Спасибо большое. А пройдет такая методика, которую нашел в сети? Протокол иммуногистохимического исследования с МВО тканевых срезов
1. Срезы депарафинируют по стандартной схеме. 2. Обрабатывают 5 мин 3% Н^О; для блокирования эндогенной пероксидазы. 3. Промывают в дистиллированной воде 5 мин. 4. Препараты погружают до верхнего среза в деионизированную воду или цитратный буфер и помещают в микроволновую печь. 5. Устанавливают мощность 650—750 Вт (мы используем печь фирмы "DAEWOO" KOR-102M, 2,45 МГц, которая позволяет выбрать режим мощности 690 Вт). 6. Устанавливают время обработки — 2 раза по 5 мин с интервалом между циклами 1—2 мин, чтобы раствор перестал кипеть, и при необходимости добавляют раствор (считается, что нужный эффект получают, воздействуя микроволнами не менее 140 с от начала кипения). 7. После окончания обработки препараты остывают в растворе при комнатной температуре не менее 15—20 мин. 8. Стекла споласкивают в 2 порциях дистиллированной воды, затем 5 мин в буфере.
Далее реакция проводится в соответствии со стандартным протоколом. Если проводилась МВО, то пищеварительные энзимы не применяют. В нашей модификации мы часто используем большие разведения антител и пролонгируем время инкубации с ними — срезы с нанесенными первичными антителами находятся во влажной камере 20 мин при комнатной температуре, затем 15—18 ч при 4°С. Это увеличивает интенсивность реакции, особенно при использовании таких чувствительных к фиксации антител, как PCNA, MIB-1, р53, bcl-2 и некоторых других.
