Вы вошли как Гость
Текущая дата: Пятница, 2024-04-19, 5:34 PM
|
антитело фирмы Новокастра- CD 4
|
|
| vrach | Дата: Суббота, 2009-08-15, 8:35 PM | Сообщение # 1 |
 Рядовой
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 10
Статус: Offline
| Коллеги! Кто из вас пользуется антителом CD 4 фирмы Новокастра?
Обрабатываю срезы как написано в аннотации, а эффект не доставляет удовольствия.
Фон и реакция расплывчатая.
Поделитесь опытом!
|
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Воскресенье, 2009-08-16, 8:43 AM | Сообщение # 2 |
 Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| При использовании антитела CD4 у большинства производителей необходимо исключить из проводки этап подавления пероксидазной активности, т.е. проводить без перекиси водорода. В целом могу сказать, что антитело действительно "капризное", но дрессуре поддается, для начала отработайте на контроле - возьмите миндалину, там они точно будут. Также из практики обратили внимание на тот факт, что не смотря на рекомендации, фиксации в забуференном формалине в течение 24 часов оказывается недостаточным, потому небольшого размера фрагменты задерживаем дольше (2-3 суток), почему-то реакция получается намного четче, без мути и фона меньше. И еще - какой клон вы используете?
С уважением.
|
| |
| |
| vrach | Дата: Воскресенье, 2009-08-16, 12:28 PM | Сообщение # 3 |
|
Рядовой
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 10
Статус: Offline
| Использую СD 4 клон 4В12 ( NC). Спасибо за совет! Обязательно попробую, о результатах сообщу.
А с фиксацией проблема. Дело в том, что материал ко мне приходит на исследование из других учреждений уже в парафиновых блоках.
|
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Воскресенье, 2009-08-16, 12:43 PM | Сообщение # 4 |
|
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| Проблема с блоками есть и у меня, но она оказалась решаемой. Важно не перезаливать по возможности блоки, а работать с присланных (если качество позволяет). При перезаливке получаются мутные срезы, как при недостаточной депарафинизации. Клоном работаем тем же, все хорошо получается. Попробуйте сменить систему визуализации.
|
| |
| |
| vrach | Дата: Понедельник, 2009-08-17, 9:05 AM | Сообщение # 5 |
|
Рядовой
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 10
Статус: Offline
| Блоки перезаливаю только в исключительных случаях, когда присылаются уж совсем в "ужасном"состоянии.
А какой системой визуализации пользуетесь вы на CD 4?
|
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Понедельник, 2009-08-17, 3:17 PM | Сообщение # 6 |
|
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| EnVisionPlus Dako
|
| |
| |
| vrach | Дата: Четверг, 2009-08-20, 11:08 AM | Сообщение # 7 |
|
Рядовой
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 10
Статус: Offline
| В настоящее время пользуюсь той же системой визуализации.
|
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Четверг, 2009-08-20, 3:31 PM | Сообщение # 8 |
|
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| Может есть возможность загрузить фото? И вообще как успехи?
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Пятница, 2010-10-15, 4:44 PM | Сообщение # 9 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Quote (Vladpatholog) Важно не перезаливать по возможности блоки, а работать с присланных (если качество позволяет). При перезаливке получаются мутные срезы, как при недостаточной депарафинизации. Клоном работаем тем же, все хорошо получается
Уважаемый vladpatholog!
Я, конечно, поздно увидел этот комментарий. Но совсем не могу понять, как перезаливка блока может влиять на качество окраски?
|
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Суббота, 2010-10-16, 5:21 AM | Сообщение # 10 |
|
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| Если бы знал - сразу бы и написал, давно я оставил этот комментарий, теперь наверное с ним не соглашусь сам же. Но как помню практика показывала. что качество действительно становилось хуже после перезаливки. Сейчас этой проблемы нет. Вероятно дело было не в перезаливаниях, а возможно вопрос разных используемых парафиновых смесей.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Суббота, 2010-10-16, 9:23 AM | Сообщение # 11 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| По моему опыту муть в срезах происходит из трех источников:
1. Неадекватная фиксация. Но в этом случае мутными ядра будут и на Г-Э и при любой другой окраске. ИГХ вообще не должна получиться.
2. Недостаточное депарафинирование - Г-Э после обратной перепроводоки по реактивам в окраске до гематоксилина и потом опять вперед исправит положение. ИГХ-реакция не пойдет, поскольку эпитопы останутся "спрятанными" в тонком слое парафина. Если снова все вернуть назад, провести депарафинирование и снова демаскировку - не уверен, что срезы не облезут после повторной демаскировки.
3. Недостаточное обезвоживание. Снова возврат в обевоживающие смеси и потом ксилол исправляет положение как в Г-Э, так и в ИГХ, если нет других нарушений.
|
| |
| |
|
|
