Проводка и заливка

Чакона

Дата: Пятница, 2010-06-11, 9:27 PM | Сообщение # 76

Полковник

Группа: Патоморфологи

Сообщений: 109

Репутация: 5

Статус: Offline

Quote (Maxim)

включая макание стекол в раствор плавиковой кислоты...

На всякий случай напомню (если кому придет в голову этот способ использовать, всяко ведь бывает), что несколько месяцев работы с АШФТОР - и все, зубы будут крошиться всю оставшуюся жизнь, пока вы их полностью не потеряете...

Maxim

Дата: Пятница, 2010-06-11, 10:01 PM | Сообщение # 77

Профессионал

Группа: Модераторы

Сообщений: 555

Репутация: 25

Статус: Offline

Вот где потеряли мыклассный декальцинатор...

Vladpatholog

Дата: Воскресенье, 2010-06-13, 5:20 PM | Сообщение # 78

Генерал-лейтенант

Группа: Администраторы

Сообщений: 638

Репутация: 13

Статус: Offline

Maxim, перевести лабораторию на бесксилольный метод сложно - исключительно из субъективных причин. Тем не менее попробую сделать это в пределах иммуногистохимической лаборатории - изопропанол достать знаю где (по крайне мере на первое время для пробы), а вот с вазелином будут проблемы. Прочитал, что можно пользоваться обычными машинными маслами (ну не хочу долго ждать вазелин - нужно показать результат, а там уж и по результатам можно будет дальше вопросы задавать руководству). Дак вот вопрос - в эти самые машинные масла сейчас кучу присадок добавляют, оно для машины ничего - а для ИГХ и ГХ - я не угроблю материал? И еще вопрос - по поводу бесксилольной депарафинизации моющими средствами - само средство не проблема, вот смотрю какие-то проблемы с маркировкой и соответственно обработкой стекла. Эта обработка исключительно для того чтобы надпись не стиралась? Тогда почему не пользоваться маркером (его уж точно мылом не ототрешь).Для ИГХ - вообще не вопрос там стекла шлифованные идут.

Maxim

Дата: Воскресенье, 2010-06-13, 5:39 PM | Сообщение # 79

Профессионал

Группа: Модераторы

Сообщений: 555

Репутация: 25

Статус: Offline

Vladpatholog, что касается масел, я точно не уверен, что какая-нибудь из присадок автомасел не повредит ни ГХ, ни ИГХ. Но, похоже, что эти присадки работают для критических температур внутри двигателя машины, а у нас все-таки вгистологии спектр от комнатной до 60оС. Поэтому, мой друг-автолюбитель посоветовал использовать И-20А (веретенное масло), котрое практически не содержит присадок. ИГХ и ГХ с И-20А делали очень большой спектр - везде все было отлично. Мы пользовались год этим маслом, а потом перешли на вазелиновое. Так поступали и другие лаборатории, которые стали использовать этот метод. во всяком случае всегда удобно иметь запасной вариант, к которму всегда можно легко вернуться.

Что касается подписывания стекол, то мое беспокойство вызвано сохранением надписи на обычном стекле без шлифованного края и никак не отностися к ИГХ, где на период демаскировки подписывают все простым карандашом. Это потом для стайнера клеют стикеры или после ручной окраски дублируют все маркером. Сам маркер у меня хорошо держится только на сухих стеклах.

ludvik

Дата: Четверг, 2010-07-01, 4:45 PM | Сообщение # 80

Лейтенант

Группа: Проверенные

Сообщений: 34

Репутация: 0

Статус: Offline

Уважаемые коллеги! Еще раз, если можно, насчет запаха изопропанола -должен или нет пахнуть кошачьй мочой? Заранее с спасибо.

Vladpatholog

Дата: Четверг, 2010-07-01, 5:13 PM | Сообщение # 81

Генерал-лейтенант

Группа: Администраторы

Сообщений: 638

Репутация: 13

Статус: Offline

я понюхал - ну очень отдаленно напоминает (ОЧЕНЬ). Вообще гораждо менее вонючь, чем ксилол.

Maxim

Дата: Четверг, 2010-07-01, 6:04 PM | Сообщение # 82

Профессионал

Группа: Модераторы

Сообщений: 555

Репутация: 25

Статус: Offline

Есть два вида изопропнаола. Который имеет запах и который не имеет его. Для проводки используется и тот и другой. Причем от разных людей слышал абсолютно проптивоположные впечталения по пригодности к проводке.
Сам пользовался обоими. На мой взглдя оба годятся. Во всяком случае я разницы не ощутил на больших партиях.
Мы больше ориентируемся на чистоту (не меньше 99.7%) и на цену. Квалификация т (технический) с 99.7% содержанием вплоне годится для проводки.

Добавлено (2010-07-01, 6:04 PM)
---------------------------------------------
Важно, что изопропанол не так пожароопасен, как ацетон и этанол и он не уплотняет ткани, как этанол и не нуждается в строгом учете. Ксилол - канцероген, гепатотоксичен и нефротоксичен. Проникает в организм при вдыхании и через кожу и накапливается в жировой ткани до 6-7 дней и потом медленно метаболизируется.
У изопропанола ПДК в воздухе рабочей зоны на порядк меньше, чем у ксилола.
Однако, вводя изопропанол в проводку мы не заменяем им ксилол, а используем вместо этанола или ацетона (дегидратант).
Просветлитель (ксилол) меняется на минеральное масло (в одном случае) или пропускается вовсе.

Чакона

Дата: Пятница, 2010-07-02, 0:38 AM | Сообщение # 83

Полковник

Группа: Патоморфологи

Сообщений: 109

Репутация: 5

Статус: Offline

Уже сделал ряд проводок на изопропаноле ОСЧ с нежным сладковатым, абсолютно НЕ кошачьим запахом. Качество препаратов выше всяких похвал: демонстрирую их постоянно гостям лаборатории (учитывая, какая казуистика у меня попадается, их восторгам не бывает предела: вот, буквально вчера пустил в проводку спонтанную опухоль сердца, обнаруженную "на некропсии" у сибирской слепушонки smile

). Уже заказал большую партию изопропанола, с осени полностью переходим на него.

Maxim

Дата: Пятница, 2010-07-02, 0:45 AM | Сообщение # 84

Профессионал

Группа: Модераторы

Сообщений: 555

Репутация: 25

Статус: Offline

Quote (Чакона)

Уже заказал большую партию изопропанола, с осени полностью переходим на него

Пожалуйста, уточните относительно метода, на который полностью переходите: изопропанол-парафин или изопропанол-масло-парафин?

Чакона

Дата: Пятница, 2010-07-02, 1:17 PM | Сообщение # 85

Полковник

Группа: Патоморфологи

Сообщений: 109

Репутация: 5

Статус: Offline

Quote (Maxim)

На рутину - без масла (лейковский аппарат для проводки не позволяет использовать масло - у него нет соответствующих подогреваемых ванн), а на глаза - ручная проводка в термостате с вазелиновым маслом.

ludvik

Дата: Четверг, 2010-07-15, 9:52 AM | Сообщение # 86

Лейтенант

Группа: Проверенные

Сообщений: 34

Репутация: 0

Статус: Offline

Уважаемые коллеги! Перешли на изопропаноловую проводку с добавлением тритона по схеме "биовитрума"( ручная проводка). Ткань идет хорошо, есть трудности с гинекологией и эндоскопическим материалом - не может найти временные рамки этапов: убрали часть спиртов,.сократили время. В последнем парафине оставляем на ночь, отвечаем через день после приема. Но хотелось бы спросить - по какой схеме вы проводите мелочь? И второе- в окрашивающей батарее заменили изопропанолом все спирты( батарея по протоколу гематоксилиновой окраски Биоптики). Мне кажется, качество окраски лучше. Но тем не менее, через какое количество стекол меняются спирты, т.к. заметили, что если красится более 2х корзинок, визуализация ядер несколько хуже

Добавлено (2010-07-15, 9:52 Am)
---------------------------------------------
Добавляю( забыла спросить): кто из коллег из Москвы- где покупаете изопропанол без запаха7спасибо

Maxim

Дата: Четверг, 2010-07-15, 7:04 PM | Сообщение # 87

Профессионал

Группа: Модераторы

Сообщений: 555

Репутация: 25

Статус: Offline

Увжаемая ludvik!
Что касается проводки эндоскопического материала в изопропаноле, то 5 ИПА Х 15 минут при комнатной температуре будет достаточно для обезвоживания. Не поленитесь сделать промежуточную станцию ИПА:парафин 1:1 при 60оС 15 минут и 2 парафина по 20 минут.
Смену изопропанола можно делать двумя способами:
1. Если Вы материал ведете в пенициллиновых флаконах, то первый изопропанол выливается в раковину, а каждый последующий выливается в предшествующий флакон. Свежий изопропанол всегда в последнем флаконе (добавляется по мере расхода).
2. Если ведете в кассетах и в банках по 500 мл, то первую банку выливать через каждые 30-40 кассет (помните, что в этом случае основной объем переносимых рагентов приходится не на кусочки, а на кассеты - старайтесь не переносить избытка реактивва вместе с кассетами). Последняя банка - свежая.
ИПА:парафин и первый парафин можно менять после 70-90 кассет. Парафин передвигается аналогично изопропанолу и меняется вместе с промежуточной смесью.

По окраске и депарафинированию. Можно вообще не подвергать себя воздействию запахов. Смотрите ответ №18 в этой теме. Эта схема лишена запахов и в 800 раз дешевле обычной схемы с ксилолом.
Если не не можете расстаться с ксилолом:
4 смены по 3 минуты (первый вылить после 6 партий, остальные передвинуть "влево", последний свежий)
3 ИПА Х 1 минута (первый вылить после 4-5 партий, остальные передвинуть "влево", последний свежий)
дистиллированная вода.
Окраска по протоколу. Проверьте, синие ли ваши ядра после дифференцировки гематоксилина.
Дистиллированная вода.
3 ИПА Х 1 минута (первый вылить после 5-6 партий, остальные передвинуть "влево", последний свежий)
2 ксилола - несколько маканий (первый ксилол вылить 1 раз в неделю, передвинуть влево, во второй залить свежий).
Столько много ксилолов позволяет поддерживать уровень грязи и чистоты на оптимальном уровне, и как ни странно, так экономнее расходуется реактив при одинаково хороших результатх окраски во всех партиях.
Нечеткость ядер чаще результат плохого депарафинирования. Если нет, то причину следует искать в качестве фиксатора и времени фиксации: если Вы будете фиксировать ЛЮБУЮ эндоскопию суммарно менее 24 часов в 10%NBF, то нечеткие ядра Вам гарантированы. Нашим эндоскопитсам мы сами делаем формалин.

ludvik

Дата: Четверг, 2010-07-15, 8:16 PM | Сообщение # 88

Лейтенант

Группа: Проверенные

Сообщений: 34

Репутация: 0

Статус: Offline

maxim, спасибо. насчет эндоскопистов, наверное, Вы правы: из поликлиник гораздо лучше получаются препараты,т.к. лежат в формалине дольше, чем наши больничные. Окраску завтра попробую.

Maxim

Дата: Четверг, 2010-07-15, 9:41 PM | Сообщение # 89

Профессионал

Группа: Модераторы

Сообщений: 555

Репутация: 25

Статус: Offline

Да, на сегодня еще нет достоверных способов ускорить химический механизм фиксации форамлином. 24 часа - это оптимум для комнатной температуры. Обычный подогрев в термостате сокращает фиксацию до 18 часов без потери качества. Все остальное весьма сомнительно.

Чакона

Дата: Вторник, 2010-07-20, 2:05 AM | Сообщение # 90

Полковник

Группа: Патоморфологи

Сообщений: 109

Репутация: 5

Статус: Offline

Quote (Maxim)

Доросевич и Сапожников доступны даже в нижных магазинах. Представляют собой выжимку из Lillie, Pearse и Romeis (прямо фрагменты глав, я сравнивал тексты) и добавку глав по ИГХ и ISH.

Quote (Maxim)

Доросевич, Сапожников, 2002 (?)

2000 год. Сегодня мне подарили эту книженцию. Ну, да, если у кого нет даже Меркулова - для тех сойдет...

Добавлено (2010-07-19, 11:43 PM)
---------------------------------------------

Quote (Maxim)

Да, на сегодня еще нет достоверных способов ускорить химический механизм фиксации форамлином.

Да уж... Проще уж перейти на Карнуа, если важна срочность(для мелких кусочков хватает получасовой обработки), но там могут быть трудности, когда предполагается ИГХ...

Добавлено (2010-07-19, 11:44 PM)
---------------------------------------------

Quote (ludvik)

Добавляю( забыла спросить): кто из коллег из Москвы- где покупаете изопропанол без запаха7спасибо

В Химмеде.

Добавлено (2010-07-20, 2:05 Am)
---------------------------------------------
Перебирая руководства по микротехнике (а их у меня, к удивлению, аж полтора десятка) я наткнулся на совершенно изумительную весчь. Я уже пару раз ловил Ромейса (1953) на том, что в его книжке есть глупые методики и указания, но тут попалось совсем шикарное. Оказывается, кусочки "среднего размера" должны для обезвоживания абсолютным изопропанолом (после 90%) лежать в нем не менее трех (!!!) суток, причем его надо трехкратно менять (т.к. он обезвоживает слабее этанола) (стр. 88, параграф 387). Но еще забавнее - что изопропанол, оказывается... Не смешивается с парафином!!! (таблица на стр. 91, параграф 389). Это при том, что автор упоминает, что работал с этим спиртом и даже сравнивал качество проводки.