Вы вошли как Гость
Текущая дата: Суббота, 2024-04-20, 7:02 AM
|
Проводка и заливка
|
|
| bylavka92 | Дата: Вторник, 2016-05-31, 4:40 AM | Сообщение # 481 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 3
Статус: Offline
| Maxim, спасибо)
|
| |
| |
| dzubenko-lisa | Дата: Среда, 2016-06-29, 6:42 PM | Сообщение # 482 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 12
Статус: Offline
| Здравствуйте, спасибо большое Максим за ответы. Заведующая у нас благо неравнодушная и активно работает над обеспечением лаборатории. С начальницей договорного отдела тоже беседы провела и обрисовала чего и насколько нам хватит,рапорта написали, глав врача тоже в известность поставили. На дням должны прийти лезвия... Добавлено (2016-06-29, 6:33 PM)
---------------------------------------------
Леонора по поводу проводки на изопропиловом спирте,мы так работаем: у нас он идёт химически чистый цена без НДС 189 руб за канистру.я когда узнала цену изопрепа в разных фирмах от 1500 и выше, так здесь мы сколько экономим,так и сказала в договорном... Если нужна фирма в лс,могу написать Добавлено (2016-06-29, 6:42 PM)
---------------------------------------------
Я вот ещё прошу откликнуться по поводу ротационных микротомов, чем отличается автомат от полуавтомата? Я поняла что в полуавтомате ручку(макровинт) крутишь при резке,а в автомате кнопку жмёшь и он сам режит... Есть у кого опыт работы на таком? У нас ситуация такова :строят перинатальный центр и на 1 из этаже хотят поместить нас, т.к. На все это выделяется федеральный бюджет то по проекту там в лаборатории должен быть полный комплект всего всего, пока Москва одобрила проект вместе с нашей лабораторией. Вот теперь мы должны написать какое оборудование нам необходимо, а именно фирмы. Хотелось бы советов от лабораторий,которые оборудованы по последнему слову техники или хотя бы по предпоследнему)))
|
| |
| |
| ivan11011994 | Дата: Четверг, 2016-06-30, 3:53 PM | Сообщение # 483 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 2
Статус: Offline
| Здравствуйте, можете ли Вы подсказать, какая проводка подойдет для органов лягушки: печени, почек и гонад (предпочтительнее семенников)? Буду очень признателен за помощь профессионалов
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Четверг, 2016-06-30, 7:34 PM | Сообщение # 484 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Иван, думаю, что можно любым методом провести органы лягушки.
Если никак не получается фиксировать перфузией фиксатора через сосуды, то как минимум макро разрез должен проходить через все слои капсул органов. Чем меньше с/тк мембран на пути фиксатора и других реактивов - тем проще диффузия.
Ну, конечно, и чем реактивы мягче - тем лучше. (ацетон, ксилол, хлороформ лучше избегать).
Что касается гонад - все вышесказанное + обязательно убедиться, что нет мембран на пути реактивов.
Важно правильно фиксировать материал. Фиксатор подбирают согласно целям и задачам исследования.
От себя могу добавить, что метод с минеральным маслом отлично подошел для актиний (достаточно капризные особы). Этим методом также проводили кости, печень и почки и крыс. Вот с лягушками не довелось поработать. Вы можете попробовать его, если такое желание есть.
|
| |
| |
| ivan11011994 | Дата: Четверг, 2016-06-30, 10:37 PM | Сообщение # 485 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 2
Статус: Offline
| Большое спасибо. Попробую все учесть
|
| |
| |
| Darkside_Master | Дата: Пятница, 2016-07-29, 5:11 PM | Сообщение # 486 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 6
Статус: Offline
| Цитата dzubenko-lisa (  ) Я вот ещё прошу откликнуться по поводу ротационных микротомов, чем отличается автомат от полуавтомата? Я поняла что в полуавтомате ручку(макровинт) крутишь при резке,а в автомате кнопку жмёшь и он сам режит... Есть у кого опыт работы на таком? У нас ситуация такова :строят перинатальный центр и на 1 из этаже хотят поместить нас, т.к. На все это выделяется федеральный бюджет то по проекту там в лаборатории должен быть полный комплект всего всего, пока Москва одобрила проект вместе с нашей лабораторией. Вот теперь мы должны написать какое оборудование нам необходимо, а именно фирмы. Хотелось бы советов от лабораторий,которые оборудованы по последнему слову техники или хотя бы по предпоследнему)))
В автомате есть еще такая полезная функция как окно резки, когда нож при резке блока замедляется и двигается с указанной скоростью для минимального компрессионного сжатия среза. После того как нож пройдет образец, активируется ретракция, нож быстро возвращается в исходное положение и снова начинается медленная резка. Автомат идеален для сложных тканей и образцов, залитых в гистологическую смолу и другие синтетические среды.
|
| |
| |
| nastja | Дата: Вторник, 2016-08-09, 8:30 AM | Сообщение # 487 |
|
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 64
Статус: Offline
| Maxim, добрый день!
Нам прислали коготь с мякишем и первой фалангой для дерматологов. Им нужно на одном срезе когтевое ложе и мякиш, сагиттальный срез. Чтобы уложиться в сроки, я сделала парасагиттальный срез. Вопрос в том, как сделать пригодным для проводки и нарезки коготь и сочетать это с декальцинацией. В процесс проводки вмешаться не могу, сейчас делают в большой лаборатории по обычным прописям (спирт, хлороформ, каша, парафин).
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2016-08-09, 10:15 PM | Сообщение # 488 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Настя,
Мне кажется, что для срезов когтей будут справедливо работать те же хитрости, которые применяют для ногтей. Ниже приведу несколько советов от людей, сталкивавшихся со срезами ногтей и мягких тканей. Эти советы были опубликованы в прошедшие пару десятков лет в histonet. Их все собрал воедино Rene Buesa.
Вот те из них, которые можно использовать для залитого в парафин блока.
-кубик льдаочень хорошо помогает после подрезания блока;
-смачивание блока до утра кубиком льда;
-смачивание блока теплой мыльной водой;
-использование 15% аммонийной воды;
-обработка подрезанной поверхности MOLLIFEX;
-обработка блока «раствором, размягчающим хитин»;
-смачивание блока размягчителем ткани (Downy fabric softener) около 5 минут;
-использование NAIR (крем-депиляторий) на подрезанном блоке;
-использование NAIR 5-10 минут, но никогда больше 15 минут;
-поместить сверху замороженного блока 0,2% мягчитель ткани (Downy fabric softener);
-смочить блок в мыльной воде (несколько капель моющего посудного средства (Dawn dish washer) в 10-20
мл воды);
-использование MOLLIFEX на подрезанной поверхности блока.
От себя могу добавить, что, если не найдутся оригинальные средства - мягчители или посудомойные жидкости, то есть смысл подбирать близкие по составу.
При резке срезов, если коготь будет плохо расправляться можно будет подогреть воду выше обычной температуры градусов на 10. Срезы лучше будут держаться на стеклах, предназначенных для ИГХ (super frost, plus, polylysin). Обязательно сушить срезы при 60оС не меньше 1 часа. Чем тоньше срезы, тем лучше. Для обзорной окраски отлично будут выглядеть срезы толщиной 3 мкм. Парафин для заливки должен быть тугоплавким, 58-60оС.
Декальцинирующие жидкости не размягчают кератин. Спирты и хлороформ очень сильно уплотняют ткани, если оставлять объекты в них на долгий срок. Это не лучшие жидкости для проводки таких объектов. Есть варианты обработок ногтей до проводки.
Ну, и как всегда, мы все здесь будем с интересом ждать картинок с результатами.
Успехов.
Максим.
|
| |
| |
| nastja | Дата: Четверг, 2016-08-11, 9:44 AM | Сообщение # 489 |
|
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 64
Статус: Offline
| Спасибо за подробный и быстрый ответ. Пока мы делали срезы сами, то действительно использовали крем для депиляции для блоков, это хорошо работало. Расскажите, пожалуйста, про обработку до проводки - основная сложность для меня сейчас, что невозможно сделать вырезку, т.к. коготь твердый, нож его не режет совсем. И плюс фаланга, которую нужно декальцинировать.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Пятница, 2016-08-12, 6:51 AM | Сообщение # 490 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Настя, вот как можно поступить с вырезанным, фиксированным и декальцинированным материалом (декальцинацию лучше делать бескислотными декальцинаторами, но без электролизера!).
А-кислотный гидролиз перед проводкой (варианты):
- 2% фенола до утра;
- 4% спиртового раствора фенола;
- концентрированная серная кислота 2-3 дня;
В-ЩЕЛОЧНОЙ
гидролиз перед проводкой (варианты):
-мацерирование
в 40% растворе натрия гидроксида 3 часа;
- 10% водный раствор натрия гидроксида 30 минут с постоянным перемешиванием (я бы попробовал этот вариант);
-5% раствор натрия гидроксида;
-15% аммонийная вода;
-кальций гидроксид;
-депиляторий NAIR на несколько дней или до тех пор, пока ноготь станет податливым;
- NAIR до 24 часов;
-размягчитель MOLLIFLEX, избегая разбухания тканей;
-разведенный раствор мягчителя тканей;
-смачивание
после макроскопической диссекции на несколько часов в растворе для обработки «хитина»;
-теплая мыльная вода.
Разумеется, перед размягчением и после требуются отмывки в проточной воде хотя бы минут по 10-20, чтобы удалить избытки размягчителей.
Микротомия должна быть медленной и аккуратной, на отличном микротоме и жесткими лезвиями. Блок обязательно морозить, желательно до утра в морозилке.
Ни один из этих вариантов сам не пробовал - не было случая. Поэтому хочется знать и самому, что из этого будет работать.
|
| |
| |
| dzubenko-lisa | Дата: Четверг, 2016-08-25, 8:34 AM | Сообщение # 491 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 12
Статус: Offline
| Здравствуйте, подскажите, пожалуйста, кто нибудь использовал для фиксации технический формалин?
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Четверг, 2016-08-25, 8:59 AM | Сообщение # 492 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Лиза, технический формалин - это формальдегид. Мы все так или иначе его используем в качестве составляющего 10% нейтрального забуференного формалина.
поверьте, не стоит наше здоровье, время, силы и знания того, чтобы мы добровольно гробили его во имя нескольких копеек, сэкономленных при закупке готового 10% нейтрального забуференного формалина, который уже не является канцерогеном, но, тем не менее, остается аллергенным продуктом. От этой аллергии мы никуда не денемся. Кроме этого еще нужно его доставлять в теплом виде (сумма расходов на доставку) и хранить в таком же (есть у вас подвал, где круглый год температура на уровне 25оС и нет солнца?), поскольку даже при слабом охлаждении он моментально полимеризуется, несмотря на все ингибиторы полимеризации, входящие в состав технического формалина, а на солнечном свете начинает разлагаться. Это я уже не упоминаю банальных вещей, когда лаборант стремится аккуратно налить концентрат из канистры, дабы не разболтать осадок - в этот момент надосадочная жидкость содержит минимум формальдегида. Ну и потом где вы возьмете приборы, позволяющие проверить концентрацию исходного продукта в конечном на уровне 4%? Это не случай определения аналитически малых количеств всякими сложными приборами. Ну, наконец, вы в состоянии составить ТЗ для закупки в аукционе необходимых буферных солей, чтобы обеспечить их сохранность и есть ли у вас уверенность, что кто-то вообще будет играть этот аукцион?
Одним словом, все эти сложности никак не оправдывают возни с техническим формалином и формальдегидом. Я не советую с ним свзяываться.
|
| |
| |
| dzubenko-lisa | Дата: Четверг, 2016-08-25, 9:48 AM | Сообщение # 493 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 12
Статус: Offline
| Спасибо большое за ответ. Хоть мы забуференный не используем,а используем который идёт для приготовления лекарственных препаратов, не хотели связываться, я так сейчас вообще в отпуске, но без нашего ведома договорной решил видимо поэкономить и пришла партия 300 кг такого формалина что с ним делать не знаю,не принять не можем.у нас ещё доставка только рекой возможна, т.к. Живём в Норильске.потом самолётом очень дорого,навигация через месяц закроется. Так ещё и срок хранения у этого формалина я так поняла три месяца. Он вообще для гистохимии подходит?иммуногистохимию мы не делаем, а все что связано с гистохимией то проводим.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Четверг, 2016-08-25, 10:47 AM | Сообщение # 494 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Да, положение трудное, но так или иначе есть смысл на будущее озадачиться закупкой готового формалина, пока навигация есть. Он хранится достаточно долго и даже в прохладном месте. В осадок выпадать не должен.
С концентратом поступите так: разбавляйте горячей водопроводной водой - никакой дистиллировки. Наливая концентрат обязательно хорошо взболтайте канистру, чтобы получилась мутная взвесь. Вот ее и разбавляйте горячей водопроводной водой. Затем канистру плотно закройте и до утра или на пару-тройку дней поставьте в термостат 60оС. Время от времени встряхивайте. Когда получится однородная прозрачная бесцветная жидкость - фиксатор готов. Обязательно все эти операции проделывать в отсутствие других людей, при хорошей вентиляции и в противогазе, фартуке и перчатках. И помните - за эти старания вам никто не заплатит.
Гистохимические и ИГХ-тесты будут делаться в других лабораториях. И в случае неудачных ИГХ-тестов обязательно всю вину свалят на фиксацию (это причина 95% проблем).
Воюйте с экономистами нещадно, ведь из-за проблем с приготовлением препаратов есть риск получения судебного иска. Экономисты и админы моментально свалят в сторону, а лаборант останется виноват как исполнитель. Не подставляйтесь из-за желания экономистов сэкономить. Я бы заручился поддержкой служебной записки главному с обязательной регистрацией входящего номера, в которой описал бы важность закупки 10% нейтрального забуференного формалина. И пусть вам в помощь будет следующий свежий документ:
https://istina.msu.ru/media/publications/book/e59/aa8/23097381/311.pdf
Ну и приказ 179Н.
|
| |
| |
| nastja | Дата: Вторник, 2016-08-30, 9:26 PM | Сообщение # 495 |
|
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 64
Статус: Offline
| Maxim, спасибо, Вы, как всегда, меня очень выручили.
На деле получилось следущее: щелочные растворы и фенол я не использовала, т.к. их не было, . Остановилась на креме для депиляции. NAIR, по слухам, бывает в Москве, но в реальности обегав МЕГУ, удалось найти только крем VEET. Хотя первый задорого можно заказать на Амазоне.
-Декальцинирование в р-ре ЭДТА 4-5 дней
-Промывка проточной водой
-Крем для депиляции 5-6 дней
-Промывка проточной водой 10 мин
Проводка, как я уже писала, ксилоловая. Лаборантам настоятельно рекомендовала получасовую экспозицию этим же кремом перед нарезкой. К сожалению, этим ограничивается моя возможность влиять на процесс.
На фото коготь, разрезанный саггитально, перед проводкой и стекла.
Микрофото постараюсь достать. Вообще, получилось не очень хорошо. Структуры частично хорощо видно, но сам коготь в виде слабо эозинофильной массы.
|
| |
| |
|
|
