Вы вошли как Гость
Текущая дата: Суббота, 2024-04-27, 2:17 AM
|
Неспецифическое связывание антител
|
|
| Patologoanatom | Дата: Пятница, 2007-10-05, 11:58 PM | Сообщение # 1 |
 ___
Группа: Администраторы
Сообщений: 755
Статус: Offline
| Уважаемый коллеги!
Ко мне поступил вопрос по поводу использования молока для блокирования неспецифического окрашивания в ИГХ.
Никто не задавался вопросом: для чего используют раствор обезжиренного сухого перед нанесением первичного антитела как в ИГХ, так и при постановке блот-гибридизации, и каков механизм действия?
|
| |
| |
| niksavelov | Дата: Вторник, 2007-12-18, 7:23 AM | Сообщение # 2 |
|
Профессионал
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 41
Статус: Offline
| Думаю, что способность снижать фоновае окрашивание у обезжиренного молока связана с большим содержанием казенина.
Никита Савёлов
|
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Вторник, 2009-07-07, 3:06 PM | Сообщение # 3 |
 Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| Коллеги, столкнулся со следующим явлением. Появилась необходимость исследования тканей кролика, и как-то я не сообразил, да провел все по обычному протоколу с обычными антителами. (у нас это мышиные анти-человеческие антитела и En-Vision+ система). Результат ниже привожу - сплошное окрашивание всеми антителами - сплошной фон.А снимки сделаны с различных срезов с различными антителами (CD4, CD8, CD20, Collagen4, CD34...там много еще каких было). Я так понял, что следовало применять антитела вроде мышиных анти-кроличьих что-ли? Но что такое окрасилось - местами даже что-то мембранное вроде. Я так думал если неправильный выбор антител - то вообще окраски быть не должно (при условии отсутствия перекрестной реакции). Какие мысли? Ну не работал я с животными  
|
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Вторник, 2009-07-07, 3:06 PM | Сообщение # 4 |
|
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| еще
|
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Вторник, 2009-07-07, 3:08 PM | Сообщение # 5 |
|
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| и вот еще
В обще все так получилось и что с ферментами и что с температурной проводкой и без нее.
|
| |
| |
| Patologoanatom | Дата: Среда, 2009-07-08, 0:26 AM | Сообщение # 6 |
|
___
Группа: Администраторы
Сообщений: 755
Статус: Offline
| Уважаемый Vladpatholog,
С материалом от животных всегда не просто. До того как переходить к этапам серийных разведений и блокирующих процедур, порекомендовал бы следующую стратегию:
прочитать на сопроводительном листе к антителу, работает ли оно с тканью кролика;
что пишут в статьях, какие наборы детекции используют;
провел бы поиск по каталогам Biocompare.
|
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Среда, 2009-07-08, 2:16 PM | Сообщение # 7 |
|
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| большинство антител dako-вских, и большинство без этой информации. Но вот за Biocompare. - отдельное спасибо. Все же попробую с сывороткой. Биологи говорят пероксидазная активность клеток кроликов в 20 раз выше чем у человека. Излазил гору сайтов - пришел к выводу, что большинство компаний сами четко не могут сказать, что от тех или иных клонов ожидать...многие просто пишут, что с другими видами животных не исследовалось... вот еще головная боль. По результатам опытов отчитаюсь...
|
| |
| |
| Roman | Дата: Среда, 2009-07-08, 8:06 PM | Сообщение # 8 |
|
Просто профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 220
Статус: Offline
| Я работал с крысами, покупали антитела фирмы Abcam, у них на сайте abcam.com указано с какими биологическими видами реагируют антитела, были Human, Rat кроликов не помню. Результат окраски вообще то не совсем удовлетворил. Добавлено (2009-07-08, 8:06 Pm)
---------------------------------------------
http://www.abcam.com/index.html?pageconfig=searchresults
в разделе Reacts with: Hu, Bb, Mk - человек, кто такие двое других затрудняюсь, но не кролики
От всего человека вам остается часть...
И. Бродский
|
| |
| |
| niksavelov | Дата: Вторник, 2009-10-06, 1:32 PM | Сообщение # 9 |
|
Профессионал
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 41
Статус: Offline
| Почти год не был на сайте. Попробую дать свой запоздалый комментарий. На сколько я понял из представленных изображений и списка антител, тут проводилось исследование лимфоидной ткани какого-то полого органа. Наиболее интенсивная реакция наблюдается в лимфоидных клетках, просветах сосудов, и межуточном веществе рыхлой соединительной ткани. Это типичные "места обитания" эндогенных иммуноглобулинов кролика. Фоновое окрашивание, вероятнее всего, связано с тем, что система детекции EnVision+ была взята универсальная (анти-кролик, анти-мышь). И анти-кроличьи вторые антитела из системы детекции выявили все места локализации эндогенных иммуноглобулинов кролика. Вывод один - мышиными анти-человечьими антителами можно исследовать экспрессию кроличьих антигенов (при наличии, конечно же, соответствующей перекрёстной реактивности), но применять при этом нужно исключительно анти-мышиную систему детекции.
Никита Савёлов
|
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Вторник, 2009-10-06, 2:38 PM | Сообщение # 10 |
|
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| Quote но применять при этом нужно исключительно анти-мышиную систему детекции
имеется такая попробую.
|
| |
| |
| Anitra | Дата: Вторник, 2011-07-19, 11:05 PM | Сообщение # 11 |
 Майор
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 31
Статус: Offline
| внесу свой скромный вклад в эту тему 
советую вот этот сайт - http://www.ihc-biovitrum.ru/antibodies
там есть поиск по специфичности! (жалко что на кроликов всего 8 антител....)
Наверное потому что у этого производителя (Спринг Био) большинство антител и так кроличьи...
а так производители обычно не парятся и пишут реактивность-человек, "оверз нот тестед" 
Червяк длинный, а жизнь короткая
|
| |
| |
|
|
