Вы вошли как Гость
Текущая дата: Среда, 2024-04-24, 8:48 PM
|
Первичные антитела
|
|
| Roman | Дата: Вторник, 2009-09-08, 10:06 PM | Сообщение # 1 |
|
Просто профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 220
Статус: Offline
| Уважаемые коллеги, поделитесь опытом.
Храните ли вы первичные антитела в разведенном состоянии, какое время разведенное первичное антитело сохраняет реактогенность?
Заранее спасибо.
От всего человека вам остается часть...
И. Бродский
|
| |
| |
| Patologoanatom | Дата: Среда, 2009-09-09, 0:11 AM | Сообщение # 2 |
 ___
Группа: Администраторы
Сообщений: 755
Статус: Offline
| Quote (Roman) Храните ли вы первичные антитела в разведенном состоянии
Практически только в день процедуры ИГХ окрашивания.
|
| |
| |
| Roman | Дата: Среда, 2009-09-09, 8:37 PM | Сообщение # 3 |
|
Просто профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 220
Статус: Offline
| Спасибо, на основании небогатого личного опыта сложилось то же мнение.
От всего человека вам остается часть...
И. Бродский
|
| |
| |
| niksavelov | Дата: Вторник, 2009-10-06, 2:55 PM | Сообщение # 4 |
|
Профессионал
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 41
Статус: Offline
| Quote (Roman) какое время разведенное первичное антитело сохраняет реактогенность?
Смотря чем и для какой цели разводить. Антитела в рабочем разведении, разведённые, например, на чистом 50мМ Трис-буфере или на PBS, лучше использовать в день разведения. Антитела в рабочем разведении, разведённые на 50мМ Трис-буфере с добавлением как минимум 150мМ NaCl, 0,5% BSA и Twin20 могут сохранять свою активность 2-3 дня (хотя лучше их не хранить, а в конце рабочего дня всё неиспользованное в помойку). Однако, существует техника предразведения антител. Она применяется когда используется чувствительный протокол иммунного окрашивания. Т.е. рабочее разведение, например, составляет 1:3000. Такое разведение сразу готовить неудобно. Проще сделать предразведение 1:10, а затем финальное разведение 1:300. При этом, если предварительное разведение делать на буфере приблизительно следующего состава: 50мМ Трис/НCl, 300мМ NaCl, 1-2% BSA, 0,09% азида натрия, да ещё Twin20 добавить, то храниться такие антитела при +4С могут до 5-6 мес. Хотя, лучше обновлять предразведённые антитела каждые 2-3 мес.
Никита Савёлов
|
| |
| |
| Roman | Дата: Суббота, 2009-10-10, 6:20 PM | Сообщение # 5 |
|
Просто профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 220
Статус: Offline
| Спасибо за комментарии, но все таки, я понял, лучше готовить необходимое количество разведенных антител, а излишки, если вдруг таковые остались, в раковину.
От всего человека вам остается часть...
И. Бродский
|
| |
| |
| DOLORES | Дата: Пятница, 2009-10-23, 3:15 PM | Сообщение # 6 |
 Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 1
Статус: Offline
| Добрый день.
Не могу добиться работы CD79а (Novocastra? clon 11D10).
Поделитесь, у кого получается.
Меня интересует буфер, используемый для демаскировки, система визуализации. Может у кого-то есть секреты.
|
| |
| |
| Anitra | Дата: Четверг, 2011-07-21, 0:37 AM | Сообщение # 7 |
 Майор
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 31
Статус: Offline
| На нашем разбавителе написано что аж до 18 месяцев можно хранить! (но мы не пробовали).
Лучше правда нужное кол-во развести в эппендорфе и не переживать стухло али нет.
Червяк длинный, а жизнь короткая
|
| |
| |
| Январь | Дата: Четверг, 2011-11-10, 9:10 AM | Сообщение # 8 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 5
Статус: Offline
| Anitra, я думаю это самого разбавителя срок годности.
А антитела если разводите фирменным раствором для разведения антител с азидом - 14 дней в холодильнике 4 градуса.
У нас если постоянно что то идет, можно на 2-3 дня антитело развести , например, СD20, несколько дней науку ведем разведение 1:300 вот и можно оставить до завтра или послезавтра, только конечно наконечник убрать и плотно закрыть эппендорф.
|
| |
| |
| Anitra | Дата: Четверг, 2011-11-10, 9:36 PM | Сообщение # 9 |
|
Майор
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 31
Статус: Offline
| Январь, это стабильность разведенных антител.
Лично хранила 8 месяцев. Все работает 
Возможно 18 это слишком... Но я обязательно проверю!
Хранить так долго конечно не обязательно, но и мучиться каждый раз перед использованием готовить тоже.
В принципе, обычно по вашей схеме и работаем
Добавлено (2011-11-10, 9:36 PM)
---------------------------------------------
DOLORES,
Quote (DOLORES) Не могу добиться работы CD79а (Novocastra? clon 11D10).
Поделитесь, у кого получается.
Меня интересует буфер, используемый для демаскировки, система визуализации. Может у кого-то есть секреты.
http://www.nordiqc.org/Run-29-B9/Assessment/assessment-29-CD79a.htm
судя по всему самый неудачный клон.
Червяк длинный, а жизнь короткая
Сообщение отредактировал Anitra - Четверг, 2011-11-10, 9:37 PM |
| |
| |
|
|
