Красители для гистологии - Страница 4 - Форум
 
Красители для гистологии - Страница 4 - Форум
[ Новые сообщения · Участники · Правила форума · Поиск · RSS ]
Вы вошли как Гость
Текущая дата: Пятница, 2016-12-09, 4:30 PM

Страница 4 из 5«12345»
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Красители для гистологии (вопросы гистохимических окрасок)
Красители для гистологии
MaximДата: Суббота, 2014-08-02, 7:57 AM | Сообщение # 46
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Тогда остается думать о дефекте исполнения метода или о качестве реактивов. Больше вероятности, если реактивы готовили сами и/или они не очень свежие.

Проверьте, хорошо ли был выполнен каждый этап метода, особенно отмывки дифференцирующих кислых растворов. Остатки кислоты обычно продолжают реагировать с красителем и после заключения препарата, хотя ксилол как нейтральная среда призван останавливать все интересующие нас реакции окраски.

Сделайте еще один срез из этого блока и какого-нибудь другого, который Вы сичтаете безупречным. Взгляните на результаты сразу и через пару недель.

В отношении выцвтания, разумеется, препараты не должны храниться на прямом солнечном свету - это общее правило для любых препаратов.
 
Ирина5019Дата: Суббота, 2014-08-02, 4:00 PM | Сообщение # 47
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 3
Репутация: 0
Статус: Offline
Спасибо, Максим!     flower   Ваши слова я передам лаборантам. Единственно абсолютно точно, что на прямом солнечном свету не хранили. 

Краску - да - делали сами.   

Прощаюсь, потому что я сама не гистолог и вряд ли в скором времени зайду на форум. Желаю Вам больших успехов в работе!

Всего самого наилучшего!  Большое спасибо за помощь!

heart
 
nastjaДата: Четверг, 2014-09-04, 4:31 PM | Сообщение # 48
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 64
Репутация: 6
Статус: Offline
Максим, прошу прощения за глупый вопрос: периодная кислота в ШИК-реакции нужна, чтобы окислить -ОН в положении 1 и 2 до -СОН?

Добавлено (2014-09-04, 4:31 PM)
---------------------------------------------
Вопрос снят, нашла информацию.

 
MaximДата: Пятница, 2014-09-05, 9:48 PM | Сообщение # 49
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Nastja, очень подробно на русском языке этот вопрос изложен у Пирса и у Лилли.
Вопрос об окислителях для метода ШИК очень даже не простой. Все завсисит от объекта и задачи.
 
BacchusДата: Понедельник, 2015-04-13, 9:17 AM | Сообщение # 50
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 5
Репутация: 0
Статус: Offline
Всем доброго дня! Прошу помочь с окраской метенамином серебра. Сложность в том, что имеется метенамин серебра производства Sigma Aldrich (небольшие флакончики с порошком), НО 
1) нет протокола окраски с использованием этого порошка (в сети нахожу только протоколы с двумя растворами которые еще нужно смешать)
2) даже если взять за основу протокол "из учебника" не совсем уверен чем нужно этот порошок разводить - вода или боракс или еще чем?

Помогите кто чем может, хоть советом!
А за протокол Сигмовский вообще поклон земной biggrin !
 
MaximДата: Понедельник, 2015-04-13, 8:36 PM | Сообщение # 51
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Bacchus, вот оригинальный сигмовский протокол: https://www.sigmaaldrich.com/content....100.pdf
Обычно же, раствор метенамина серебра делается на боратном буфере. Ну в сигмовском протоколе два других раствора - это бура и вода.
Я дома вечером покопаюсь в своем компьютере и найду прописи боратного буфера - сейчас нет под рукой.

Добавлено (2015-04-13, 8:36 PM)
---------------------------------------------
Bacchus, еще вопрос об окислителе. Какие структуры Вы пытаетесь покрасить этим методом? Окислитель подбирается в завсимости от цели. Это важно.
Один из безумно дешевых источников метенамина - ампулы уротропина (неприлично дешево стоит в апетках). Ниже вариант с использованием таких ампул.
При наличии метенамина в ампуле проще приготовить следующие два раствора:
1)МЕТЕНАМИН СЕРЕБРА, ОСНОВНОЙ РАСТВОР:
Гексаметилентетрамин,40% (ампула)   10 мл
Дистиллированная вода                    126,3мл
Нитрат серебра, 10%                        3,3мл.
Смешать, перелить в очищенную азотной кислотой и хорошо промытую дист водой коричневую бутылку. Хранить в холодильнике. Раствор стабилен 3 месяца.
2)РАБОЧИЙ РАСТВОР МЕТЕНАМИНА СЕРЕБРА:
Основной раствор метенамина серебра   25 мл
Дистиллированная вода                      25 мл
5% бура                                          2мл.
Делать свежим, после использования вылить.Фиксаж и тонировка как во всех методах с серебром. Докраска в зависимости от поставленной задачи.
 
BacchusДата: Среда, 2015-04-15, 5:25 AM | Сообщение # 52
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 5
Репутация: 0
Статус: Offline
Maxim, огромное спасибо за помощь! Красить будем базальные мембраны, в основном нефробиоптаты.
 
MaximДата: Среда, 2015-04-15, 6:47 AM | Сообщение # 53
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Для базальных мембран подходящий окислитель - перйодная кислота, 1% водный раствор. Для грибов 5% водная хромовая кислота.
 
nastjaДата: Четверг, 2015-06-04, 8:34 PM | Сообщение # 54
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 64
Репутация: 6
Статус: Offline
Maxim, снова прошу Вашего совета. 
На вскрытии доктор заподозрил амилоидоз, покрасили конго красным. Результаты  странные - оранжевое окрашивание эпителия канальцев, в клубочках такого нет. Есть подозрение, что что-то не так с краской или прописью.
Прикрепления: 4149746.jpg(201Kb) · 4337237.jpg(145Kb) · 2387204.jpg(246Kb)
 
nastjaДата: Четверг, 2015-06-04, 8:37 PM | Сообщение # 55
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 64
Репутация: 6
Статус: Offline
И вопрос по ШИК. Искали криптококки, их не оказалось, зато  в селезенке и лимфоузле нашлись ШИК-положительные включения в клетках.
Прикрепления: 2289851.jpg(220Kb) · 6736652.jpg(239Kb) · 8207768.jpg(218Kb)
 
MaximДата: Четверг, 2015-06-04, 9:41 PM | Сообщение # 56
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Nastja!
По амилоидозу попробуй такую логику исследования.
1. Макро - восковидная ткань (как правило в запущенных случаях), чаще почки, селезека, легкие, миокрард.
2. На ГЭ амилоид гомогенный розовый, как правило вокруг сосудов или в виде аморфных масс.
3. Конго красный в модификации Хаймана самый простой и специфичный, но есть случаи, когда окраска отрицательная. Толщина среза должна быть 8-10 мкм!
Дифференцировку проводить под контролем микроскопа.
4. При поляризации отложения амилоида, выкрасившиеся конго красным могут давать зеленое свечение, но тоже не во всех случаях.
5. При отсуствии навыков, неуверенности в реактивах да и вообще во всех случаях в партию опытных стекол обязательно добавляйте проверенный вашими руками и красками положительный контроль - снимется масса технических и методических вопросов.
В Вашем случае мне кажется проведена слабо дифференцировка когно красного (обычно выполняется шелочным спиртом) и ядра окрашены очень бледно - их нужно подсинивать.
Эритроциты и кератин всегда корашиваются в оранжевый цвет.
Прикрепил пару своих фоток с амилоидозом.

По ШИК трудно высказаться что окрасилось. ШИК-реация штука неспецифичная, много чего им красится.
Я обычно при поиске инфекционных агентв всегда начинаю с триады: ШИК, Грам, Циль-Нильсен. И если неясно,
добавляю другие: Романовский, альциановый синий с рН 2.5, Гомори-Грокотт, Вартин-Старри или меняю окислители в ШИК (хромовую кислоту).
При такой обойме можно определить множество возбудителей. А если это пигменты - тогда играем в Перлса и другие необходимые окраски.
Прикрепления: 1503761.jpg(204Kb) · 2864458.jpg(291Kb)
 
nastjaДата: Пятница, 2015-06-05, 11:55 AM | Сообщение # 57
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 64
Репутация: 6
Статус: Offline
Maxim, спасибо за быстрый ответ. По макро нашли некроз сосочка, у кошек иногда бывает при амилоидозе. Других признаков отложения амилоида не было. Про толщину в 8-10 мкм не знала, запомню. 
Фото замечательные, особенно клубочки.
 
BacchusДата: Вторник, 2015-08-11, 7:32 AM | Сообщение # 58
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 5
Репутация: 0
Статус: Offline
Друзья, коллеги, товарищи! Совсем запутался, нужна подсказка!

Метиловый синий, метиленовый синий, анилиновый голубой.

Насколько они взаимозаменяемы? 
Хотим красить пикро-Маллори. В прописи значится анилиновый голубой. Купить (пока) возможности нет, но есть метиловый синий. В разных источниках (в т.ч. на сайтах производителей-продавцов реагентов) все чаще встречаю инфо, что анилиновый=метиловый. Но сомневаюсь....
 
MaximДата: Вторник, 2015-08-11, 8:51 AM | Сообщение # 59
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Уважаемый Bacchus, здесь все просто. Метиленовый синий - для хеликобактеров и Циль-Нильсена.
Метиловый синий и анилиновый голубой - для коллагена, к этому ряду еще можно добавить водный голубой и еще несколько синонимов этих же красителей.
Если синий цвет не принципиален, можно заменить их световым зеленым или светлым зеленым или прочным зеленым, тогда коллаген будет зеленым.
Мне просто интересно, если есть проблема с метиловым синим, то где вы будете добывать бибрихский алый и лизаминовый желтый?
Или будете использовать суррогатную версию с кислым фуксином, пикринкой и оранжем?

Если цель - дифференцировка коллагена и мышц, я бы вообще ни о чем не думал, покрасил бы Ван Гизон и угомонился. Ведь никакой принципиальной разницы, кроме цветовых оттенков в окраске коллагена между Ван Гизоном и трехцветными методами нет.
Если же цели другие, тогда успехов в поиске красителей.
 
вивьенДата: Вторник, 2016-02-09, 4:09 PM | Сообщение # 60
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 40
Репутация: 2
Статус: Offline
Доброго дня, уважаемый коллеги!

Подскажите, если кто работал з набором Artisan Elastic Stain Kit, протокол окраски. На сайте Dako подробной инструкции не могу найти.

Заранее благодарна
 
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Красители для гистологии (вопросы гистохимических окрасок)
Страница 4 из 5«12345»
Поиск: