| Sevda | Дата: Суббота, 2010-02-27, 11:17 AM | Сообщение # 1 |
 Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 2
Статус: Offline
| Здравствуйте. Мы работаем с концентрированными АТ фирм Dako и Novocastra. Для разбавления используем Antibody diluent производителя Dako. В связи с задержкой поставки возникла проблема: нечем развести концентраты. Может кто-нибудь знает чем на время заменить Diluent в "домашних условиях" и как долго они могут храниться. Может ли в этом случае подойти вода для инъекций или фосфатный буфер? Из-за большого объема материала нет времени на эксперименты.
|
| |
| |
| Patologoanatom | Дата: Воскресенье, 2010-02-28, 0:46 AM | Сообщение # 2 |
 ___
Группа: Администраторы
Сообщений: 755
Статус: Offline
| Основные компоненты разбавителя антител: 0.01M PBS, 1%BSA, 0.5% Triton X-100.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Понедельник, 2010-03-01, 6:56 PM | Сообщение # 3 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Sevda!
Antibody diluent сделан на основе бычьего сывороточного альбумина и фосфатного буфера. В него добавлен Tween20 для предотвращения быстрого испрарения с поврехности стекла и среза и улучшения прониконовения буфера через мембраны клетки, а также азид натия в качестве консерванта (см. прилагаемую к нему инструкцию Dako).
Если при доставке и хранении соблюдать соответствующие температурные условия, а также вставлять в бутыль с реагентом только чистые наконечники дозатора, то его можно достаточно долго (даже годами) использовать без потери качества.
Если хочется сделать тоже самое самостоятельно:
Бычий сывороточный альбумин (лучше Sigma) - 1 мл
Фосфатный буфер с рН 7.0 + 0.05% Tween 20 - 99 мл
Натрия азид (хч) - 100 мг.
Хранить в холодильнике.
Лично я не думаю, что это дешевле и проще делать самому, нежели купить - не каждый лаборант возьмется такой состав приготовить и гарантировать его качество, особенно елси у Вас большой объем работы. И такие компоненты Вам наверняка прийдется заказать у того же самого поставщика ИГХ-реактивов.
Разбавитель подходит к антителам любого производителя.
|
| |
| |
| Sevda | Дата: Вторник, 2010-03-02, 5:59 PM | Сообщение # 4 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 2
Статус: Offline
| Большое спасибо за ответы. Из перечисленных компонентов у нас есть фосфатный буфер + Tween. Надеюсь, этим на время удастся заменить Antibody diluent. И как я понимаю, лучше готовить рабочие растворы концентратов только перед использованием из-за отсутствия консерванта.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2010-03-02, 6:24 PM | Сообщение # 5 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Sveda!
Перед тем, как использовать самодельный antibody diluent прочтите четвертое издание книги Dako по ИГХ-методам. Книгу можно загрузить с сайта Dako. Или отсюда: http://pri.dako.com/08002_25may06_ihc_guide_book.pdf
В главе 16 Background (на стр 128) сказано:
Добавка 1% BSA к разбавителю первичных антител - широко распространенная практика броьбы с фоновой окраской из-за гидрофобных взаимодействий. Для уменьшения фона они рекомендуют использовать нежирное молоко или казеин. Казеин выигрывает по сравнению со свинной или овечьей сывороткой. Здесь есть ссылки на статьи.
В этой книге вообще много полезных ответов на самые разные вопросы.
К сожалению, вся книга англоязычная. (И почему не сделают русскую версию?).
Я бы не рисковал отклоняться от стандартных прописей antibody diluent, а если можно было бы, попросил в долг у коллег.
Пятое издание ее же (я его не читал детально): http://pri.dako.com/08002_ihc_staining_methods_5ed.pdf
Надеюсь, это поможет.
Максим.
|
| |
| |
