Вы вошли как Гость
Текущая дата: Среда, 2024-04-24, 1:21 AM
|
Криостаты
|
|
| Maxim | Дата: Среда, 2015-03-04, 7:55 PM | Сообщение # 1 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Уважаемые коллеги!
Отзовитесь, у кого есть положительный опыт работы с настольным криостатом Bright Starlet 2212?
Что-то у меня не получается нормально заморозить ни одного кусочка. То ли руки стоят неправильно - места очень мало внутри.
Замораживал ткань молочной железы. Настроил на -30оС. Закрепил ткань на формочке каплей воды, залил гелем для заморозки.
При резке ткань собирается сверху ножа складками, жмется и не расправляется даже на воде.
Непривычны следующие вещи: лезвие широкое, профиль D, крепится на магнитах к держателю, антироллерная пластинка не улучшает ничего. Шаг толщины по 2 мкм. Выставил на 4 мкм. Среза нормального нет. Изменял угол наклона лезвия. Толку нет.
Что делаю не так?
|
| |
| |
| вивьен | Дата: Пятница, 2015-03-06, 4:02 PM | Сообщение # 2 |
 Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 40
Статус: Offline
| Доброго дня, Maхim,
попробуйте температуру -20-240С, время заморозки 2-3 мин ( для молочной железы можно 5 мин, если много жировой ткани), воду не используйте, только гель - капля на формочку, затем кусочек, затем капля сверху и прижим. Срез сразу на стекло без воды, хотя ткань сразу возьмется складками или фрагментируется, капайте краситель - експозиция 30 сек и под микроскоп. Смотреть надо привыкнуть.
Работаем этой методой сравнительно недавно, довольны. Криостат очень древний, антироллера не вообще, но приспособились. Видела как работают на современном, срез такой же как Вы описываете.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Пятница, 2015-03-06, 4:39 PM | Сообщение # 3 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Спасибо, Вивьен!
Я пробовал температуру от -15 до -30оС. время от минуты до 5. Больше нет смысла - всего 15 минут на все исследование.
Пробовал срезы собирать и в воду и просто лепить на стекло. И без капли воды тоже хорошо держится на формочке, согласен. В обрывках, которые удалось удержать на стекле, видно сильное сморщивание ядер - артефакт замораживания.
Позже стал вообще пробовать срезать только гель, без ткани. В итоге нашел оптимальный угол наклона и толщину среза 4 и 6 мкм. Дискретность по 2 мкм. Но с тканью опять все плохо - рвется, сжимается.
Я все это спрашиваю к тому, чтобы решить вопрос о пригодности криостата. Выбор между двумя причинами: 1. кривые руки пользователя и 2. негодный аппарат.
Раньше мы получали очень даже сносные срезы и в углекислотной заморозке, и с хлорэтилом и с элементом Пельтье. Пробовали работать на этой машине еще два лаборанта, которые также имеют опыт работы с замороженными срезами. Но у всех результат плохой. Аппарат не такой? Это утверждается в самую последнюю очередь.
Если кто-то получает хорошие срезы в этой машине, отзовитесь, научите, поделитесь опытом! Расскажите о настройках, покажите кино.
Техников звать бесполезно. Температуру держит, все опции, колеса настройки и винты работают. А среза нет...
|
| |
| |
| вивьен | Дата: Пятница, 2015-03-06, 5:25 PM | Сообщение # 4 |
|
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 40
Статус: Offline
| Maхim, гляньте http://www.science.marshall.edu/dneff....que.pdf
но на картинках тоже не идеальные срезы
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Пятница, 2015-03-06, 5:31 PM | Сообщение # 5 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Да, спасибо. Эту книгу очень уважаю. Stephen Peters работает в Leica, дядька очень интрересный, у него есть много полезных нововведений. Есть и видео в его исполнении на этом сайте:
http://www.pathologyinnovations.com Да и вообще там очень все полезно и классно написано.
Единственное но: он работает на классных ляйковских криостатах. Нам такой не купили, хотя я очень настаивал.
|
| |
| |
| вивьен | Дата: Пятница, 2015-03-06, 5:36 PM | Сообщение # 6 |
|
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 40
Статус: Offline
| так видела лейку, срез на стекле превращается в кучку ткани и после покраски видны только участочки с множеством артефактов заморозки, хочу делать лучше но пока тоже не нашла метода
|
| |
| |
| nastja | Дата: Вторник, 2015-03-10, 1:47 PM | Сообщение # 7 |
|
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 64
Статус: Offline
| Maxim, когда-то на курсах у нас было несколько занятий на криостатах. Получались хорошие аккуратные срезы, но при большей толщине - 8-10 мкм.
|
| |
| |
| Patologoanatom | Дата: Воскресенье, 2015-03-15, 8:59 PM | Сообщение # 8 |
 ___
Группа: Администраторы
Сообщений: 755
Статус: Offline
| Цитата Maxim (  ) Bright Starlet 2212
Есть только опыт работы с Ляйками. Для ускорения заморозки используем спрей. Ну и каждого патолога есть своя кисточка, чтобы тянуть ленту замороженного геля OCT, чтобы не было складок. Стекло должно быть комнатной температуры, когда его накладываешь на срез.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Понедельник, 2015-04-13, 9:25 AM | Сообщение # 9 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Спасибо, Patologoanatom. Сейчас запросили методическую поддержку у компании-поставщика. Искренне верю, что если хотя бы у одного человека есть положительный результат при работе с этой моделью, то другие просто обязаны повторить его, то есть поставить свои руки правильно.
Добавлено (2015-04-13, 9:25 AM)
---------------------------------------------
И вот чем закончилась история с криостатом. Повозились с настройкой угла резки. Он не совпал с рекомендациями в руководстве пользователя. Угол искал на пустом блоке с замораживающим гелем, без ткани, нашел в итоге: он находится в пределах между 15 и 20 градусами. Далее еще несколько раз попробовали делать срезы уже при этих настройках. Получились вполне сносные срезы, в которых можно увидеть структуру ткани. Теперь работаем.
Одной из опорных вещей стала консультация по телефону с одной из лабораторий, в которой такой криостат есть, у них все получилось почти с первого раза.
Нам потребовалось время и осознание того, что кто-то все же получает хорошие результаты.
|
| |
| |
| Darkside_Master | Дата: Среда, 2015-12-30, 11:49 AM | Сообщение # 10 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 6
Статус: Offline
| Уважаемый Максим!
не могу подсказать ничего по поводу конкретной указанной Вами модели, но для криостатов Leica и в целом для криостатов важно помнить следующие ключевые моменты:
-лезвия высокого профиля, они в криостатах работают лучше
-большая толщина среза (больше 4-5 микрометров)
-как Вы уже заметили, угол наклона ножа.
С уважением,
Владимир Рущак,
Специалист отдела микроскопии и гистопатологии,
«АЛТ Украина ЛТД»
Тел. +38 (044) 492-72-70, моб. +38 (063) 648 28 22
e-mail: vr@alt.ua
|
| |
| |
|
|
