Трепанобиопсии костного мозга. - Форум
 
Трепанобиопсии костного мозга. - Форум
[ Новые сообщения · Участники · Правила форума · Поиск · RSS ]
Вы вошли как Гость
Текущая дата: Пятница, 2016-12-09, 4:27 PM

Страница 1 из 11
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Трепанобиопсии костного мозга. (вопросы гистотехники)
Трепанобиопсии костного мозга.
VladpathologДата: Суббота, 2010-07-10, 2:37 PM | Сообщение # 1
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Репутация: 13
Статус: Offline
Коллеги, постоянно сталкиваюсь с проблемой артефактов при исследовании трепанобиоптатов костного мозга. Материала идет много, а учитывая понятные особенности исследования трепана не хочется еще и с артефактами воевать. Вот в чем проблема - в некоторых случая (не всегда) возникает феномен смещения костного мозга относительно трабекул кости - иногда значительное иногда нет, порой симулирует расширение паратрабекулярных синусов. Лаборанты ничего внятного сказать не могут.
 
MaximДата: Суббота, 2010-07-10, 9:25 PM | Сообщение # 2
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
В случаях трепанов есть две возможности возникновения артефактов.
1. Недосточная фиксация. Если нет адекватных перекрестных связей, то ткань не может хорошо устоять перед такими мощными агентами, как дегидратанты и просветлители. А если есть еще давление и вакуум, то вероятность артефактов увеличивается.
Смыл всей проводки состоит в том, чтобы перевести ткань из полярных растворов (формалин и вода) через умеренно полярные (спирты) в неполярные (просветлители и парафин). Причем по физико-химическим параметрам эти переходы очень жетские и все усиливается воздействием температуры на конечных этапах. В неполярных реагентах (ксилол, парафин) прекращается большинство химических реакций. Именно поэтому блоки хранятся долго и без изменений в парафине и в средах для заключения.
В этой связи вспомните, как много структур связывают содержимое костного мозга с костными балками (тонкие соединительнотканные тяжи?).
2. Декальцинация. Когда она избыточна, начинается необратимый гидролиз белков.
Если правильно выполнять два этих этапа, никаких артефактов не случится.
 
МаримьянаДата: Среда, 2013-10-09, 10:31 AM | Сообщение # 3
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 2
Репутация: 0
Статус: Offline
Здравствуйте! Объясните пожалуйста технику приготовления трепанобиопсий костного мозга в ЭДТА. Технику получили через пятое колено и теперь спорим с докторами сколько надо фиксировать и надо ли после проведения декальцинации. Фиксируем сутки до ЭДТА и не всегда получается провести по системе сразу. Праздники и выходные выбивают из колеи
 
MaximДата: Среда, 2013-10-09, 8:56 PM | Сообщение # 4
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Маримьяна!
Техника работы с трепанобиоптатами кости не отличается практически ничем от метода для других видов костной ткани или кальцифицированых образцов.
Кости имеют лишь одну специфику - наличие твердого каркаса, который становится мягким после удаления кальция.
Перед проводкой (можно до фиксации) из кости должен быть выпилен ломтик ткани толщиной не более 3 мм. Он пойдет в проводку. Трепанобиоптаты в вырезке не нуждаются, обычно их диаметр 3 мм, длина от 0.5 до 5 см. После взятия его фиксируют как и любую другую ткань, не менее 24, но не более 72 часов. Далее промывка в водопроводной воде 20-30 минут для удаления избытка фосфатов.
Потом декальцинация в ЭДТА (вернее, в декальцинирующем растворе на основе ЭДТА, желательно с рН 7.0-7.4). Приготовление хорошего декльциантора на основе ЭДТА достаточно муторное и утомительное занятие, дешевле приобрести готовые продукты. На рынке гистологических реактивов их достаточно и они не особо дороги.
Важно контролировать конечную точку декальцинации.
После декальцинации обязательно следует промывка в проточной воде, не менее 30 минут, затем проводка.
Все детали процесса декальцинации и тестирования конечных точек подробно обсуждаются здесь: Архив патологии, №6, 2012, с.44-46.
 
МаримьянаДата: Четверг, 2013-10-10, 3:48 AM | Сообщение # 5
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 2
Репутация: 0
Статус: Offline
Maxim.Спасибо за совет. Результаты обязательно скажу
 
nataliyavasiliyevaДата: Понедельник, 2015-12-14, 11:13 PM | Сообщение # 6
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 3
Репутация: 0
Статус: Offline
Здравствуйте! Скажите, приходилось ли кому-либо работать с Decalcifying  Solution-Lite (водный раствор ) производства Сигма-Олдрич ?   Примерно сколько требуется времени для декальцинации ?
 
MaximДата: Вторник, 2015-12-15, 9:23 AM | Сообщение # 7
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Если у вас этот раствор есть в наличии, то в приложенном вкладыше имеется очень подробная и доходчиво написанная инструкция. Если собираетесь купить - загляните на сайт Сигмы-Алдрич, эта инструкция в свободном доступе на английском. И там указаны сроки декальцинации и оксалатный тест для контроля конечной точки. В этом случае он будет хорошо работать.
Если посмотрите в MSDS, то увидите, что это водный раствор соляной кислоты. Никоим образом не рекомендую использовать для трепанобиоптатов костного мозга - напрочь убивает ИГХ и молекулярку и тогда путь к диагнозу и лечению пациента невозможен.
Если хотите использовать для обычных костей, которые не пойдут в ИГХ - можно. Но я бы никогда не потратил почти 4.2 т.р. за литр декальцинатора для таких целей, ведь еще и доставка будет что-то стоить. Можно найти декальцинаторы и подешевле.
 
nataliyavasiliyevaДата: Вторник, 2015-12-15, 4:47 PM | Сообщение # 8
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 3
Репутация: 0
Статус: Offline
Наличие соляной кислоты меня тоже очень смущает. Но на сайте Сигма написано, что он вроде бы подходит для ИГХ. Реактив уже получен нами, хотя мы заказывали другой, Миелодек. Будем разбираться .Большое спасибо за ответ)
 
MaximДата: Вторник, 2015-12-15, 4:50 PM | Сообщение # 9
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
В миелодеке тоже есть солянка. Для ИГХ нужен декальцинатор на основе ЭДТА с рН 7.0 Другие не годятся.
 
nataliyavasiliyevaДата: Вторник, 2015-12-15, 8:20 PM | Сообщение # 10
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 3
Репутация: 0
Статус: Offline
Ясно. Спасибо
 
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Трепанобиопсии костного мозга. (вопросы гистотехники)
Страница 1 из 11
Поиск: