Вы вошли как Гость Текущая дата: Четверг, 2024-03-28, 9:49 PM
Заключение срезов
|
|
Roman | Дата: Четверг, 2009-03-26, 11:43 PM | Сообщение # 1 |
Просто профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 220
Статус: Offline
| Уважаемые коллеги, поделитесь опытом: во что вы заключаете срезы, окрашенные ДАВ-хромогеном? проблема в том, что срезы, заключенные в желатину или фирменные водные среды, выглядят мутными
От всего человека вам остается часть... И. Бродский
|
|
| |
Patologoanatom | Дата: Четверг, 2009-03-26, 11:53 PM | Сообщение # 2 |
___
Группа: Администраторы
Сообщений: 755
Статус: Offline
| В micromount, который в пластиковой емкости. Это если речь идет о материале фиксированном в формалине, залитом в парафин (FFPE). Для криостатных срезов нужна водная среда при наложении покровных стекол.
|
|
| |
Roman | Дата: Пятница, 2009-03-27, 2:51 PM | Сообщение # 3 |
Просто профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 220
Статус: Offline
| Спасибо за ссылку, среда требует, как я понял, предварительной обработки срезов в ксилоле. Уточню смысл вопроса: парафинновый фиксированный в формалине материал после завершения окраски с использованием ДАВ-хромогена (который вроде бы спирт растворимый) можно ли и нужно ли проводить по спиртам, карбол-ксилолу и ксилолу для последующего заключения в ксилолрастворимую среду? Или необходима только водная среда. И каким гематоксилином в таком случае подкрашивать ядра: водным (Майера) или "обычным"?
От всего человека вам остается часть... И. Бродский
|
|
| |
Patologoanatom | Дата: Пятница, 2009-03-27, 5:54 PM | Сообщение # 4 |
___
Группа: Администраторы
Сообщений: 755
Статус: Offline
| Quote (Roman) можно ли и нужно ли проводить по спиртам, карбол-ксилолу и ксилолу для последующего заключения в ксилолрастворимую среду? Нужно. Для докрашивания ядер можно использовать любой гематоксилин, и Gill III, и Майер. Это от предпочтения патолога, главное, чтобы гематоксилин не был слишком темным, "забивающим" окраску, особенно с ядерными рецепторами. Поэтому можно протестировать подходящие параметры, гематоксилин можно разбавить, после докрашивания промыть в dH2O, проверить под микроскопом с покровным стеклом. Если нормально, поместить стекла в bluing, промыть в dH2O. Затем уже проводить по спиртам и ксилолу, micromount, покровное стекло.
|
|
| |
Roman | Дата: Пятница, 2009-03-27, 9:56 PM | Сообщение # 5 |
Просто профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 220
Статус: Offline
| Bluing - это аммониевая вода, например. А дифференцировать в солянокислом спирте после окраски гематоксилином тоже нужно?
От всего человека вам остается часть... И. Бродский
|
|
| |
Patologoanatom | Дата: Пятница, 2009-03-27, 10:04 PM | Сообщение # 6 |
___
Группа: Администраторы
Сообщений: 755
Статус: Offline
| Quote (Roman) А дифференцировать в солянокислом спирте после окраски гематоксилином тоже нужно? Мы не используем солянокислый спирт, только коммерческие растворы для стандартизации ИГХ.
|
|
| |
Maxim | Дата: Суббота, 2010-06-12, 11:30 PM | Сообщение # 7 |
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Quote (Roman) во что вы заключаете срезы, окрашенные ДАВ-хромогеном? проблема в том, что срезы, заключенные в желатину или фирменные водные среды, выглядят мутными Уважаемый Roman! ДАБ-хромоген вполне выдерживает обезвоживание любым спиртом, ацетоном и просветление ксилолом. Гематоксилин - любой. Если избыточная окраска - дифференцировка либо в солянокислом спирте (как обычно, либо 0.25% водной соляной кислотой - это мягче. Вместо blueing смело окунайте в промывочный буфер (в TBST красивее и быстрее синеют срезы). Мутность среза под стеклом в 99% вызвана неполным обезвоживанием. Смените спирты. Можно обзвоживать и ацетоном - никакой разницы нет. Во всяком случае, у меня мутные срезы получались после Biomount (Bio-Optica) и Aqueous Permanent Mounting Medium (Dako). Поэтому все это я отставил, и пользуюсь полистиролом собственного приготовления (25% раствор полистирола в ксилоле + 6% дибутилфталата). Эта среда еще ни разу меня не подводила за 17 лет работы. Если наблюдается мутность ВОКРУГ среза, это из-за жирного кранадаша, которым обводят срез, чтобы не растекались антитела. Хорошо прополосните в 2 порциях ксилола перед заключением и это исчезнет. Надеюсь, на вопрос ответил (спустя 1.5 года!).
|
|
| |
Vladpatholog | Дата: Воскресенье, 2010-06-13, 4:50 PM | Сообщение # 8 |
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| Quote Поэтому все это я отставил, и пользуюсь полистиролом собственного приготовления (25% раствор полистирола в ксилоле + 6% дибутилфталата). аналогично, все нормально видно. Обращал внимание еще и на то, что мутность бывает когда материал изначально недостаточно был фиксирован в формалине. вообще сложилось впечатление, что лучше в формалине передержать, чем недофиксировать.
|
|
| |
Maxim | Дата: Воскресенье, 2010-06-13, 5:15 PM | Сообщение # 9 |
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Quote (Vladpatholog) утность бывает когда материал[/spoiler] изначально недостаточно был фиксирован в формалине Согласен, но эта мутность уже несколько другого свойства. Как недостаток фиксации туманность, дымчатось или просто размытость обычно появляется в областях, богатых ядрами, особенно в ядрах эпителия, но он может также возникнуть в коллагене и других эозинофильных участках. А Roman, похоже имел в виду равномерную общую мутность по всему препарату? В приложении иллюстрация эффектов недофиксации формалином, взятая из The Innovator (рекламная листовка от Anatech №1 за 1998). Тут, правда, больше рекламы их продукта, однако, если ее отбросить и оставить описание проблемы (она у них описана во введении) все верно.
|
|
| |
Anitra | Дата: Четверг, 2011-07-21, 0:08 AM | Сообщение # 10 |
Майор
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 31
Статус: Offline
| Пользуемся Биомаунтом (Биооптика). Получается хорошо. Обычно водную монтирующую среду требуют красные хромогены. Но если не использовать двойное окрашивание (Даб+ФастРед) не вижу свысла их использовать. Хотя на заметку - из водорастворимых есть новый "ВитроГель" - просто и со вкусом. Так что наверное правда дело в фиксации
Червяк длинный, а жизнь короткая
|
|
| |
|
|