Что там за проблема с Циль-Нильсеном? - Форум
 
Что там за проблема с Циль-Нильсеном? - Форум
[ Новые сообщения · Участники · Правила форума · Поиск · RSS ]
Вы вошли как Гость
Текущая дата: Пятница, 2016-12-09, 6:48 AM

Страница 1 из 11
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Что там за проблема с Циль-Нильсеном? (Туберкулез)
Что там за проблема с Циль-Нильсеном?
VladpathologДата: Среда, 2012-11-14, 3:17 PM | Сообщение # 1
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Репутация: 13
Статус: Offline
Ну никак не могу выкрасит эти бактерии!!!!!!!!!!!!!!
maxim! Дай протокол для ТУПЫХ - чего как и после чего "капать"!
ПОЖАЛУЙСТА wink
У меня есть БЛИКовский реактив и итальянский какой-то - ну ничего не красит!!!!!!!!!!!!! устал уже экспериментировать!
 
MaximДата: Среда, 2012-11-14, 5:03 PM | Сообщение # 2
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Уважаемый Vladpatholog!
В бликовском наборе Циль-Нильсен последовательность соответствует классике. У них инструкция прилагается к набору. Если она потерялась:

1. Депарафинировать препараты и довести их до дистиллированной воды способом, принятым в лаборатории.
2. Основной фуксин (реактив 1) накапать на срезы и держать от 10 минут и более. (Я обычно оставляю их в таком состоянии примерно на полчаса, а в это время занимаюсь другими окрасками. Красил и 10 минут - вполне прилично получается.)
3. Промыть в дистиллированной воде 1 минута или дольше.
4. Дифференцировать реактивом 2 до обесцвечивания среза. Обычно хватает 10-30 сек.
5. Промыть в дистиллированной воде несколько минут.
6. Метиленовый синий (реактив 3) 30 сек.
7. Промыть в дистиллированной воде несколько секунд. Проверить окраску под микроскопом (малое увеличение). Если метиленового синего в срезах много, промыть в дистиллированной воде с добавлением 2-3 капель реактива 4. Окунать срезы 5-10 раз, пока не начнут отходить синие облачка окраски, затем промыть в порции чистой воды несколько секунд.
8. Обезводить, просветлить, заключить.

Раньше пробовал разные наборы, включая итальянский Биооптика. Мне непонятно, зачем у них в наборе перед окарской оновным фуксином идет обработка периодатом калия. До оригинального текста и объяснения пока не дошел. Цитируемая в нем статья не проливает свет на преимущества периодата для этого метода, в ней речь идет о каких-то спектроскопических заморочках. Однако бактерии окрашивались. Докраска у них обычным гематоксилином.
Я сейчас перешел на окраску бликовским набором. Все здорово получается.
Общее в этих двух наборах - наличие основного фуксина, которые можно использовать без нагревания.
У Бликов еще и фенола нет в фуксине. Это другое большое преимущество, которое лично я высоко ценю (у меня навзячивая идея работать в здоровом окружении и я избавляюсь от гадостей насколько это возможно без ущерба для качества конечноого препарата).
Тип докраски не принципиален. В классическом методе Циля и Нильсена использован метиленовый синий.

Мы у себя до сих пор не прекращаем дискуссий, глядя в гранулематозные препараты с классической "туберкулезной" морфологией, туберкулез ли это, в тех случаях, когда не находим кислотоустойчивых бактерий. Виной тому много методов, которые мы использовали. Чтобы аргументировать 100% гарантию качества используемой окраски я подобрал контрольные препараты с кислотоустойчивыми бактериями. Для этого не прошел мимо пары-тройки десятоков аутопсийных случаях. И когда бактерии окрасились, все блоки изъял для приготовления контрольных препаратов. И ВСЕГДА запускаю параллельно контрольное стекло. После этого никакие аргументы патологов на меня не действуют.
Второй вариант контроля, хоть и суррогатного - кожа с волосом. Кератин окрашивается в ярко малиновый цвет. Но бактерии все же убедительнее.
Из всех случаев, в которых предполагается наличие бактерий, у нас положительными окразываются от 2 до 5%. Поэтому и дискуссии идут. Но результаты положительных контролей неумолимы. Я устал биться с патологами, поэтому использую такой щит.

Поэтому мой совет: найдите блоки с однажды окрашенными бактериями, делайте с них контрольные препараты, и обязательно окрашивайте контрольное стекло.
Прислать Вам пару блоков?
 
VladpathologДата: Среда, 2012-11-14, 6:00 PM | Сообщение # 3
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Репутация: 13
Статус: Offline
Что же такое - ну никак нем могут мои лаборанты получить реакция - по 3 туб. вскрытия каждый день -нужно видно жёстко вс в подряд покрасить.
Правильно ли я понял - отсутствие реакции - не зачит отсутствие туберкулеза. Присутствие - значит туберкулез? или не все так однозначно?
Про блоки:
1. ШЛИ!!!!!!!!!!!!! за счет получателя. Красноярск. Хоржевский Владимир Алексеевич. ул. Молокова 64-78. тел. +7-913-564-32-66 (сли не сработает - значит у нас рука из "не от туда" .растут)
2. Передашь их на лимфоруме в декабре (у меня там доклад будет). К стати доклад будет касаться случая, когда пациенту выставили туберкулез, а я его снял и поставил лимфому Ходжкина.
в общем они мне нужны по той причине, что у тебя там реакция есть, а у меня в бюро, которое обслуживает два краевых противотуберкулезных стационара этой реакции гикогда не ставилось по человечески.
Вообще хорошо бы на лимфоруме повстречаться. есть еще проблема по азур-2-эозину. Вернее по реактивам для него. их просто нет.
 
MaximДата: Среда, 2012-11-14, 8:26 PM | Сообщение # 4
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Да, именно привязка диагноза туберкулеза к наличию бацилл и есть основная трудность. Это не взаимодополняющие вещи.
Туберкулезные бациллы мне удавалось видеть либо в случае запущенных казеозных некрозов (в самом некрозе), причем в любом органе, включая почечные клубочки и мягкие мозговые оболочки. Либо в лейкоцитарном инфильтрате в нагноениях в лимфоузлах, кишечнике и чаще в случаях иммунодефицита. Там внутри лейкоцитов бывает масса бацилл. Вероятнее всего это Micobacterium avium complex или что-то такое. О видах мы можем только догадываться, типировать - не наш профиль.
Вероятность нахождения бацилл в аутопсийном материале особенно велика в случаях клинически подтвержденных ВК+ и у нелеченных.
Блоки пришлю.
На лимфорум скорее всего не поеду, там важнее быть тем, кто практически работает с лимфомами. Время технологичеких докладов уже в прошлом.
 
VladpathologДата: Понедельник, 2013-11-18, 7:47 AM | Сообщение # 5
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Репутация: 13
Статус: Offline
Результаты окраски по Цилю-Нильсену гистологического среза.
 
MaximДата: Понедельник, 2013-11-18, 9:42 PM | Сообщение # 6
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Vladpatholog, спасибо за обратную связь. Бациллы хорошо видно даже на не на самом большом увеличении.
Тепреь в Вашей лаборатории стало одной проблемой меньше. Поздравляю!
На снимке я увидел очень много крупных и относительно длинных кислотоустойчивых бацилл.
Вероятнее всего, имеет место иммунодефицит (не обязательно ВИЧ)? Я не думаю, что это именно Micobacterium tuberculosis. Cкорее, M. avuim, может быть, даже и complex (MAC)...
 
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Что там за проблема с Циль-Нильсеном? (Туберкулез)
Страница 1 из 11
Поиск: