Проводка и заливка - Страница 38 - Форум
[ Новые сообщения · Участники · Правила форума · Поиск · RSS ]
Вы вошли как Гость
Текущая дата: Пятница, 2024-03-29, 1:00 AM

Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Проводка и заливка (Детали разныя)
Проводка и заливка
dzubenko-lisaДата: Воскресенье, 2017-09-17, 7:06 PM | Сообщение # 556
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 12
Репутация: 1
Статус: Offline
Вы меня неправильно поняли, формалин прозрачный без осадка у нас, а цвет желтый это цвет индикаторной бумаги когда сравнивниваешь результат с ph-шкалой. Будем просить вторую соль. Спасибо большое за подробные ответы.
 
and24Дата: Понедельник, 2017-09-18, 1:30 PM | Сообщение # 557
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 3
Репутация: 0
Статус: Offline
Максим, спасибо! Запрошу методику заливки и декальцинации, которую использовали для этого материала. Может, найду причину опадания срезов.
 
dzubenko-lisaДата: Воскресенье, 2017-10-01, 6:27 PM | Сообщение # 558
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 12
Репутация: 1
Статус: Offline
Максим добрый вечер! Спасибо вам большое за ваши ценные объяснения. Вторую соль закупим. А по соли которая у нас уже есть однозамещенный двухводный фосфат натрия: какое количество необходимо будет добавлять когда будет вторая соль? Я поняла, что одноводного однозамещенного необходимо 40 г, на будущее буду внимательнее.
 
des1castlДата: Понедельник, 2017-11-27, 9:49 AM | Сообщение # 559
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 1
Репутация: 0
Статус: Offline
Здравствуйте! Можно ли хранить, продавать изопропанол без особых разрешений, бумажек? (как в  случае со спиртом или прекурсорами)?
 
MaximДата: Понедельник, 2017-11-27, 9:40 PM | Сообщение # 560
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Репутация: 25
Статус: Offline
Что касается сравнения изопропанола и его содержащих продуктов, то его приобретение, расход и учет не контролируются так жестко, как этанол. Для закупки не нужны специальные лицензии или квоты. Но его пожароопасность никто не отменял и правилам обращения следовать нужно.
Что касается применения любых реагентов в гистологии, патанатомии, и подобных целях, то следуют правилам закупки реагентов для учреждений, выполняющих медицинские исследования. А значит, требуются РУ РЗН на такие реагенты. Но списание и утилизация идут по общим правлам, а они не такие жесткие, как для этанола.
 
Страна_ОзДата: Четверг, 2018-01-11, 3:18 PM | Сообщение # 561
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Репутация: 0
Статус: Offline
Добрый день, уважаемые Maxim и форумчане!)Мне необходимо проконсультироваться по поводу артефактов у меня в препаратах.
Фиксация в 10% нейтр. забуференном формалине, проводка с изопропанолом (раствор
IsoPrep с запахом характерным, закупаем у БиоВитрум) в гистопроцессоре
карусельного типа; парафина у меня 4 ёмкости, в каждой по 1 часу.
Очень часто получается картина как на приложенном фото (печень крысы; в
других органах лабораторных крыс и кроликов тоже бывает похожая картина с
большим количеством трещин и разрывов).
Хочу наконец разобраться, в чём я ошибаюсь.
Спасибо!

Прошу прощения, пока не разобралась, как на форуме правильно прикреплять фото.

https://img-fotki.yandex.ru/get/483372/359366932.0/0_186a69_e277c182_XL

http://ihc.ucoz.ru/photo/pechen_artefaktkh4_kopija/23-0-748


Сообщение отредактировал Страна_Оз - Четверг, 2018-01-11, 3:31 PM
 
MaximДата: Пятница, 2018-01-12, 11:01 AM | Сообщение # 562
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Репутация: 25
Статус: Offline
В печени крысы артефакт представляет собой результат избыточной дегидратации (Isoprep отнял всею несвязанную воду и начал вытаскивать из белков воду, входящую в их состав). Произошло это скорее всего от короткого времени фиксации и/или слишком длительной дегидратации. Ткани грызунов содержат гораздо меньше воды, чем ткани человека и поэтому им длительная дегидратация не нужна, но важно хорошее пропитывание парафином. Метод проводки без просветлителя для таких целей является очень спорным.
Попробуйте смачивать блок при резке кубиком льда или несколькими каплями теплой воды.
 
pisikot2706Дата: Понедельник, 2018-01-15, 8:23 PM | Сообщение # 563
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 11
Репутация: 2
Статус: Offline
Добрый день, уважаемый  Maxim и форумчане! помогите разобраться с препаратами. В последней партии некоторые образцы получились полосчатыми. Органы крысы. Была смена изопропанола. фиксация формалин (длительная, 3 недели), после промывки 70% изопропанол (причем он изменил цвет, пожелтел) на ночь при 37С, затем 5 смен ИПА при 37С, 2 смеси изопропанола с маслом при 50С по 1,5 ч, масло на ночь, 4 парафина по часу. Часть образцов как бы пересохли, полосчатые. Но! Поджелудочная железа крысы никак у меня не получается, она всегда такая выходит, чуть лучше иногда. никак не могу разобраться.
http://ihc.ucoz.ru/photo/makroskopicheskaja_diagnostika/vremennoe_razmeshhenie/img_7080/87-0-755
http://ihc.ucoz.ru/photo/makroskopicheskaja_diagnostika/vremennoe_razmeshhenie/img_7028/87-0-750
http://ihc.ucoz.ru/photo/makroskopicheskaja_diagnostika/vremennoe_razmeshhenie/img_7077/87-0-753
http://ihc.ucoz.ru/photo/makroskopicheskaja_diagnostika/vremennoe_razmeshhenie/img_7029/87-0-751
http://ihc.ucoz.ru/photo/makroskopicheskaja_diagnostika/vremennoe_razmeshhenie/img_7024v/87-0-749


Сообщение отредактировал pisikot2706 - Понедельник, 2018-01-15, 8:33 PM
 
MaximДата: Понедельник, 2018-01-15, 10:42 PM | Сообщение # 564
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Репутация: 25
Статус: Offline
Ну что можно сказать - только посоветую прочесть предыдущий пост об избыточной дегидратации и не применять подогрев на этапах с изопропанолом. Все остальное сделано правильно. Это артефакт, показанный на всех фото называют "venetian blindes" (венецианские жалюзи). При такой дегидратации с подогревом может и не помочь смачивание блока при резке теплой водой, однако попробуйте, вдруг сработает.
Отрадно отметить, что даже на фоне артефактов и на простом фото через мобильник (так ведь было сделано?) необработанном в редакторе хорошо видна яркая и четкая окраска - это одно из важных преимуществ метода с маслом. Понятно, что глазам в микроскопе картинка видна куда ярче и четче!
Итак, сократите время дегидратации до 30 минут на каждой станции и без подогрева (!), все остальное - без изменений.
Цвет образца, фиксированного формалином при переносе в спирты меняется с сероватого на естественный, который и был до фиксации. Свойство любого спирта возвращать естественный цвет обусловлено разрушением связей формалина и гемогобинсодержащих пигментов на связь их со спиртами (я не смог быстро найти точное и детальное химическое описание этого процесса, поэтому привел по памяти). Билирубин печени становится желтым, а кровь - темно-красной. Равномерное и полное восстановление естественной окраски является одним из индикаторов успешного обезвоживания спиртами. Но при неполной формалиновой фиксации образец не становится полностью серым - обычно внутри есть красноватые участки. Потом это видно на препарате в виде "зонально неравномерной картины фиксации" (после окраски).
Или это изопропанол пожелтел? Да, изопропанол после проводки желтеет, насыщается жирами и прочей грязью, это ожидаемо. Точно также ведет себя и этанол. А если еще и мутнеет, то жира настолько много, что при наличии воды образуется муть. Такой дегидратант уже не годен для обезвоживания. В батарее для проводки ничего не должно мутнеть.
 
pisikot2706Дата: Вторник, 2018-01-16, 10:49 AM | Сообщение # 565
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 11
Репутация: 2
Статус: Offline
Maxim, спасибо за ответ. Конечно я думала про избыточную дегидратацию. Просто не могу выловить подходящую для себя схему. При бОльшем времени нахождения в спиртах не было такой картины. А здесь только часть препаратов такие получились. Пытаюсь понять в чем дело. В термостате спирты держу, так как температура в помещении у нас может меняться значительно, поэтому стараюсь создать стандартные одинаковые условия. Спасибо большое за ответ, буду дальше пробовать
 
MaximДата: Вторник, 2018-01-16, 10:54 AM | Сообщение # 566
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Репутация: 25
Статус: Offline
Тогда фиксацию тоже проверьте, все ли правильно, хороший ли формалин и т.д. По идее никаких таких фокусов не должно получаться, особенно, если все шло в одной серии или от одного животного. Надеюсь, все это проводится в кассетах, а не в марле?
"Стандарт" (приемлемые условия) - банки на столе и без открытых окон, температура в помещении 18-22оС. Этого для дегидратации вполне достаточно.
 
pisikot2706Дата: Вторник, 2018-01-16, 10:57 AM | Сообщение # 567
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 11
Репутация: 2
Статус: Offline
Да, конечно в кассетах. Фиксация да, слежу за этим
 
baigildinsamatДата: Вторник, 2018-01-23, 3:00 PM | Сообщение # 568
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 8
Репутация: 0
Статус: Offline
Здравствуйте! В препаратах появляются артефакты, похоже из-за переобезвоживания как писали выше. 
При сушке в термостате срезов после окраски ткани рвутся.  Может метод описанный в (Санамян, 2012) поможет сохранить ткани крыс и мышей целыми?
Далее цитата:
"Намудалось упростить процедуру и исключить ксилол из нее. После окраски
мы помещаем срезы сразу в 100 % изопропанол: две смены по примерно
30 секунд, а в качестве заключающей среды используем раствор пихтового бальзама в изопропаноле. Такие срезы немного дольше сохнут, по
сравнению с «ксилольными», но по остальным показателям (в частности
прозрачности) практически не уступают им" (Санамян К. Э., Санамян Н. П. МЕТОД «ИЗОПРОПАНОЛ—МИНЕРАЛЬНОЕ МАСЛО» В ГИСТОЛОГИИ //ХIII международной научной конференции 14–15 ноября 2012 г. – С. 155).
Благодарю заранее за отклик!
 
MaximДата: Вторник, 2018-01-23, 7:15 PM | Сообщение # 569
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Репутация: 25
Статус: Offline
baigildinsamat,
Карен Санамян - морской биолог, часть его работ посвящена актиниям. У актиний есть свои особенности биологии, а также фиксации и т.п. Приведенная вами цитата относится к исключению ксилола из процесса окраски и заключения. В списке его публикаций http://www.sanamyan.com/publications/ можно найти несколько статей (76, 80, 93, 95), где есть фото срезов новых видов актиний. Они сделаны согласно цитируемому методу. (На его сайте очень много красивых фото Камчатки и подводного мира).
Вы спрашиваете о тканях мышей. Окрашенные и заключенные срезы никак не должны разрываться. К этому моменту ткани не один раз проходят границу полярных и неполярных растворителей и обычно разрывы случаются либо при первом переходе от полярного к неполярному (проводка), либо при втором (депарафинирование). Разрывы в тканях и срезах на этих этапах появляются от неправильной фиксации или избытчной дегидратации. Поэтому есть смысл проверить еще раз реагенты и весь протокол от момента взятия материала.
Использование разных типов сред для заключения не сохранит срез, если нарушена фиксация и проводка.
 
baigildinsamatДата: Четверг, 2018-01-25, 7:57 AM | Сообщение # 570
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 8
Репутация: 0
Статус: Offline
Maxim, 
Красивые фотографии, качественное оформление статьи, хорошая идея сайта.

Разрывы появляюься после эозина (2010-07-23, 3:27 PM | Сообщение # 136 (Что касается этапов после эозина: дистиллированная вода - промыть и далее сушить в термостате до полного высыхания. Обычно достаточно 5-10 минут. Затем заключение). В случае ксилола не появляются. 
Возможно длительная фиксация так повлияла, на фото белый осадок не удалился после промывания в проточной воде на ночь. Как нужно сократить дегидратацию: держать в АИпС по 50 минут вместо часа или сократить количество банок в батарее до 4, например? https://yadi.sk/i/tbUxAqTa3Rm5iU
 
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Проводка и заливка (Детали разныя)
Поиск:

Сайт управляется системой uCoz