Вы вошли как Гость
Текущая дата: Суббота, 2024-04-20, 6:02 AM
|
методика и техника окраски кардиобиоптатов !!
|
|
| Uno | Дата: Понедельник, 2012-11-12, 8:29 PM | Сообщение # 1 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 5
Статус: Offline
| Добрый вечер!
Мне очень нужна методика и техника окраски кардиобиоптатов для диагностика миокардита. И классификация степени фиброза, жировой дистрофии,гипертрофии кардиомиоцитов. Если есть возможность, можно дать ссылки на литературу. И еще нужна методика проведения иммуноморфологии и иммуногистохимии кардиобиоптатов. Спасибо заранее!
|
| |
| | |
| Uno | Дата: Вторник, 2012-11-13, 10:59 PM | Сообщение # 3 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 5
Статус: Offline
| Quote (Patologoanatom) 2011 Consensus statement on endomyocardial biopsy from the Association for European Cardiovascular Pathology and the Society for Cardiovascular Pathology
Quote (Patologoanatom) 2011 Consensus statement on endomyocardial biopsy from the Association for European Cardiovascular Pathology and the Society for Cardiovascular Pathology
спасибо за ссылку.но это я уже читала. и там про ЭМБ. а мне нужна именно пошаговая окраска кардиобиоптатов.то есть инструкция.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Среда, 2012-11-14, 6:41 AM | Сообщение # 4 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Окраска любых препаратов сначала делается гематоксилин-эозин по общим правилам, приянтым в данной лаборатории. Затем применяют необходимые гистохимические и ИГХ-методы. Какие именно методы Вас интересуют?
|
| |
| |
| Uno | Дата: Суббота, 2012-11-17, 9:35 PM | Сообщение # 5 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 5
Статус: Offline
| Quote (Maxim) Окраска любых препаратов сначала делается гематоксилин-эозин по общим правилам, приянтым в данной лаборатории. Затем применяют необходимые гистохимические и ИГХ-методы. Какие именно методы Вас интересуют?
чем и как поэтапно окрашивают кусочки миокарда, чтобы поставить диагноз по Далласким критериям, а также по Марбургским критериям.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Суббота, 2012-11-17, 11:33 PM | Сообщение # 6 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| "Двумя основными критериями патоморфологической картины, которые дают право поставить диагноз миокардита, являются лейкоцитарная инфильтрация и дегенерация или некроза кардимиоцитов. Это так называемые Даллаские критерии."
Гематоксилин-эозин - достаточный для этих критериев метод. На сегодня эти критерии устарели.
Что касается установления инфекционного агента, для этого существуют методы Грама, Циль-Нильсена, ШИК, азур-эозин, Гомори-Грокотт, Вартин-Старри и любые методы окраски бактерий и инфекционных агентов в гистологии.
"Для постановки диагноза миокардита по Марбургским критериям необходимо наличие минимум 14 лейкоцитов на площади 1 мм2: преимущественно Т-лимфоцитов (CD45ro) и до 4 макрофагов. При наличии фокальных скоплений Т-лимфоцитов диагноз миокардита может быть поставлен на основании состава инфильтрата, даже если пороговое количество в 14 лейкоцитов/мм2 не достигается.
Количественно инфильтрат должен быть подсчитан иммуногистохимическим методом. В настоящее время доступен широкий спектр моно- и поликлональных антител к антигенам различных клеток, что позволяет идентифицировать участвующие в воспалении клетки и выяснить активность иммунологических реакций. В исследовании ESETCID иммуногистохимически определяли CD45ro, CD2, CD3, CD4, CD8, CD79a, CD68, также возможно использование anti-CD20, anti-HLA, антител к перфорину (выявление цитотоксических перфорин-позитивных Т-лимфоцитов), к молекулам межклеточной адгезии (anti-ICAM-1) и др. (рис. 7) [2, 15, 23]."
Цитаты были взяты отсюда: http://urgent.com.ua/....31.html
ИГХ - как всегда и в любом другом органе, согласно инструкциям к первичным антителам, системам детекции, общим принципам ИГХ-окрасок.
Фиброз виден при окрааске по Ван Гизону или Массону.
Первый этап: ГЭ, ВГ (Массон).
Второй этап в зависимости от картины закончится либо заключением, лабо назначением гистохимических окрасок или ИГХ.
ИГХ может потребовать нескольких этапов, поэтому такие блоки нужно расходовать очень аккуратно! Лучше заранее приготовить два десятка стекол, если делается ИГХ, и потом их выкинуть если не станут нужны.
|
| |
| |
| Uno | Дата: Воскресенье, 2012-11-18, 11:13 PM | Сообщение # 7 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 5
Статус: Offline
| Спасибо,Максим, за ответ.
Если не очень сложно, можно поэтапно окраску гемтоксилин-эозином,Массону описать.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Воскресенье, 2012-11-18, 11:39 PM | Сообщение # 8 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Окраска Гематоксилин-эозин:
1. Довести срезы до дистиллированной или деоинизированной воды, способом, принятым в лаборатории.
2. Гематоксилин (время рекомендованное производителем раствора). Промыть в дист воде. Если необходима дифференцировка, следуйте указаниям производителя гематоксилина. Если она не нужна - водопроводная вода на 1-3-5 мин, до тех пор, пока ядра станут синими.
3. Промыть в дист воде 1 минуту.
4. Эозин несколько сек - несколько мин (согласно рекомендациям производителя), промыть в дист воде несколько сек.
5. Обезводить, просветлить, заключить способом, принятым в лабортории.
Ядра - синие
Мышцы - ярко-розовые
Коллаген - светло-розовый
Эритроциты - оранжево-красные.
При правильной окраске мышцы и коллаген хорошо различимы и не должны маскировать окраску ядер.
Окраска Массон. Обычно используют коммерческие наборы, а в них есть детальные пошаговые инструкции, поскольу составы растворов отличаются, а методов Массона известно несколько, да и модификаций тоже.
Вобщем метод выглядит так:
1. Довести срезы до дистиллированной или деоинизированной воды, способом, принятым в лаборатории.
2. Протрава Буэна 1 час при комнатной темпеартуре.
3. Промывка в 3 сменах воды.
4. Окраска ядер железным гематоксилином типа Вейгерта или другим.
5. Промывка в воде.
6. Красный краситель (обыно кислый фуксин) 10 мин.
7. Удалить избыток красного красителя в проточной воде несколько минут.
8. Раствор фосфорновольфрамовой кислоты 10 минут.
9. Синий краситель на 20-25 минут.
10. Быстрая промывка в дист воде.
11. Обезводить, просветлить, заключить способом, принятым в лабортории.
Ядра - черные
Мышцы - красные
Коллаен - синий.
|
| |
| |
| Uno | Дата: Понедельник, 2012-11-19, 5:11 PM | Сообщение # 9 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 5
Статус: Offline
| Максим,Спасибо большое за подробный ответ!
|
| |
| |
|
|
