание 2 часа под проточной водой.
проводка в касетах. Пропись проводки Ваша:
"Проводка с маслом выглядит так:
1. Изопропанол 70% 30 мин
2. Изопропанол 80% 30 мин
3. Изопропанол 95% 30 мин
4. Изопропанол 99% 30 мин
5. Изопропанол:минеральное масло 5:1 50oC 60 мин
6. Изопропанол:минеральное масло 2:1 50oC 60 мин
7. минеральное масло 50оС 1.5 ч (или до утра)"
парафины:
Парафин 60oC 30 мин
Парафин 60oC 30 мин
Парафин 60oC 20 мин
далее раскладка горячм пинцетом в горячий парафин по чашкам Петри
Парафин 60oC 20 мин
быстро ориентацция кусочков и охлаждение.
На сегодняшний день весь материал с эксперимента отмыт от формалина и залит 70% изопропилом.
Проводка в банках 1,2л - 40 кассет. последняя партия на сегодняшний день в масле стоит больше недели при комнатной температуре.
Поскольку я одна, то чтобы не передерживать в парафине материал, я заливаю не больше 10 кассет за раз.
В результате: блоки пластичные, режется замечательно. Но! Есть кусочки, которые по краям нормальные, а в середине крошатся. Смачиваю водой во время резки - лучше, но все равно на стеклах далеко не идеальная картинка.
проводила крыс отдельно, мышей отдельно. по одной прописи, но мышей еще не резала.
Подскажите, пожалуйста, что при проводке делаю не так.
При окраске:
гематоксилин Lillie, делала сама, по Вашей прописи, единственное. что глицерин добавила только через сутки.
Крашу 10мин и я бы не сказала, что препарат перекрашивается... Дифференцирую водным раствором. Ядра, конечно, синие... но на не моих препаратах они намного синее. А вчера обнаружила, что в банке с гематоксилином (в батарее) крупнокристаллический осадок. ??? Накануне его не было. В бутылке с раствором его тоже нет. Профильтровала, поставила обратно, добавила каплю ледяной укс.к-ты. Или надо выбросить и новый готовить?
Препараты сердца получились неравномерно окрашены.Растворы в батарее свежие. В селезенке фолликулы с широкими промежутками, так выглядит передержанная в ксилоле ткань.
сердце, сердце 2
|
| |
| |
|
|
