Вы вошли как Гость
Текущая дата: Пятница, 2024-04-26, 2:02 AM
|
Проводка и заливка
|
|
| Vladpatholog | Дата: Вторник, 2010-07-20, 8:39 PM | Сообщение # 121 |
 Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| Коллеги, странное отношение к окраске по Гимзе (я уж не знаю чья модификация, берем готовые растворы - итальянские какие-то), в гематологии одна из наиболее распространенных окрасок. А вот Браше - гораздо реже встречается. Не вижу проблем выявления плазмацитов на гимзе. Хотя все конечно правы по своему - все по ситуации. Гимза вообще не получался пока не купили нормальные красители. Трепанобиоптаты привык смотреть с гимзой и все тут, ну больше он дает мне чем Браше. Чаще выявить плазмоциты не представляется сложным и на ГЭ. Опять же кто к чему привык видимо.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2010-07-20, 10:47 PM | Сообщение # 122 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Странность отношения к окраске Гимза (да и клюбой другой) продиктована несколькмими причинами.
1. Эту окраску предпочитают патологи-гематологи, а их не так много. Соответственно и немногие лаборанты хорошо умеют управлять ею. Если не умеет делать лаборант - патологу ничего не остается как любить другие окраски, которые лучше получаются.
2. Отсутствие возможностей у лаборантов. В большинстве рутинных лабораторий практически нет возможности заниматься гистохимией. Сколько в среднем есть гистохимических окрасок в лаборатории? 4-5 и большинство из них в наборах, а не приготовляемые самостоятельно? Если готовить реактивы самим, слишком много времени это не занимает, но это нужно делать постоянно. Хороший результат получается только в постоянном упражнении.
3. Подготовка патолога также определяет спектр используемых методов. Научился он там, где это делается всегда, то очень велика вероятность того, что это будет делаться в его лаборатории.Но редко есть возможность отправить лаборанта поучиться тем методам, которые требуются. На курсах есть определенный набор тем и методов и никто не отступает от него ни шагу.
4. Нечасто имеется возможность купить хорошие фирменные реактивы. Счастье тем, кто пользуется красителями, сертифицированными Biological Stains Comission. Наши красители соответствуют ТУ каким-нибудь. И практически нигде на них не обозначено процентное содержание красителя в порошке.
5. Методы обычно передаются в лаборатории из поколения в поколение незыблемыми. Изменения наступают тогда, когда приходит кто-то (обычно старший), что-то улучшает и это опять закрепляется в веках до следующего удобного случая. Так в гистологии происходит потому, что эта наука близка к кухонному творчеству. Раньше были секреты и хитрости у лаборантов, а сейчас - это наборы с засекреченными составляющими. Смысл тот же, уровни другие. Узаконенных стандартов нет... И даже когда они появятся - все равно будут отклонения.
Вобщем, пора переносить обсуждение в тему "Красители для гистологии" - мы начинаем нарушать правила форума. _______________________
Vladpatholog: ПРОДОЛЖАЕМ ОБСУЖДЕНИЕ ЗДЕСЬ
Сообщение отредактировал Vladpatholog - Среда, 2010-07-21, 7:41 AM |
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Четверг, 2010-07-22, 9:05 AM | Сообщение # 123 |
|
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| У меня проблема с изопропанолом - почему-то вазелиновое масло осело в банках с изопропанолом. Т.е. взбалтываешь, а оно поднимается со дна баки каплями....это почему так?
|
| |
| |
| ludvik | Дата: Четверг, 2010-07-22, 9:07 AM | Сообщение # 124 |
|
Лейтенант
Группа: Проверенные
Сообщений: 34
Статус: Offline
| Уважаемые коллеги! действительно ли ксилол имеет строк годности( скажем, на одних емкостях срок годности 1 год, на других - 2 года)? Влияет ли на качество окрашивание использование просроченного на 1 год ксилола? Спасибо
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Четверг, 2010-07-22, 5:08 PM | Сообщение # 125 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Уважаемый Vladpatholog!
При комнатной температуре изопропанол не смешивается с минеральным маслом, получается взвесь. Однако, когда компоненты смеси нагреются до 50оС (это происходит не сразу) получается однородная прозрачная жидкость.
Это и есть основное препятствие для изпользования этого метода в лабораториях с карусельным процессором. Причем добавка всяких поверхностно-активных веществ не улучшает смешивание.
Диэлектрическая константа этанола равна 25, изопропанола - 18, а верхний предел для неполярных жидкостей - 20. Это значит, что при нагревании изопропанол будет смешиваться как с минеральным маслом, так и с парафином. С парафином это будет происходить только при 60оС. А так как масло уже жидкое при комнатной температуре, то для смешивания его и ИПА уже достаточно и 50оС. Такая температура не так губительна для антигенов и мофрологии ткани.
Мы меняем свои промежуточные смеси после того, как перекладываем ткани в следующую емкость. И, таким образом, имеем время для нагрева смесей до температуры 50оС.
А еще масло может браться каплями, если изопропанол содержит воду. Проверьте, нет ли в нем воды.
Банки с промежуточными смесями обязательно нужно закупоривать. Хорошо подходят евробанки с широким горлом и железными крышками - пластиковые деформируются со временем. Масло лучше держать открытым, чтобы остатки изопропанола лучше испарялись.
При использовании вакуумного процессора может возникунуть другая проблема: оптический датчик чистоты реагентов соврешенно чистые смеси ИПА и масла распознает из-за этой мути как грязные. Поэтому его лучше отключать, а чистоту контролировать по количеству проведенных кассет.Добавлено (2010-07-22, 5:08 PM)
---------------------------------------------
Quote (ludvik) действительно ли ксилол имеет строк годности
Уважаемая ludvik!
Срок годности для таких органических реагентов, как ксилол, толуол, бензол и других ароматических и алифатических углеводородов для гистологических целей не актуален, также как и для любых порошкообразных (твердых, не в растворах) неорганических солей. Главное, чтобы при хранении были плотно закрыты крышки. У нас есть кислол двухлетней давности и толуол 10-15 летней и все прекрасно работает. Проверьте качество обезвоживающих рагентов в окраске.
Ксилол при депарафинировании загрязняется парафином и тогда во всех препаратах равномерно слабая нечеткая окраска,а при ИГХ нет окраски. При кокончательном обезвоживании ксилол загрязняется спиртом и водой и просветеление не наступает - получаются мутные препараты.
Эти сроки годности до предела обидная вещь, когда начинают лезть с проверками всякие КРУ. Ну никак им не втолковать, что все это работает отлично. Приходится банально прятать так, чтобы они не узрели старых запасов. Они требуют все уничтожить. Мы научены таким опытом и заранее все прячем так, чтобы не было вопросов. Как например, можно уничтожить пять 50л бочек уайт-спирита, купленных 4 года назад, если мы понемногу его используем? И стертые даты на таре не спасают: все дублировано на сертификатах качества.
|
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Пятница, 2010-07-23, 11:55 AM | Сообщение # 126 |
|
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| Ну что могу сказать про изопропанол и особенно фэйри - " Maxim, Спасибо"
Никакой разницы с обычной ксилольной проводкой - вообще никакой. Депарафинизация - производит неизгладимое впечатление, когда лаборант за минуты при запахе лимонника и апельсина вполняет полную депарафинизацию и окрашивание.
Один вопрос (наверняка уже писали конечно) - при окраске ГЭ в батарее в конце у наших лаборантов идет просветление в ксилолах. Вопрос - чего с ними сделать и чем заменить?
На втором снимке собственно вся батарея для окарски - там видно в конце карбол+ксилол и ксилолы для просветления - речь про эти баночки.
|
| |
| |
| Чакона | Дата: Пятница, 2010-07-23, 12:31 PM | Сообщение # 127 |
|
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 109
Статус: Offline
| Quote (Vladpatholog) Один вопрос (наверняка уже писали конечно) - при окраске ГЭ в батарее в конце у наших лаборантов идет просветление в ксилолах. Вопрос - чего с ними сделать и чем заменить? Максим предлагал просто сушить в термостате...
|
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Пятница, 2010-07-23, 12:34 PM | Сообщение # 128 |
|
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| дак этоже вроде для просветления - причем тут сушить?
|
| |
| |
| Чакона | Дата: Пятница, 2010-07-23, 12:37 PM | Сообщение # 129 |
|
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 109
Статус: Offline
| Quote (Maxim) Вы будете смеяться, но это работает. И даже есть лаборатории, которые делают это в рутине.
Подсушить стекла со срезами при комнатной температуре 20-30 минут и затем в термостате 60оС 1 час в вертикальном положении.
1. 1.7-2% водный раствор обычного жидкого средства для мытья посуды (мы делаем с Fairy) 1 мин при 80-85оС
2. Свежая порция предыдущего раствора 1 мин при 80-85оС
3. Дистиллированая вода, 1 мин при 80-85оС
4. Дистиллированная вода, 1 мин при 50оС.
5. Дистиллированная вода комнатная темпеартура.
6. Окраска как необходимо.
7. Промывка в дистиллированной воде несколько секунд.
8. ПОставить стекла в стойку и в термостат на 10 мин при 60оС до полного высыхания.
9. Заключить в полистирол.
Работает для Г-Э, ИГХ. Для некоторых гистохимических окрасок необходимо согласно методикам применения ацетона или этанола как части процесса, поэтому требуются традиционные спирты или ацетоны и ксилол.
Недостаток: если стекла не имеют матового края и подписаны тушью - она растворяется в воде. Вот полная схема - без всякого просветления.
|
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Пятница, 2010-07-23, 12:42 PM | Сообщение # 130 |
|
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| А вы пробовали так?
|
| |
| |
| Чакона | Дата: Пятница, 2010-07-23, 12:50 PM | Сообщение # 131 |
|
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 109
Статус: Offline
| Кстати говоря, схема не очень удобна для аутостейнера - ванны для депарафинирования и для воды там не подогреваются, а каждый раз греть растворы - слишком морочно. Добавлено (2010-07-23, 12:44 PM)
---------------------------------------------
Quote (Vladpatholog) А вы пробовали так? Я ж говорил - хотел попробовать, как выйду из отпуска. Нам эта схема не очень - у нас аутостейнер.... Добавлено (2010-07-23, 12:50 PM)
---------------------------------------------
Смущает, конечно, что срез не просветляют и вообще, что его лишают жидких сред. Есть какое-то чувство, основанное на опыте заключения высушенных (без термостата) срезов, что там некоторые структуры могут съежиться....
|
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Пятница, 2010-07-23, 12:51 PM | Сообщение # 132 |
|
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| Лаборанты сопротивляются - говорят что же тогда после эозина? Говорят необходимо просветление так как когда ведется сразу много стекол - перекраса не избежать. Или я чего не понимаю.
|
| |
| |
| Чакона | Дата: Пятница, 2010-07-23, 12:55 PM | Сообщение # 133 |
|
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 109
Статус: Offline
| Quote (Vladpatholog) Говорят необходимо просветление так как когда ведется сразу много стекол - перекраса не избежать. Вроде бы просветление на степень окраски не влияет - влияет обезвоживание срезов в спирте перед просветлением. Можно ведь просто сократить время окраски эозином. Добавлено (2010-07-23, 12:55 PM)
---------------------------------------------
Написал "вроде бы" - и могу этим Вас смутить. Отвечаю правильнее - нет, просветление НЕ ВЛИЯЕТ на перекрашивание.
|
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Пятница, 2010-07-23, 1:46 PM | Сообщение # 134 |
|
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| А на что влияет? (в смысле - чего его просветлением назвали)? 
|
| |
| |
| Чакона | Дата: Пятница, 2010-07-23, 2:45 PM | Сообщение # 135 |
|
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 109
Статус: Offline
| Quote (Vladpatholog) А на что влияет? (в смысле - чего его просветлением назвали)? Срез становиться прозрачным, неокрашенные структуры как бы стекловидными, а не мутноватыми.
|
| |
| |
|
|
