Вы вошли как Гость
Текущая дата: Пятница, 2024-04-19, 4:26 PM
|
Трепанобиопсии костного мозга.
|
|
| Vladpatholog | Дата: Суббота, 2010-07-10, 2:37 PM | Сообщение # 1 |
 Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| Коллеги, постоянно сталкиваюсь с проблемой артефактов при исследовании трепанобиоптатов костного мозга. Материала идет много, а учитывая понятные особенности исследования трепана не хочется еще и с артефактами воевать. Вот в чем проблема - в некоторых случая (не всегда) возникает феномен смещения костного мозга относительно трабекул кости - иногда значительное иногда нет, порой симулирует расширение паратрабекулярных синусов. Лаборанты ничего внятного сказать не могут.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Суббота, 2010-07-10, 9:25 PM | Сообщение # 2 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| В случаях трепанов есть две возможности возникновения артефактов.
1. Недосточная фиксация. Если нет адекватных перекрестных связей, то ткань не может хорошо устоять перед такими мощными агентами, как дегидратанты и просветлители. А если есть еще давление и вакуум, то вероятность артефактов увеличивается.
Смыл всей проводки состоит в том, чтобы перевести ткань из полярных растворов (формалин и вода) через умеренно полярные (спирты) в неполярные (просветлители и парафин). Причем по физико-химическим параметрам эти переходы очень жетские и все усиливается воздействием температуры на конечных этапах. В неполярных реагентах (ксилол, парафин) прекращается большинство химических реакций. Именно поэтому блоки хранятся долго и без изменений в парафине и в средах для заключения.
В этой связи вспомните, как много структур связывают содержимое костного мозга с костными балками (тонкие соединительнотканные тяжи?).
2. Декальцинация. Когда она избыточна, начинается необратимый гидролиз белков.
Если правильно выполнять два этих этапа, никаких артефактов не случится.
|
| |
| |
| Маримьяна | Дата: Среда, 2013-10-09, 10:31 AM | Сообщение # 3 |
 Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 2
Статус: Offline
| Здравствуйте! Объясните пожалуйста технику приготовления трепанобиопсий костного мозга в ЭДТА. Технику получили через пятое колено и теперь спорим с докторами сколько надо фиксировать и надо ли после проведения декальцинации. Фиксируем сутки до ЭДТА и не всегда получается провести по системе сразу. Праздники и выходные выбивают из колеи
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Среда, 2013-10-09, 8:56 PM | Сообщение # 4 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Маримьяна!
Техника работы с трепанобиоптатами кости не отличается практически ничем от метода для других видов костной ткани или кальцифицированых образцов.
Кости имеют лишь одну специфику - наличие твердого каркаса, который становится мягким после удаления кальция.
Перед проводкой (можно до фиксации) из кости должен быть выпилен ломтик ткани толщиной не более 3 мм. Он пойдет в проводку. Трепанобиоптаты в вырезке не нуждаются, обычно их диаметр 3 мм, длина от 0.5 до 5 см. После взятия его фиксируют как и любую другую ткань, не менее 24, но не более 72 часов. Далее промывка в водопроводной воде 20-30 минут для удаления избытка фосфатов.
Потом декальцинация в ЭДТА (вернее, в декальцинирующем растворе на основе ЭДТА, желательно с рН 7.0-7.4). Приготовление хорошего декльциантора на основе ЭДТА достаточно муторное и утомительное занятие, дешевле приобрести готовые продукты. На рынке гистологических реактивов их достаточно и они не особо дороги.
Важно контролировать конечную точку декальцинации.
После декальцинации обязательно следует промывка в проточной воде, не менее 30 минут, затем проводка.
Все детали процесса декальцинации и тестирования конечных точек подробно обсуждаются здесь: Архив патологии, №6, 2012, с.44-46.
|
| |
| |
| Маримьяна | Дата: Четверг, 2013-10-10, 3:48 AM | Сообщение # 5 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 2
Статус: Offline
| Maxim.Спасибо за совет. Результаты обязательно скажу
|
| |
| |
| nataliyavasiliyeva | Дата: Понедельник, 2015-12-14, 11:13 PM | Сообщение # 6 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Здравствуйте! Скажите, приходилось ли кому-либо работать с Decalcifying Solution-Lite (водный раствор ) производства Сигма-Олдрич ? Примерно сколько требуется времени для декальцинации ?
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2015-12-15, 9:23 AM | Сообщение # 7 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Если у вас этот раствор есть в наличии, то в приложенном вкладыше имеется очень подробная и доходчиво написанная инструкция. Если собираетесь купить - загляните на сайт Сигмы-Алдрич, эта инструкция в свободном доступе на английском. И там указаны сроки декальцинации и оксалатный тест для контроля конечной точки. В этом случае он будет хорошо работать.
Если посмотрите в MSDS, то увидите, что это водный раствор соляной кислоты. Никоим образом не рекомендую использовать для трепанобиоптатов костного мозга - напрочь убивает ИГХ и молекулярку и тогда путь к диагнозу и лечению пациента невозможен.
Если хотите использовать для обычных костей, которые не пойдут в ИГХ - можно. Но я бы никогда не потратил почти 4.2 т.р. за литр декальцинатора для таких целей, ведь еще и доставка будет что-то стоить. Можно найти декальцинаторы и подешевле.
|
| |
| |
| nataliyavasiliyeva | Дата: Вторник, 2015-12-15, 4:47 PM | Сообщение # 8 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Наличие соляной кислоты меня тоже очень смущает. Но на сайте Сигма написано, что он вроде бы подходит для ИГХ. Реактив уже получен нами, хотя мы заказывали другой, Миелодек. Будем разбираться .Большое спасибо за ответ)
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2015-12-15, 4:50 PM | Сообщение # 9 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| В миелодеке тоже есть солянка. Для ИГХ нужен декальцинатор на основе ЭДТА с рН 7.0 Другие не годятся.
|
| |
| |
| nataliyavasiliyeva | Дата: Вторник, 2015-12-15, 8:20 PM | Сообщение # 10 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Ясно. Спасибо
|
| |
| |
| templepath | Дата: Понедельник, 2016-12-12, 11:37 PM | Сообщение # 11 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 5
Статус: Offline
| Оптимальным реагентом для декальцинации трепан биопсий является Decal Stat.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2016-12-13, 9:31 AM | Сообщение # 12 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Этот декальцинатор предусматривает декальцинацию трепанов в течение 1-2 часов. В состав входит соляная кислота и ЭДТА. В этом случае рН раствора находится в районе 7, но извлечение кальция происходит двояким способом: и хелатированием и связыванием с образованием CaCl2, поэтому не исключается гидролиз окружающей ткани. Таким образом, при любой случайной пролонгации есть риск потери в ИГХ т-клеточных маркеров. Я бы не стал рисковать с таким продуктом.
Да, и самое интересное: какова его цена на российском рынке? И вообще ввозят ли его в Россию, ведь он производится фирмой American Master Tech и кто является их официальным дистрибьютором? На него есть РУ РЗН РФ?
Это дополнительные препятствия к его использованию.
|
| |
| |
| nataliyavasiliyeva | Дата: Суббота, 2019-01-26, 6:37 PM | Сообщение # 13 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Здравствуйте ! Хотелось бы спросить - а приходилось ли Вам делать Циклин Д1 на биоптатах костного мозга? У нас не получается ни с Дако ни с Термосайнтифик Меняем условия удлиняем время теплового восстановления - и ничего . Нет ли там какой-то хитрости ?
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Суббота, 2019-01-26, 8:06 PM | Сообщение # 14 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| В таких случаях трудность преодолеть можно двумя способами:
1. Проверить, все ли верно выполняется от момента погружения в правильный фиксатор и на всех остальных преаналитических этапах.
2. Строго следовать всем рекомендациям в инструкции к антителу и системе детекции.
Думаю, в случае правильного выполнения всех рекомендаций все должно получиться хорошо. Если не получается - где-то рекомендации не соблюдены. Поищите где.
|
| |
| |
|
|
