Заключение срезов - Форум
 
Заключение срезов - Форум
[ Новые сообщения · Участники · Правила форума · Поиск · RSS ]
Вы вошли как Гость
Текущая дата: Пятница, 2016-12-09, 10:40 AM

Страница 1 из 11
Форум » ИММУНОГИСТОХИМИЯ » Технические вопросы » Заключение срезов
Заключение срезов
RomanДата: Четверг, 2009-03-26, 11:43 PM | Сообщение # 1
Просто профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 220
Репутация: 7
Статус: Offline
Уважаемые коллеги,
поделитесь опытом: во что вы заключаете срезы, окрашенные ДАВ-хромогеном?
проблема в том, что срезы, заключенные в желатину или фирменные водные среды, выглядят мутными


От всего человека вам остается часть...
И. Бродский
 
PatologoanatomДата: Четверг, 2009-03-26, 11:53 PM | Сообщение # 2
___
Группа: Администраторы
Сообщений: 743
Репутация: 11
Статус: Offline
В micromount, который в пластиковой емкости. Это если речь идет о материале фиксированном в формалине, залитом в парафин (FFPE). Для криостатных срезов нужна водная среда при наложении покровных стекол.
 
RomanДата: Пятница, 2009-03-27, 2:51 PM | Сообщение # 3
Просто профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 220
Репутация: 7
Статус: Offline
Спасибо за ссылку, среда требует, как я понял, предварительной обработки срезов в ксилоле.
Уточню смысл вопроса: парафинновый фиксированный в формалине материал после завершения окраски с использованием ДАВ-хромогена (который вроде бы спирт растворимый) можно ли и нужно ли проводить по спиртам, карбол-ксилолу и ксилолу для последующего заключения в ксилолрастворимую среду? Или необходима только водная среда. И каким гематоксилином в таком случае подкрашивать ядра: водным (Майера) или "обычным"?


От всего человека вам остается часть...
И. Бродский
 
PatologoanatomДата: Пятница, 2009-03-27, 5:54 PM | Сообщение # 4
___
Группа: Администраторы
Сообщений: 743
Репутация: 11
Статус: Offline
Quote (Roman)
можно ли и нужно ли проводить по спиртам, карбол-ксилолу и ксилолу для последующего заключения в ксилолрастворимую среду?

Нужно.

Для докрашивания ядер можно использовать любой гематоксилин, и Gill III, и Майер. Это от предпочтения патолога, главное, чтобы гематоксилин не был слишком темным, "забивающим" окраску, особенно с ядерными рецепторами. Поэтому можно протестировать подходящие параметры, гематоксилин можно разбавить, после докрашивания промыть в dH2O, проверить под микроскопом с покровным стеклом. Если нормально, поместить стекла в bluing, промыть в dH2O. Затем уже проводить по спиртам и ксилолу, micromount, покровное стекло.

 
RomanДата: Пятница, 2009-03-27, 9:56 PM | Сообщение # 5
Просто профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 220
Репутация: 7
Статус: Offline
Bluing - это аммониевая вода, например. А дифференцировать в солянокислом спирте после окраски гематоксилином тоже нужно?

От всего человека вам остается часть...
И. Бродский
 
PatologoanatomДата: Пятница, 2009-03-27, 10:04 PM | Сообщение # 6
___
Группа: Администраторы
Сообщений: 743
Репутация: 11
Статус: Offline
Quote (Roman)
А дифференцировать в солянокислом спирте после окраски гематоксилином тоже нужно?

Мы не используем солянокислый спирт, только коммерческие растворы для стандартизации ИГХ.
 
MaximДата: Суббота, 2010-06-12, 11:30 PM | Сообщение # 7
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Quote (Roman)
во что вы заключаете срезы, окрашенные ДАВ-хромогеном? проблема в том, что срезы, заключенные в желатину или фирменные водные среды, выглядят мутными

Уважаемый Roman!
ДАБ-хромоген вполне выдерживает обезвоживание любым спиртом, ацетоном и просветление ксилолом.
Гематоксилин - любой. Если избыточная окраска - дифференцировка либо в солянокислом спирте (как обычно, либо 0.25% водной соляной кислотой - это мягче. Вместо blueing смело окунайте в промывочный буфер (в TBST красивее и быстрее синеют срезы).
Мутность среза под стеклом в 99% вызвана неполным обезвоживанием. Смените спирты. Можно обзвоживать и ацетоном - никакой разницы нет.
Во всяком случае, у меня мутные срезы получались после Biomount (Bio-Optica) и Aqueous Permanent Mounting Medium (Dako).
Поэтому все это я отставил, и пользуюсь полистиролом собственного приготовления (25% раствор полистирола в ксилоле + 6% дибутилфталата). Эта среда еще ни разу меня не подводила за 17 лет работы.
Если наблюдается мутность ВОКРУГ среза, это из-за жирного кранадаша, которым обводят срез, чтобы не растекались антитела. Хорошо прополосните в 2 порциях ксилола перед заключением и это исчезнет.
Надеюсь, на вопрос ответил (спустя 1.5 года!).
 
VladpathologДата: Воскресенье, 2010-06-13, 4:50 PM | Сообщение # 8
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Репутация: 13
Статус: Offline
Quote
Поэтому все это я отставил, и пользуюсь полистиролом собственного приготовления (25% раствор полистирола в ксилоле + 6% дибутилфталата).

аналогично, все нормально видно. Обращал внимание еще и на то, что мутность бывает когда материал изначально недостаточно был фиксирован в формалине. вообще сложилось впечатление, что лучше в формалине передержать, чем недофиксировать.
 
MaximДата: Воскресенье, 2010-06-13, 5:15 PM | Сообщение # 9
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Quote (Vladpatholog)
утность бывает когда материал[/spoiler] изначально недостаточно был фиксирован в формалине

Согласен, но эта мутность уже несколько другого свойства. Как недостаток фиксации туманность, дымчатось или просто размытость обычно появляется в областях, богатых ядрами, особенно в ядрах эпителия, но он может также возникнуть в коллагене и других эозинофильных участках.
А Roman, похоже имел в виду равномерную общую мутность по всему препарату?
В приложении иллюстрация эффектов недофиксации формалином, взятая из The Innovator (рекламная листовка от Anatech №1 за 1998). Тут, правда, больше рекламы их продукта, однако, если ее отбросить и оставить описание проблемы (она у них описана во введении) все верно.
Прикрепления: 1139159.jpg(56Kb)
 
AnitraДата: Четверг, 2011-07-21, 0:08 AM | Сообщение # 10
Майор
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 31
Репутация: 2
Статус: Offline
Пользуемся Биомаунтом (Биооптика). Получается хорошо.
Обычно водную монтирующую среду требуют красные хромогены.
Но если не использовать двойное окрашивание (Даб+ФастРед) не вижу свысла их использовать.
Хотя на заметку - из водорастворимых есть новый "ВитроГель" - просто и со вкусом.
Так что наверное правда дело в фиксации


Червяк длинный, а жизнь короткая
 
Форум » ИММУНОГИСТОХИМИЯ » Технические вопросы » Заключение срезов
Страница 1 из 11
Поиск: