Хромогены - Форум
 
Хромогены - Форум
[ Новые сообщения · Участники · Правила форума · Поиск · RSS ]
Вы вошли как Гость
Текущая дата: Понедельник, 2016-12-05, 7:24 AM

Страница 1 из 212»
Форум » ИММУНОГИСТОХИМИЯ » Технические вопросы » Хромогены
Хромогены
RomanДата: Четверг, 2009-09-03, 7:35 PM | Сообщение # 1
Просто профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 220
Репутация: 7
Статус: Offline
Уважаемые коллеги, подскажите на основании личного опыта. Может ли чрезмерная экспозиция с хромогеном (ДАБ-хромоген) привести к фоновому окрашиванию? Прочитал в одних рекомендациях, что нужно контролировать реакцию с хромогеном под микроскопом. У нас опыт ИГХ пока не очень велик, по стандартной иетодике держим в хромогене 10-15 минут.
Заранее спасибо за отклик.


От всего человека вам остается часть...
И. Бродский
 
PatologoanatomДата: Четверг, 2009-09-03, 8:04 PM | Сообщение # 2
___
Группа: Администраторы
Сообщений: 743
Репутация: 11
Статус: Offline
Контролируйте реакцию ДАБ под микроскопом.
Еще одной из причин фонового окрашивания может быть - неполные промывки в буфере перед применением ДАБ. Это может быть, если ИГХ специалист "спешит" закончить окрашивание за счет сокращения этих процедур. Но скорее причина в передержке: 5 минут достаточно, затем визуализация под микроскопом (желательно специальном).
 
RomanДата: Четверг, 2009-09-03, 8:34 PM | Сообщение # 3
Просто профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 220
Репутация: 7
Статус: Offline
Спасибо.
В чем "специальность" микроскопа? или просто отдельно стоящий микроскоп?


От всего человека вам остается часть...
И. Бродский
 
PatologoanatomДата: Четверг, 2009-09-03, 11:12 PM | Сообщение # 4
___
Группа: Администраторы
Сообщений: 743
Репутация: 11
Статус: Offline
"Отдельно стоящий микроскоп", поскольку DAB-канцероген, экологическая служба... blahblah
 
VladpathologДата: Пятница, 2009-09-04, 4:17 PM | Сообщение # 5
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Репутация: 13
Статус: Offline
еще попробуйте увеличить длительность инкубации с перекисью водорода. Фоновое окрашивание может быть связано с собственной активностью пероксидазы тканей. Какой системой визуализации пользуетесь?
 
PatologoanatomДата: Пятница, 2009-09-04, 7:45 PM | Сообщение # 6
___
Группа: Администраторы
Сообщений: 743
Репутация: 11
Статус: Offline
Собрал из старых сообщений тему: Способы устранения фонового окрашивания.
 
RomanДата: Вторник, 2009-09-08, 10:01 PM | Сообщение # 7
Просто профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 220
Репутация: 7
Статус: Offline
Благодарю за ответы. Другие способы устранения фона тоже рассматриваем. Хотелось уточнить способен ли хромоген давать фон. Пользуемся системой детекции LSAB.

Добавлено (2009-09-08, 10:01 Pm)
---------------------------------------------
Еще вопрос о ДАБ-хромогене: действительо ли нужно его разводить ex temporo или можно хранить какое то время в разведенном состоянии


От всего человека вам остается часть...
И. Бродский
 
PatologoanatomДата: Среда, 2009-09-09, 0:25 AM | Сообщение # 8
___
Группа: Администраторы
Сообщений: 743
Репутация: 11
Статус: Offline
Quote (Roman)
ex temporo

Да.
Если хранить долго, то дает преципитат, фоновое окрашивание на срезе и по стеклу вокруг среза.
 
DukerДата: Среда, 2010-10-06, 6:37 AM | Сообщение # 9
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 3
Репутация: 0
Статус: Offline
Уважаемые коллеги! С нуля в диком одиночестве пришлось организовывать эксперимент по иммуногистохимии. Кажется, я не особое внимание уделила хромогену, и мне поставили DAB не тетрахлорид, а просто 3,3'-диаминобензидин. Цвета он тёмно-коричневый, в воде не растворяется, в ДМСО - частично. На Вики написано, что для иммуногистохимии используется тетрахлорид-таки. Подскажите, пожалуйста! Перезаказывать?
 
MaximДата: Среда, 2010-10-06, 7:55 PM | Сообщение # 10
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
А почему Вы не начали с заказа системы детекции, в состав которй входит и ДАБ-субстрат и ДАБ-хромоген? Имея реагенты по отдельности и самостоятельно смешивая все компоненты для ИГХ без достаточно глубоких знаний в области органической, аналитической и иммунологической химии Вы никогда не получите хороший результат в ИГХ-окраске с первых попыток. Если что-то и получится - это везение. Этого мало. Нжно уметь управлять процессом. Мало просто купить реактивы. Обязательно нужна методическая поддержка. Не тратьте время на изобретение велосипеда - даже неделя стажировки у тех, кто красит ИГХ-препараты с хорошим результатом даст сумасшедший объем знаний. Там Вам и посоветуют, у кого что лучше покупать.
 
DukerДата: Четверг, 2010-10-07, 12:42 PM | Сообщение # 11
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 3
Репутация: 0
Статус: Offline
Да потому что работа без использования антител. Вопрос не в постановке работы. Я владею гистохимическими методиками.
Вопрос у меня лишь в отношении ДАБа. Остальное для меня ясно.
 
MaximДата: Четверг, 2010-10-07, 11:11 PM | Сообщение # 12
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Непонятно: эксперимент по иммуногистохимии, но без использования антител.
 
DukerДата: Пятница, 2010-10-08, 5:36 AM | Сообщение # 13
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 3
Репутация: 0
Статус: Offline
В основу выявления ложится не связывание антиген-антитело, а связывание рецептор-лиганд. Если вам будет удобнее, можно, конечно, назвать это просто гистохимией. Однако, мой вопрос так и остаётся без ответа...
 
VladpathologДата: Понедельник, 2012-08-13, 3:11 PM | Сообщение # 14
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Репутация: 13
Статус: Offline
Цитата: ..."3-Amino-9-Ethylcarbazole (AEC) - end product is soluble in organic solvents and must be used with an aqueous counterstain and mounting media."
1. Какие варианты водных докрашивающих растворов советуете?
2. У меня есть какой-то глицерогель даковский. Он пойдет для покрытия стекла?

Реактив буду использовать в двойном окрашивании.

С уважением.
 
MaximДата: Понедельник, 2012-08-13, 10:25 PM | Сообщение # 15
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Уважаемый Vladpatholog!
Для 3-амино-9-этилкарбазола, конечного продукта, растворимомго в органических растворителях должна использоваться "водная" докраска и водороастворимая среда для заключения.
1. Докрашивающий раствор - гематоксилин, не содержащий в своем составе этанола (например, гематоксилин Карацци, Майер, Лилли). Если будете использовать дифференцирующие растворы (они настоятельно рекомендуются к использованию для удаления избытка гематоксилина из всех других неспецифических струткур, кроме ядер при окрасках регресивными гематоксилинами), то пользуйтесь водным раствором соляной кислоты, например, 0.25%. Затем промывка в физрастворе или промывочном буфере для окончательного подсинивания ядер.
2. Как раз во вкладке к Glycergel (Dako) и рекомендуется его использовать как среду для заключения препаратов после окраски АЕС.
Другими словами, поступайте так, как будто перед Вами срез, который нужно окрасить на жир (суданом), но вместо окраски суданом все этапы ИГХ и затем АЕС. После промывки в воде все остальные этапы этих двух методов ничем не отлиичаются.
Тоже самое рекомендуется, если вместо АЕС будет использоваться хромоген щелочная фосфатаза.

В качестве познавательной литературы по двойным и тройным ИГХ-окраскам настоятельно рекомендую познакомиться с книгой норвежского иммуногистохимика Cris Van Der Loos "Immunoenzyme Multiple Staining Methods (2000)".
 
Форум » ИММУНОГИСТОХИМИЯ » Технические вопросы » Хромогены
Страница 1 из 212»
Поиск: