Вы вошли как Гость
Текущая дата: Четверг, 2024-04-25, 1:31 AM
|
Автоматизация проводки
|
|
| Айгулька | Дата: Воскресенье, 2012-01-08, 10:42 PM | Сообщение # 16 |
 Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Доброго времени суток! Я новичок в гистологии. Скажу следующее.
В нашу лабораторию (сравнительно небольшую, до 2500 случаев в год различного материала) купили необходимые аппараты для ускорения процесса изготовления материала. в том числе и вакуумный процессор. сказать честно, считаю его очень прожорливым, расход реактивов в разы больше ручной проводки, и это при том что мы окончательно на него еще не перешли. Главная причина - это я, конечно. Не могу подобрать время адекватное. и хочу обратиться к тем, кто также вакуумники использует, поделитесь пожалуйста!
Мелкий материал - соскобы, кисты, трубы, более крупный - матки, узлы опухоли, плацента, аутопсия (детская). Я для маток и узлов как будто подобрала проводку, но она меня не до конца устраивает все же. хочется идеальных срезов! и еще такой вопрос возник, под вакуумом эпителий не разрушается?
Используем спирт этиловый - ксилол - парафин. в ручной проводке ставили промежутки спирт-ксилол и ксилол-парафин. в аппарате такое, думаю, не пройдет. поэтому проводку ручную никак не могу подогнать. Переход на изопрапанол возможен, и, думаю, даже необходим, но пока ближайшие месяцы не представляется возможным. буду благодарна за любые советы и ответы!
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Понедельник, 2012-01-09, 10:01 AM | Сообщение # 17 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Уважаемая Айгулька!
Ваши рассуждения мне напомнили беспокойства большинства домохозяек, размышлявших о покупке стиралки-автомата, дескать расходует много воды и электроэнергии. Ну неужели все вокруг (и в первую очередь за гранцией) не просчитали и осознали полезность этой штуки?
Вакуумник - экономный, это бесспорно. Расход реагент/кассета при ручном методе в литровых банках 22.5 мл/кассета, в карусели Leica 18 мл/кассета, а в вакуумнике Shandon 15,6 мл/кассета, в Sakura 12.3 мл/кассета. Экономия достигается в карусели за счет ускорения диффузии перемешиванием и покачиванием. В вакуумниках за счет подогрева, вакуума/давления на каждой станции и встряхивания. Другое дело в том, что с вашим мизерным объемом вы не ощутите прелестей автомата. Переход чувствуется, когда человек напашется на большом ручном объеме, а потом вдруг появляется время на другие операции.
По поводу адкевтаного расписания проводки имеет смысл пользоваться двумя расписаниями: одно для мелких эндоскопий и подобного материала (днем), второе - для всего остального (ночью). Весь подгон расписания проводки состит в том, чтобы рассчитать окончание процесса к моменту заливки. Задержка либо в формалине, либо в первом спирте. Опеределенная доля логики в промежуточных смесях есть, но все нужно считать.
Посоветовать Вам ничего не могу, поскольку не видел ваших первоначальных расписаний.
|
| |
| |
| Айгулька | Дата: Понедельник, 2012-01-09, 3:33 PM | Сообщение # 18 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Уважаемый Максим!
Наверное я неправильно выразилась, раз вы меня так поняли. Я про экономию даже и не думаю, возможно это ошибочно, но не я покупала, выбирала этот аппарат, не мне и беспокоиться. Я очень довольна, что он у нас есть, но головная боль о расписании покоя все же мне не дает. Занимаюсь в большей степени я им одна, а опыта у меня с гулькин нос. вот и обратилась на этот форум. Насчет разделения день-ночь - это несомненно! главная проблема - расписание.
я его делала примерно следующее:
формалин 10мин при ком.температуре
формалин 10 мин 30 град.
спирт 70 1 час
спирт 80 1час
4 спирта 96 1час
температура 45
ксилолы с той же темп.
1ксилол 30 мин
2 ксилол 1 час
3 ксилол 1час
парафины по полтора часа 60 град. примерно получается 10-14 часов и вот однородно хорошо крупный материал не проходит. то есть некоторые узлы хорошо режутся, красятся, а некоторые вообще не режутся. и вот получается каждый день меняю время то у спиртов, то у ксилолов. а понять чего именно много или мало не могу. вот и решила обратиться к специалистам за дельным советом.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Понедельник, 2012-01-09, 9:30 PM | Сообщение # 19 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Уважаемая Айгулька!
Составление расписания как раз дело совсем не трудное.
Трудность состоит в понимании и соблюдении моментов до него.
Фиксация: 10% нейтральный забуференный формалин, 24 часа, комнатная температура, толщина кусочков 2-3 мм, площадь не более стандартной гистологической кассеты, соотношение объемов фиксатор:ткань 20:1 но не меньше 10:1.
Время фиксации 24 часа ОДИНАКОВО ДЛЯ ВСЕХ КУСОЧКОВ, ВКЛЮЧАЯ ЭНДОСКОПИЧЕСКИЕ ОБРАЗЦЫ!
Расписание для всех прочих образцов:
5 этанолов по 1 часу, (каждая новая партия кассет - последний этанол свежий, остальные ротируются влево, первый вылить)
этанол:ксилол 1:1 1 час (сменить через 3 партии)
2 ксилола по 1 часу (после каждой третьей партии последний заменить свежим, первый передвинуть влево).
4 парафина 60оС по 1 часу (последний заменить свежим 1 раз в неделю, предыдущие ротировать на 1 позицию влево, первый вылить).
Для эндоскопий:
3 этанола по 10 мин
этанол:ксилол 1:1 10 мин
ксилол 15 мин
2 парафина при 60оС по 15 мин.
Смена реагентов делается после прогона больших образцов.
Любые отсрочки на выходные и т.п. делать в формалине (если фиксация была недостаточной) или первом этаноле (если фикасции довольно). После формалина в расписание проводки вставить позицию с проточной водой и запрограммировать промывку на 15-20 мин. Это обязательно, чтобы удалить остатки фосфатов. Именно эти фосфаты при взаимодействии со спиртами дают осадки на стенках камеры и трубопроводах и являются причиной поломок процессора и поворотного клапана. Или фиксацию и промывку сделайте до процессора, а в нем пусть будут только спирты и т.д.
Как только вы начнете проводить образцы толщиной 2-3 мм и соблдать все остальные вышеописанные правила фиксации вы совершенно забудете о проблемах микротомии. Жир не должен быть толще 2 мм! Я это подчеркиваю, поскольку и мы работаем практически с аналогичным материалом (гинекология, хирургия, плаценты, детство, аутопсии, эндоскопии, онкология).
Согласен, для обучения пользования процессором нужно время минимум 1 месяц, но при этом вся остальная идеология должна быть четко исполнима. А самое трудное - заставить патологов вырезать куски не толще 3 мм. Эти проблемы я видел в очень многих лабораториях.
Сообщите, пожалуйста, о результатах проводки после пары-тройки недель, когда почувствуете, что прошел приличный объем материала. Нам всем всегда интересно, как проходят изменения и в других лабораториях.
|
| |
| |
| Айгулька | Дата: Вторник, 2012-01-10, 7:42 PM | Сообщение # 20 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Уважаемый Максим!
Несомненно материал в аппарат загружаем фиксированным! сутки как минимум, это естественно. Насчет промывки, я не знала! обязательно учту! спасибо)
Расписание практически такое же и у нас. в ручной проводке. В этом и проблема, что аппарат содержит и использует строго 6 спиртов и 3 ксилола. и меняет их соответственно сливая первый и сдвигая батарею влево. получается последний спирт или ксилол оказывается чистым. и промежуточный спирт:ксилол никак не включить. но я поговорю с техником. может можно что-нибудь придумать.
Спасибо за ценные советы! через недельку-другую обязательно отпишусь о полученных результатах!
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2012-01-10, 9:33 PM | Сообщение # 21 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Уважаемая Айгулька!
А что за процессор о котором мы говорим?
Если нет возможности воткнуть промежуточную смесь спирт-ксилол, бог с ней. Или пожертвуйте одним спиртом, пусть будет 5 спиртов по 1 часу. Вместе с промежуточной смесью время дегидратации все равно будет равно 6 часам - этого достаточно для жесткого этанола.
Премущество процеоора перед руками в том, что он может работать ночью, никого не тревожить, а главное, подогревать, перемешивать реагенты и давать вакуум и давление. Ничего из этого в ручном методе кроме подогрева (да и то по времени слишком растянутого и не до нужных цифр) добиться нельзя. Остается время для других дел. Даже если перекладка из банки в банку занимает около 2-3 минут, то через месяц-другой ежечасная беготня к банкам начинает надоедать, а через пару годиков этот процесс просто ненавистен.
Рад за ваш уровень автоматизации. А мы пока еще облизываем свои банки (процессор даже не светится).
|
| |
| |
| Айгулька | Дата: Четверг, 2012-02-16, 7:20 AM | Сообщение # 22 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Доброго утра! Прошу простить, что давно не писала.
Процессор EXELSIOR ES. вакуумник. только вакуум не включаем, т.к. препараты не получаются. А если быть точнее, то эпителий просто отлетает.
Время проводки без вакуума все равно сокращается значительно из-за применения давления. Соскобы у меня проходят за 3,5 часа. естественно ночь фиксированные в формалине. получается по спиртам по 10-15 минут и по 10 минут в 3х ксилолах. в парафинах по 30 минут, в 3ем 40. если брать небольшой соскоб 1,5 см в диаметре 0,2 - 0,3 толщиной, то идеально получается. но это с условием, что гистохимию мы не делаем. (там вроде более строгий учет времени при проводке) Так же подобрала (но пока в тестовом режиме) время для труб - кист и аутопсии с последами. на кисты с трубами 10-11 часов уходит, на последы с аутопсией 16. Возможно препараты не абсолютно идеальны, но очень (на мой конечно взгляд) хороши. если получится, сделаю фотографии и выложу для вашей оценки. Вы намного компетентнее меня в данном вопросе, может подскажите если что-то не так.
А насчет автоматизации... нисколько не жалею, что работала руками. по крайней мере, я отвечала за свои препараты, которые сама и изготовила. а тут получается качество моей работы зависит от аппарата.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Четверг, 2012-02-16, 9:33 PM | Сообщение # 23 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Попробуйте увеличить время в ксилолах 3 х 30 мин, а может понадобиться и больше. Эпителий в этом случае отлетает потому, что ткани не успевают пропитаться ксилолом, затем парафином и спирт остается в ткани.
Вообще же полезно иметь всего лишь пару расписаний в процессоре: для эндоскопий и соскобов и для всего остального (аутопсии и хирургии). Коротое расписание достаточно 2.5 часа, дилнное до 8 часов. Всякие задержки на выходные и т.п. есть смысл делать либо в формалине, либо в первом спирте. Конечно всякие дополнительные расписания с другими реактиваами нужно иметь всегда и уметь с ними работать, чтобы в любой момент быть способными переключиться на то, что есть под рукой.
Руками уметь делать препараты это обязательный навык. Вы обязаны уметь спасти препараты, если процессор загентся по той или иной причине. Негоже смотреть на то, как гробятся препараты и ничего не делать или извиняться перед пациентами - нам доверяют не только пациенты, но и врачи. Мы обязаны сделать все, что можно. Для этого и учимся (но лучше не делать этого в экстремальных ситуациях). Для этого есть смысл подбирать такие реактивы, задержка в которых не грозит потерей качества препраратов.
Задержка в ксилоле отрицательно влияет на качество препаратов.
|
| |
| |
| Trash | Дата: Среда, 2012-10-03, 1:02 PM | Сообщение # 24 |
 Лейтенант
Группа: Проверенные
Сообщений: 5
Статус: Offline
| Айгулька, можно попробовать изопропанольную проводку, приемущества - дешевизна и закупка изопропанола проще
http://biovitrum.ru/press-center/articles/razdel1/voprosy_gistotehniki/izopropilovyj_spirt_i_ego_primenenij_v_gistologicheskoj_tehnike/
|
| |
| |
|
|
