Вы вошли как Гость
Текущая дата: Пятница, 2024-04-26, 2:10 AM
|
Проводка и заливка
|
|
| Maxim | Дата: Четверг, 2018-01-25, 11:57 AM | Сообщение # 571 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| baigildinsamat,
Так не должна выглядеть ткань в блоке. Он соверешенно неправильно фиксирован и обезвожен. Мои вопросы:
1. Какой фиксатор был использован (%, название, произодитель)? Он был свежий или повторно использован?
2. Толщина вырезанного кусочка?
3. Время фиксации?
4. Каково было соотношение объемов фиксатор / ткань?
5. Промывка после фиксации в воде сколько по времени?
После ответа на эти вопросы двинемся дальше.
|
| |
| |
| baigildinsamat | Дата: Пятница, 2018-01-26, 11:58 AM | Сообщение # 572 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 8
Статус: Offline
| Maxim,
1. Формалин забуференный как в презентации (Формалин технический, сорт 1, ОАО Метафракс) 2013-2014 года. Приготовили до забора материала за сутки взбалтывая осадок. Осадок растворялся при приготовлении (в термостате 37 град. при помешивании).
2. не больше 6 мм, обычно 4-5
3. Фиксация 4 месяца.
4. 20:1 или 25:1.
5. 17 часов (в конце дня - до утра)
Такой пигмент обычно встречается вдоль кровеносных сосудов, наверное это формалиновый осадок или соли не промылись. Также заказали новый формалин.
Наверное стоит весь мокрый архив скорее перенести в 70% изопропанол?
прикрепляю одно фото в двух обменниках.
https://img-fotki.yandex.ru/get/1126624/80512805.0/0_321f92_819bfa84_orig.jpg
http://uploads.ru/65CNY.jpg
Сообщение отредактировал baigildinsamat - Пятница, 2018-01-26, 11:59 AM |
| |
| |
| Maxim | Дата: Пятница, 2018-01-26, 12:11 PM | Сообщение # 573 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Эти блоки гораздо лучше предыдущего. Белые участки - недофиксированы и недопровдены.
Да, нужно попробоватьдругой формалин.
Толщину блоков на вырезке нужно обязательно уменьшить до 3 мм, иначе все проникает медленно, а время впроводке для блоков 4-5 мм нужно будет увеличивать в 2-3 раза, и в этот момент в парафине они будут еще больше уплотняться и вся работа в итоге будет никакая.
Время фиксации свежих кусочков не меньше 24 часов, лучше 48, но толщина не более 3 мм!
Да, архив промыть в прочтоной воде не меньше 1 часа, и потом перенести в 70% изопропанол. Долго в формалине держать не стоит.
|
| |
| |
| baigildinsamat | Дата: Пятница, 2018-01-26, 3:16 PM | Сообщение # 574 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 8
Статус: Offline
| Maxim,
Хорошо, благодарю! Все советы применю.
|
| |
| |
| kpigalov | Дата: Понедельник, 2018-10-15, 3:42 PM | Сообщение # 575 |
|
Сержант
Группа: Проверенные
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Maxim, Добрый день!
Ручной протокол проводки операционного материала
1. Этанол -1 час
2. Этанол - 1 час
3. Этанол - 1 час
4 изопреп - 1 час
5. изопреп - (на ночь)
3 парафина по 1 часу.
Врачи говорят что препараты пересушены. Может добавить промежуточную среду орто-ксилол? Помогите не знаем что делать! В ручную стали проводить, так как сломался процессор
Сообщение отредактировал kpigalov - Вторник, 2018-10-16, 12:44 PM |
| |
| |
| Maxim | Дата: Понедельник, 2018-10-15, 4:05 PM | Сообщение # 576 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Kpigalov,
Попробуйте для начала пройтись по нижеследующему чек-листу:
Проверьте для начала фиксацию с момента взятия материала. Где берут материал клиницисты и не промывают ли любезно водой до фиксации?
Соблюдается ли толщина вырезки не толще 3 мм?
Время после вырезки 24 часа в 10% нейтральном забуференном формалине?
Каждый раз смена формалина свежая?
Промывка перед проводкой в проточной воде 30-60 минут?
Если все это соблюдается и проблема остается, замените весь этанол на изопропанол. Все должно прийти в норму.
Если нашлись проблемы по ходу чек-листа, решите их. Обязательно порекомендуйте клиницистам обзавестись таким формалином, который вы считаете приемлемым. И все наладится.
|
| |
| |
| kpigalov | Дата: Понедельник, 2018-10-15, 4:30 PM | Сообщение # 577 |
|
Сержант
Группа: Проверенные
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Maxim, У нас проблем в процессоре не было. Протокол такой формалин 2, изопреп 5, ксилол 2, парафин 4.
В ручном, после вырезки фиксация 24 часа. Толщина вырезки не более 3 мм.
Если добавить ксилол 1,5-3 часа после изопрепа, или этанол пересушивает?
Еще проблема, не знаем сколько времени проводить эндоскопию. Время в изопрепе, и можно ли оставлять на ночь?
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Понедельник, 2018-10-15, 4:33 PM | Сообщение # 578 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Я не говорю, что в проводке какая проблема. Нужно начать с фиксации. 95:5 что там какой-то косяк с формалином. И это не исправляется ничем и никак.
Для эндоскопий достаточно 3 или 3.5 часов проводки суммарно.
Я бы не пускал ее через этанолы. Только через изопропанол. Но у меня дальше смеси с маслом. И от этого метода я уже не отхожу 10й год и собираюсь так работать и дальше.
|
| |
| |
| kpigalov | Дата: Понедельник, 2018-10-15, 4:38 PM | Сообщение # 579 |
|
Сержант
Группа: Проверенные
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Maxim, Я думаю проблем с фиксацией нет. Мы в начале пробуем на секционном материале, потом операционный. Завтра попробую заменить первые спирты на изопреп. Может это исправит проблему?
Добавлено (2018-10-15, 4:40 PM)
---------------------------------------------
Цитата Maxim (  ) Для эндоскопий достаточно 3 или 3.5 часов проводки суммарно.
Сообщение отредактировал kpigalov - Понедельник, 2018-10-15, 4:58 PM |
| |
| |
| Maxim | Дата: Понедельник, 2018-10-15, 5:00 PM | Сообщение # 580 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Да, секционный материал внутри лаборатории - это эталон качества внутренний. Важно проследить трекинг материала от операционной до лаборатории. Именно там косячный формалин, который портит все дело.
Замена изопрепа вместо этанола - это хорошо.
Да, для эндоскопий можно так:
2-3 изопрепа по 30 мин и 3 парафина по 30 мин. (Но я не люблю метод без масла)
|
| |
| |
| kpigalov | Дата: Понедельник, 2018-10-15, 5:06 PM | Сообщение # 581 |
|
Сержант
Группа: Проверенные
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Maxim, Спасибо за советы! Хорошо что есть такой форум и такие грамотные специалисты. Завтра буду пробовать.
Сообщение отредактировал kpigalov - Вторник, 2018-10-16, 2:50 PM |
| |
| |
| tyrist41 | Дата: Четверг, 2018-11-08, 10:42 AM | Сообщение # 582 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 2
Статус: Offline
| Кто-нибудь пользуется для проводки вместо ксилола раствором microclearing?
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Четверг, 2018-11-08, 11:02 AM | Сообщение # 583 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Microclearing - раствор на основе d-лимонена. В просветлении сильно уступает ксилолу. Жуткий цитрусовый запах, мощный аллерген. И еще и дорого стоит. Не советую.
|
| |
| |
| tyrist41 | Дата: Четверг, 2018-11-08, 1:40 PM | Сообщение # 584 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 2
Статус: Offline
| Спасибо.
|
| |
| |
| Страна_Оз | Дата: Пятница, 2019-03-15, 2:05 PM | Сообщение # 585 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Добрый день, Maxim!
Больше года назад Вы дали рекомендации по поводу избыточной дегидратации в препаратах крыс. Я тогда свалилась с ветрянкой и только сейчас поняла, что из-за этой ветрянки забыла поблагодарить за рекомендации. Прошу прощения и огромное спасибо!
Цитата Страна_Оз ( ) Фиксация в 10% нейтр. забуференном формалине, проводка с изопропанолом (растворIsoPrep с запахом характерным, закупаем у БиоВитрум) в гистопроцессоре карусельного типа; парафина у меня 4 ёмкости, в каждой по 1 часу. Очень часто получается картина как на приложенном фото (печень крысы; в других органах лабораторных крыс и кроликов тоже бывает похожая картина с большим количеством трещин и разрывов). Хочу наконец разобраться, в чём я ошибаюсь. Спасибо! http://ihc.ucoz.ru/photo/pechen_artefaktkh4_kopija/23-0-748
Цитата Maxim ( ) В печени крысы артефакт представляет собой результат избыточной дегидратации (Isoprep отнял всею несвязанную воду и начал вытаскивать из белков воду, входящую в их состав). Произошло это скорее всего от короткого времени фиксации и/или слишком длительной дегидратации. Ткани грызунов содержат гораздо меньше воды, чем ткани человека и поэтому им длительная дегидратация не нужна, но важно хорошее пропитывание парафином. Метод проводки без просветлителя для таких целей является очень спорным.Попробуйте смачивать блок при резке кубиком льда или несколькими каплями теплой воды.
У нас небольшой поток препаратов, за прошедший год был один эксперимент с гистологическими исследованиями органов крыс. Я сократила время проводки в изопрепе: 6 емкостей по 45 минут в каждой. Далее 4 емкости с парафином по часу в каждой. Пока ещё получаются вот такие вот препараты.
http://ihc.ucoz.ru/photo/serdce_kh10/23-0-762
http://ihc.ucoz.ru/photo/serdce_kh10/23-0-761
http://ihc.ucoz.ru/photo/semennik_kh10/23-0-760
http://ihc.ucoz.ru/photo/podzheludochnaja_kh10/23-0-759
http://ihc.ucoz.ru/photo/pechen_artefakty/23-0-758
http://ihc.ucoz.ru/photo/pechen_kh10/23-0-757
Спасибо!)
Сообщение отредактировал Страна_Оз - Пятница, 2019-03-15, 2:08 PM |
| |
| |
|
|
