Криостаты - Форум
 
Криостаты - Форум
[ Новые сообщения · Участники · Правила форума · Поиск · RSS ]
Вы вошли как Гость
Текущая дата: Среда, 2016-12-07, 11:38 AM

Страница 1 из 11
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Криостаты (резка замороженных срезов)
Криостаты
MaximДата: Среда, 2015-03-04, 7:55 PM | Сообщение # 1
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Уважаемые коллеги!
Отзовитесь, у кого есть положительный опыт работы с настольным криостатом Bright Starlet 2212?
Что-то у меня не получается нормально заморозить ни одного кусочка. То ли руки стоят неправильно - места очень мало внутри.
Замораживал ткань молочной железы. Настроил на -30оС. Закрепил ткань на формочке каплей воды, залил гелем для заморозки.
При резке ткань собирается сверху ножа складками, жмется и не расправляется даже на воде.
Непривычны следующие вещи: лезвие широкое, профиль D, крепится на магнитах к держателю, антироллерная пластинка не улучшает ничего. Шаг толщины по 2 мкм. Выставил на 4 мкм. Среза нормального нет. Изменял угол наклона лезвия. Толку нет.
Что делаю не так?
 
вивьенДата: Пятница, 2015-03-06, 4:02 PM | Сообщение # 2
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 40
Репутация: 2
Статус: Offline
Доброго дня, Maхim,
попробуйте температуру -20-240С, время заморозки 2-3 мин ( для молочной железы можно 5 мин, если много жировой ткани), воду не используйте, только гель - капля на формочку, затем кусочек, затем капля сверху и прижим. Срез сразу на стекло без воды, хотя ткань сразу возьмется складками или фрагментируется, капайте краситель - експозиция 30 сек и под микроскоп. Смотреть надо привыкнуть.
Работаем этой методой сравнительно недавно, довольны. Криостат очень древний, антироллера не вообще, но приспособились. Видела как работают на современном, срез такой же как Вы описываете.
 
MaximДата: Пятница, 2015-03-06, 4:39 PM | Сообщение # 3
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Спасибо, Вивьен!
Я пробовал температуру от -15 до -30оС. время от минуты до 5. Больше нет смысла - всего 15 минут на все исследование.
Пробовал срезы собирать и в воду и просто лепить на стекло. И без капли воды тоже хорошо держится на формочке, согласен. В обрывках, которые удалось удержать на стекле, видно сильное сморщивание ядер - артефакт замораживания.
Позже стал вообще пробовать срезать только гель, без ткани. В итоге нашел оптимальный угол наклона и толщину среза 4 и 6 мкм. Дискретность по 2 мкм. Но с тканью опять все плохо - рвется, сжимается.
Я все это спрашиваю к тому, чтобы решить вопрос о пригодности криостата. Выбор между двумя причинами: 1. кривые руки пользователя и 2. негодный аппарат.
Раньше мы получали очень даже сносные срезы и в углекислотной заморозке, и с хлорэтилом и с элементом Пельтье. Пробовали работать на этой машине еще два лаборанта, которые также имеют опыт работы с замороженными срезами. Но у всех результат плохой. Аппарат не такой? Это утверждается в самую последнюю очередь.
Если кто-то получает хорошие срезы в этой машине, отзовитесь, научите, поделитесь опытом! Расскажите о настройках, покажите кино.
Техников звать бесполезно. Температуру держит, все опции, колеса настройки и винты работают. А среза нет...
 
вивьенДата: Пятница, 2015-03-06, 5:25 PM | Сообщение # 4
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 40
Репутация: 2
Статус: Offline
Maхim,  гляньте  http://www.science.marshall.edu/dneff....que.pdf

но на картинках тоже не идеальные срезы
 
MaximДата: Пятница, 2015-03-06, 5:31 PM | Сообщение # 5
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Да, спасибо. Эту книгу очень уважаю. Stephen Peters работает в Leica, дядька очень интрересный, у него есть много полезных нововведений. Есть и видео в его исполнении на этом сайте:
http://www.pathologyinnovations.com Да и вообще там очень все полезно и классно написано.
Единственное но: он работает на классных ляйковских криостатах. Нам такой не купили, хотя я очень настаивал.
 
вивьенДата: Пятница, 2015-03-06, 5:36 PM | Сообщение # 6
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 40
Репутация: 2
Статус: Offline
так видела лейку, срез на стекле превращается в кучку ткани и после покраски видны только участочки с множеством артефактов заморозки, хочу делать лучше но пока тоже не нашла метода
 
nastjaДата: Вторник, 2015-03-10, 1:47 PM | Сообщение # 7
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 64
Репутация: 6
Статус: Offline
Maxim, когда-то на курсах у нас было несколько занятий на криостатах. Получались хорошие аккуратные срезы, но при большей толщине - 8-10 мкм.
 
PatologoanatomДата: Воскресенье, 2015-03-15, 8:59 PM | Сообщение # 8
___
Группа: Администраторы
Сообщений: 743
Репутация: 11
Статус: Offline
Цитата Maxim ()
Bright Starlet 2212

Есть только опыт работы с Ляйками. Для ускорения заморозки используем спрей. Ну и каждого патолога есть своя кисточка, чтобы тянуть ленту замороженного геля OCT, чтобы не было складок. Стекло должно быть комнатной температуры, когда его накладываешь на срез.
 
MaximДата: Понедельник, 2015-04-13, 9:25 AM | Сообщение # 9
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Спасибо, Patologoanatom. Сейчас запросили методическую поддержку у компании-поставщика. Искренне верю, что если хотя бы у одного человека есть положительный результат при работе с этой моделью, то другие просто обязаны повторить его, то есть поставить свои руки правильно.

Добавлено (2015-04-13, 9:25 AM)
---------------------------------------------
И вот чем закончилась история с криостатом. Повозились с настройкой угла резки. Он не совпал с рекомендациями в руководстве пользователя. Угол искал на пустом блоке с замораживающим гелем, без ткани, нашел в итоге: он находится в пределах между 15 и 20 градусами. Далее еще несколько раз попробовали делать срезы уже при этих настройках. Получились вполне сносные срезы, в которых можно увидеть структуру ткани. Теперь работаем.
Одной из опорных вещей стала консультация по телефону с одной из лабораторий, в которой такой криостат есть, у них все получилось почти с первого раза.
Нам потребовалось время и осознание того, что кто-то все же получает хорошие результаты.
 
Darkside_MasterДата: Среда, 2015-12-30, 11:49 AM | Сообщение # 10
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 6
Репутация: 2
Статус: Offline
Уважаемый Максим!

не могу подсказать ничего по поводу конкретной указанной Вами модели, но для криостатов Leica и в целом для криостатов важно помнить следующие ключевые моменты:

-лезвия высокого профиля, они в криостатах работают лучше
-большая толщина среза (больше 4-5 микрометров)
-как Вы уже заметили, угол наклона ножа.

С уважением,
Владимир Рущак,
Специалист отдела микроскопии и гистопатологии,
«АЛТ Украина ЛТД»
Тел. +38 (044) 492-72-70, моб. +38 (063) 648 28 22
e-mail: vr@alt.ua
 
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Криостаты (резка замороженных срезов)
Страница 1 из 11
Поиск: