Начать надо с качественных препаратов с хорошими антигенными свойствами. В иммуногистохимии важен каждый шаг и может стать критическим: фиксация, проводка, нарезка, демаскировка антигенов, промывка в буферных растворах, выбор системы детекции, оценка...
Из отечественной литературы для начала порекомендовал бы статью из Архива Патологии.
В каталоге файлов нашего сайта, доступном для постоянных участников форума есть полезное англоязычное методическое руководство.
О расценках лучше спросить в ИГХ компании, см. ссылку.
Давайте продолжим обсуждение на форуме.

Добавлено (2007-12-12, 9:56 Am)
---------------------------------------------
Снова здравствуйте! Появился новый вопрос: при таком обилии онкомаркеров и антител к ним как выбрать методику (протокол) для диагностики? Конкретно для диагностики рака молочной железы и рака простаты.

Тут снова вопрос в цене вопроса. Если у Вас очень большой бюджет, что можно покупать готовые наборы реактивов для определения экспрессии рецепторов эстрогенов (ER) и прогестерона (PR) или с-erbB-2 (Her2/neu) – цена таких наборов в России более 2000 евро каждого (набор обычно рассчитан на 35-50 тестов). Если таких денег нет, то можно любой существующий в лаборатории протокол модифицировать для определения рецепторного статуса рака молочной железы. Не важно какими реактивами Вы пользуетесь, важно что бы результаты реакции отражали реальные биологические характеристики опухоли. Так, например, экспрессия рецепторов эстрогенов подчиняется закону “всё или ничего”. Иными словами результаты реакции должны иметь бимодальной распределение (см. ссылку). В этом есть биологический смысл – не бывает опухолей немножко гормон-чувствительных.

http://ajcp.metapress.com/app/home/linking.asp?referrer=linking&target=contribution&id=HCF035N9WK40ETJ0&backto=contribution,1,1;searcharticlesresults,2,3;

На сколько я знаю, для определения чего бы то нибыло в раке предстательной железы наборов не существует. Относительно протокола – тут надо избегать использования стрептавидин-биотиновых систем детекции. Иначе вместо исследуемого антигена могут окрашиваться митохондрии, содержащие большое количество эндогенного биотина.

Успехов.

American Journal of Clinical Pathology; Vol 123, Num 1, pages 16 – 20
Bimodal Frequency Distribution of Estrogen Receptor Immunohistochemical Staining Results in Breast Cancer
Laura C. Collins, Maria L. Botero, Stuart J. Schnitt.
Для бесплатного получения статьи можно пойти по приведённой ранее ссылке, а затем ввести в строку для поиска первые три слова из названия статьи.

Я тоже думаю, что имеет смысл открыть для этой темы специальный топик. Но он, к сожалению, будет иметь чисто теоретическое значение. Ведь общая идеология оценки прогностических и предсказательных факторов сводится к тому, что отделы патанатомии в каждом медицинском учреждении должны вырабатывать свои шкалы оценки, которые коррелируют с чувствительностью к применяемым в данных учреждениях схемам химиотерапии. Для этого, в идеале, необходимо в каждом учреждении проводить ретроспективные исследования. Это связано с тем, что реальный порог оценки очень сильно зависит от методики ИГХ-окрашивания, применяемой в данном учреждении. Кроме того, выбор шкалы оценки зависит ещё и от привычек клиницистов. В нашем учреждении (РОНЦ) оценка рецепторного статуса рака молочной железы проводится давно. Наши клиницисты уже привыкли к оценке по 300-бальной шкале (Н-баллы), и не дают перейти на более правильную (с моей точки зрения) 8-бальную шкалу (Allred score).
Поэтому предлагаю открыть топик по оценке ИГХ-реакций вообще, как количественной, так и качественной.

Добавлено (2007-12-19, 7:40 Am)
---------------------------------------------
Прошу меня извинить - в предыдушем сообщении не прописан год публикации - 2005.

Работ, в которых говорилось бы о бимодальном распределении экспрессии рецепторов эстрогенов довольно много. Но интересно отметить одну деталь. Среди тех работ, где методика описана более или менее подробно, бимодальное распределение получается в лабораториях, использующих либо высокочувствительные системы детекции, либо амплификацию сигнала после окрашивания диаминобензидином. Понятно, почему так происходит – даже слабо экспрессирующие опухолевые клетки окрашиваются с максимально возможной интенсивностью (практически достигают плато интенсивности окраски). Вопрос в другом – правильно ли так красить? Оценивать то реакции понятно удобнее, когда они подчиняется закону “всё или ничего”. Но не теряется ли при этом реальная картина? Ведь внутриопухолевая гетерогенность экспрессии практически любых белков больше чем среди нормальных клеток-аналогов. С другой стороны, учитывая моноклональное происхождение опухолей, если в опухоли есть экспрессия рецепторов эстрогенов, то она должны быть практически во всех клетках, а 7 баллов как раз и говорят о внутриопухолевой гетерогенности. Может эта ситуация и отражает реальную картину, а способность получить бимодальное распределение экспрессии рецепторов эстрогенов в раке молочной железы может являться критерием качества работы ИГХ-лаборатории?

Прекрасная статья, позволяющая понять основы ИГХ.