Вы вошли как Гость
Текущая дата: Вторник, 2024-04-16, 10:08 PM
|
Проводка и заливка
|
|
| Maxim | Дата: Пятница, 2010-04-30, 8:21 PM | Сообщение # 61 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Уважаемый Roman!
Я полностью понимаю Ваше положение, поскольку не так давно мы были в примерно таком же.
Промывка после фиксации формалином необязательна. В вакуумных и карусельных процессорах такой возможности нет.
У нас в лаборатории нет вытяжки над столом для проводки и поэтому мы обязательно 10-15 минут промываем все кассеты водой.
Избыток формалина и мелкой грязи при промывке водой удаляется, а перекрестные и водородные связи от такой обработки не разрушаются. Промывайте смело - это улучшит "культуру производства". От соскобов и плацент всегда больше грязи, чем от кусочков. Первый изопропанол после проводки не должен быть мутным. Муть означает недостаточную промывку в воде. Ни один реагент в проводке не должен быть темным или мутным. Это сигнал к изменению расписания проводки. Фильтрация не помогает в этом случае. Это правило работает для любых реагентов (этанол, ацетон, изопропанол, и т.д.)
Есть случаи, когда промывка в воде ухудшает качество препаратов. Это трепанобиоптаты костного мозга. Все этапы промывки между формалином и декальцинатором (14% ЭДТА, забуференная NaOH до рН 7.4) и изопропанолом должны выполняться в физиологическом растворе (каждый раз 2 смены по полчаса, с перемешиванием время от времени). Тогда получаются очень красивые результаты окраски Г-Э, по Романовскому (и аналоги) и т.п.
Резюме: промывка 10-15 минут в проточной воде (холодной или комнатной температуры) после формалина перед проводкой желательна. Добавлено (2010-04-30, 8:21 PM)
---------------------------------------------
Прошу извинить за повторения, но у меня не всегда срабатывает отправка ответа.
Правда, хорошо бы, если бы авторы могдли хотя бы первые минут 10-15 редактировать свои ответы, и удалять лишнее.
Стыдно перед людьми и время лишнее уходит...
|
| |
| |
| Чакона | Дата: Пятница, 2010-04-30, 10:59 PM | Сообщение # 62 |
|
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 109
Статус: Offline
| Quote (Roman) У кого денег просить, у главного врача больницы, где аппараты ИВЛ такой же давности как и наш косметический ремонт, электрокардиограф работает с перебоями. Да у нас в патанатомии дела еще получше, чем в клинической лаборатории. Нет, ну, конечно, когда в больнице даже ЭКГ сделать толком нельзя - то оно... какие там кассеты. Тут только главнюка (разного уровня) пристрелить - больше выхода нет.
Чаще же приходится видеть иную ситуацию - в хирургические отделения закупают всякие новые эндоскопические стойки, тогда как патологоанатомические стирают и сушат для повторного применения фильтровальную бумагу. И вот с этим нужно решительно кончать. Добавлено (2010-04-30, 10:59 PM)
---------------------------------------------
Quote (Roman) не считая может быть некоторых крупных городов. Томск и Новокузнецк на крупные города как-то не тянут. Quote (Roman) Не хотите: металлические тюбики из-под зубной пасты режутся на полоски сворачиваются в кольца и так заливаются соскобы в чашках Петри, еще бумажечка с номером сверху прикрепляется. А вот интересно, что будет: если взять и списать к едреням старые харьковские микротомы (а это, я думаю, не очень сложно - многие из них давно уже не удовлетворяют техническим требованиям по причине старости) - купит ли начальство новые хорошие микротомы (а других сейчас найти трудно), изыскав деньги хоть в горздраве, хоть в облздраве, хоть у частного спонсора - или предпочтет закрыть просто патанатомию? Нет, если серьезно? 
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Суббота, 2010-05-01, 9:31 AM | Сообщение # 63 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| НиQuote (Чакона) что будет: если взять и списать старые харьковские микротомы
Ничего не будет. Наши харьковские микротомы были официально списаны 10 лет назад (им тогда было от роду больше 20 лет). 4 года назад появились некоторые копейки и на них началсьство без нас решило купить нам новые харьковские. Купили. Они еще хуже старых. Один оставили для работы с заморозаживающим столиком (благо нечасто делается). Воторой был вообще непотребный, его так и вынесли в подвал. Взяли старые столики от микротомов и умельцы уже трижды переделывали зажимы для блоков, усиливали направляющие и пока еще на поллднем издохе все это движется.
Стали проходить наконец-то стадию лицензирования, которое предполгает сервисное обслуживание. Приехали медтехники, впервые увидели такие приборы и откзадлись от сервиса. Другие также, однако, попался дядечка, кое-что смыслящий в механике и изрек следующее: восстановить можно, но заказ нужно отдавать на завод, где есть масса станков для точного оборудования (у нас это авиазавод, где теперь амфибии делают). На заводе с этим справятся только старики, которые понимают, что и как нужно сделать. Они работают на госзаказах и физически не смогут это сделать, а если и возьмутся, то это выйдет в стоимость двух новых харьковских микротомов. Молодежь ничего не сделает. Вобщем он готов написать резюме, что они восстановлению не подлежат. Приватно я ему сказал, что для нас это было бы желательно при любом раскладе. Это было больше месяца назад. Пока затишье.
В прошлом году один мой знакомый взял и переделал один столик полностью (глобально изменил систему направляющих и механизм зажима с применением очень прочных материалов). Задействовал на заводе четыре станка и троих своих друзей. За три месяца (промежутки от основной работы и шабашек) он сделал такой столик, от которого моя жена в восторге (она работат лаборантом, но резка на старых станках у нее вызывает огромные трудности). Разумеется, деньги он не взял, но подтвердил все то, что сказал медтехник. На другие у него нет не только времени, но и желания. Он делал его по-дружески, выручал меня. Затраты не его восстановление не стоят усилий.
Такимобразом мы все же надеемся, чт ов скором времени у нас будут хорошие микротомы. К этой мысли уже приучили руководство. Дело в деньгах.
|
| |
| |
| Roman | Дата: Вторник, 2010-05-04, 5:54 PM | Сообщение # 64 |
|
Просто профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 220
Статус: Offline
| Quote (Maxim) началсьство без нас решило купить нам новые харьковские
Такая же история, с той лишь разницей, что мы были в курсе происходящего. Купили ОДИН харьковский микротом и тот возвращали шлифовать полозья (или как там их). теперь режем на нем (2 лаборанта на одном по очереди).
От всего человека вам остается часть...
И. Бродский
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2010-05-04, 9:32 PM | Сообщение # 65 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Мой друг механик, который возродил и существенно модернизировал столик, взялся за восстановление одного полностью "убитого" микротома. Когда он попытался отшлифовать полозья, у него ушло на это очень много сил и были задействованы несколько человек и разные станки. Ни одна из привязок, от которой можно было отсчитывать ноль не была пригодной. Он шлифовал, начиная от ножек, затем боковые поверхности, предварительно сняв боковые крепления типа ласточкиного хвоста (для перемещиения столика) и только после их вышлифовывания приступил к направляющим. Разумеется, все под контролем лазерных уровней. Конечно, сделал, что планировал. Сказал, что хуже стали в руках не держал.
А вновь купленные микротомы настолько отвратные, что на рабочих поверхностях у них круговые следы от шлифовки, чего не должно быть на таких поверхностях.
Основная причина, по которой стираются полозья - пылевая взвесь в помещении лаборатории, которая оседает на смазанные маслом поверхности станка и это отличный абразив на протяжении десятков лет. Провал в середине получается от того, что здесь в 2 раза чаще проходит держатель ножа, чем с краю. Поэтому движения от начала до конца никогда не изнашиваютс станок равномерно, как это обычно рекомендуют. Только лаборанту лишняя работа.
|
| |
| |
| Чакона | Дата: Пятница, 2010-05-14, 7:57 PM | Сообщение # 66 |
|
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 109
Статус: Offline
| По результатам заливки через масло: получилось хорошо, даже хрусталики почти не пересушены. Но, в общем-то, у нас и на ксилоле так же хорошо получается (кроме хурсталика, конечно).
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Пятница, 2010-05-14, 9:27 PM | Сообщение # 67 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Уважаемый Чакона!
Большое спасибо за впечталения о методе. Это важно не для одного меня.
Дефекты пересушивания исправляются смачиванием блока при резке обычной водой в течение 1 мин и затем первые срезы получаются отличными.
В статьях об этом методе проводки так и написано, что при слепом тестировании большого количества пар образцов, проведенных по двум методам никто из патологов не смог отдать предпочтение тому или иному методу, то есть они диагностически эквивалентны. Это было доказано и стаитстическими расчетами.
На мой личный взгляд ткани, проведенные через изопропанол и масло, все же выглядят несколько ярче и четче, чем с этанолом и ксилолом (с ацетоном и уайт-спиритом). При резке лаборанты все заметили, что ткани, провденные через масло режутся гораздо проще.
И добавлю то, что были использованы безопасные реактивы (изопропанол и масло). Разве здоровье лаборантов и помощников в лаборатории ничего не стоит? А безопасность для окружающей среды оцените позже, когда будут наступать на пятки и давить на шею росздравназдор со своими штрафами и требованиями.
Я уже молчу об экономической стороне, как списание этанола и стоиомость других реагентов.
|
| |
| |
| anubis | Дата: Пятница, 2010-05-28, 1:12 PM | Сообщение # 68 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Заранее прошу прощения, если задаю глупый вопрос, но в химии я не сильна. Скажите, а нельзя ли в проводке с изопропанолом и минеральным маслом вместо изопропанола использовать этанол?
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Пятница, 2010-05-28, 6:09 PM | Сообщение # 69 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Quote (anubis) нельзя ли в проводке с изопропанолом и минеральным маслом вместо изопропанола использовать этанол?
К сожалению, нельзя. Этанол ни при каких обстоятельствах не смешивается с минеральным маслом. Диэлектрическая константа этанола (полярность) ε=25 при 25оС, то есть он находится в диапазоне неполярных жидкостей. Верхний предел для них 20.
Изопропанол в 1.3 раза тяжелее этанола и это менее полярный (ε = 18 при 25ºC) (23) вторичный спирт. Нахождение в диапазоне неполярных жидкостей позволяет ему смешиваться с парафином особенно после 25ºC. Нагревание изопропанола с минеральным маслом в определенных соотношениях (см. метод в предыдущих письмах) позволяет получить однородный прозрачный раствор, в котором одновременно заканчивается дегидратация и начинается просветление. Этот постепенный переход очень благоприятно сказывается на проводке таких трудных тканей как матка, кости, глазные яблоки, жир, фиброзная ткань и т.п.
Никто бы не стал возитьс яни с какими другими веществами, если бы этанол смешивался с маслом. И если бы так было, то этот метод проводки применили бы еще в 19 веке.Добавлено (2010-05-28, 6:09 PM)
---------------------------------------------
И еще хочу сказать, что не стоит так пугаться названия минеральное масло. Это обычное вазелиновое масло или жидкий парафин. Он широко использется в косметической промышленности и автоиндустрии. Это тот же парафин, только с низким молекулярным весом. Вес его настолько мал, что он имеет жидкое агрегатное состяние при комнатной температуре. Например, в обычном парафине содержатся углеводороды, с 20-22 атомами углерода в цепи, а в вазелиновом масле их порядка 15-16. Это полностью неполярное вещество. Отстутствие ароматических содеинений, как ксилол, толуол и прочие делает его совершенно нетоксичным как для персонала, так и для окружающией среды.
|
| |
| |
| anubis | Дата: Понедельник, 2010-05-31, 1:05 PM | Сообщение # 70 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Maxim, большое спасибо за ответ. Ваш метод меня очень заинтересовал, и я бы хотела его внедрить и в нашем отделении,т.к. из-за неисправных вытяжек работать с ксилолом особенно в зимнее время практически невозможно. Просто по старой русской привычке хотелось "и рыбу съесть, и аквариум выпить", а точнее оставить спирт , т.к мы единственное отделение кому этот продукт ещё поставляют в больнице в чистом виде 
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Понедельник, 2010-05-31, 1:40 PM | Сообщение # 71 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Именно по той же причине - отсутствию вытяжек (а их нет и до сих пор) мы и перепробовали массу вариантов реактивов для проводки. И остановились на этом. Прежде чем сделать это, провели слепое тестирование сначала на Г-Э, потом на 13 гистохимических окрасках и в результате стаитстического анализа не было выявлено предпочтений того или иного метода ни одинм из патологов. Однако, лаборанты заметили, что с маслом ткани режуся лучше. Безопасноть сыграла решающую роль.
Этанол спокойно используйте как необходимо (это отличный резерв для решения многих нерешаемых вопросов). Только обязательно предупредите (особенно дежурный персонал), что изопропанол употреблять внутрь нельзя, чтобы потом не было обид и прочих фокусов с участием скорой помощи т.д.
Единственный минус, который остается с новым методом - запах кошачьей мочи, который заполняет лабораторию на время перекладки кассет из банки в банку. Но он очень быстро улетучивается при проветривании.
|
| |
| |
| anubis | Дата: Среда, 2010-06-02, 12:25 PM | Сообщение # 72 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Maxim, ксилол в нашей лаборатории используется так же и при окраске срезов, причём лаборанты жалуются что этот процесс ещё более "ароматный" чем сама проводка. А как ваша лаборатория решает подобную проблему?
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Среда, 2010-06-02, 3:48 PM | Сообщение # 73 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Уважаемая anubis!
Нет ничего проще, чем депарафинирование без ксилола.
В этой же теме на странице 2 пост №18 ЧИТАЙТЕ Метод изложен очень подробно.
Некоторые лаборатории в России и за рубежом стали использовать этот метод в качестве своего основного метода.
Мы еще не дожили до стекол со шлифованным краем, которые можно подписывать простым карандашом. Тушь облазит в водных растворах со стекол.
Есть некоторые тонкости для гистохимических окрасокс этим методом депарафинирования, если будут конкретные вопросы - спрашивайте. обсудим.
Сообщение отредактировал Vladpatholog - Воскресенье, 2010-06-13, 5:11 PM |
| |
| |
| anubis | Дата: Четверг, 2010-06-03, 11:15 AM | Сообщение # 74 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Статус: Offline
| А мои лаборанты сами зачищают край стекла мелкой наждачкои и карандаш отлично держится Добавлено (2010-06-03, 11:15 Am)
---------------------------------------------
У меня ещё вопрос по забуференному формалину, как можно приготовить его из обычного который нам упорно закупает администрация больницы? Точнее в каком соотношении должны быть реагенты?
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Четверг, 2010-06-03, 11:47 AM | Сообщение # 75 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Да, такой метод подготовки предметного стелка нам известен, также как и еще полтора десятка других, включая макание стекол в раствор плавиковой кислоты...
Однако, когда стекол порядка 85000 каждый год, это занятие кажется безумно утомительным. Дешевле купить стекла. Собственно к этому мы и толкаем нашу администрацию. Но, как известно, скоро сказка сказывается... Добавлено (2010-06-03, 11:47 Am)
---------------------------------------------
Что касается приготовления формалина, вопрос действительно сложный. Но я помещаю свой ответ здесь:
читайте пост №16, поскольку там ему самое место
Сообщение отредактировал Vladpatholog - Воскресенье, 2010-06-13, 5:13 PM |
| |
| |
|
|
