Помогите!!!!пожалуйста - Форум
[ Новые сообщения · Участники · Правила форума · Поиск · RSS ]
Вы вошли как Гость
Текущая дата: Вторник, 2017-12-12, 11:01 PM

Страница 1 из 11
Форум » ИММУНОГИСТОХИМИЯ » Технические вопросы » Помогите!!!!пожалуйста
Помогите!!!!пожалуйста
CatДата: Понедельник, 2008-06-23, 4:30 PM | Сообщение # 1
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Репутация: 0
Статус: Offline
Пожалуйста скажите почему при оценке площади экспрессии мы не учитываем интенсивность окрашивания??
 
PatologoanatomДата: Понедельник, 2008-06-23, 6:27 PM | Сообщение # 2
___
Группа: Администраторы
Сообщений: 752
Репутация: 11
Статус: Offline
Уважаемая Cat,
В зависимости от ИГХ маркера и от типа исследования (диагностическое, научное) используются различные системы полуколичественной оценки.
В большинстве случаев должна использоваться система, позволяющая определить тип (мембранное, цитоплазматическое, ядерное), процент окрашивания и интенсивность.
Какие маркеры Вы планируете оценивать?
 
CatДата: Понедельник, 2008-06-23, 6:44 PM | Сообщение # 3
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Репутация: 0
Статус: Offline
Уважаемый Patologoanatom, Здравствуйте. Я студентка, проводила исследование экспрессии ростового фактора (PDGF) в ткани плаценты. Использовала непрямой метод окрашивания гистологических срезов (авидин-биотиновый метод). Выявление пероксидазы хрена проводила при помощи диаминобензидина. Далее работала в программке Морфология, для оценки экспрессии делила площадь окрашенного участка на общую площадь зрения, оценивая таким образом площадь экспрессии. получается, что интенсивность окрашивания я не учитывала. Не могли бы вы рассказать про различные системы полуколичественной оценки и немного больше о проценте окрашивания, можно ли не учитывать интенсивность и в каком случае?? не могли бы вы также объяснить про количественный и качественный анализ, в случае площади экспрессии это качественный??
СПАСИБО smile


Сообщение отредактировал Cat - Понедельник, 2008-06-23, 6:55 PM
 
PatologoanatomДата: Понедельник, 2008-06-23, 11:52 PM | Сообщение # 4
___
Группа: Администраторы
Сообщений: 752
Репутация: 11
Статус: Offline
Могу порекомендовать для начала сделать поиск литературы по тематике и системам оценки окрашивания.
Алгоритм прост: в Google по ключевым словам "Platelet-derived growth factor Immunohistochemistry" находите эту страничку.. Кликаете Images? и находите как минимум 2 статьи в журналах.Одна статья в Modern Pathology, где для подсчета интенсивность окрашивания не учитывается.
Другая Laboratory Investigation для полуколичественной оценки используются другие параметры: "Immunostaining was considered negative if stained tumor cells were less than 10%. In specimens considered positive, staining of the tumor was quantitated on a scale from 1 to 4 based on the percentage of positive tumor cells. The scale was structured as follows: 1+, 10–25% of cells positive; 2+, 25–50% of cells positive; 3+, 50–75% of cells positive; 4+, >75% of cells positive".
Выбираете подходящий вариант.
Обсуждаете с научным руководителем.
Продолжаете аналогичный поиск, добавив ключевое слово: "placenta".
В случае использования программы "Морфология" анализ уже считается количественным, а не полуколичественным. Рассужая о качестве нужно провести оценку качества положительного контроля.
Удачи!
 
newДата: Вторник, 2008-06-24, 0:26 AM | Сообщение # 5
Мастер цифровой микроскопии
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 27
Репутация: 4
Статус: Offline
Попробуйте программку Aperio Image Scope, можно скачать с сайта www.aperio.com в разделе support после регистрации.
Программа считает площадь и разделяет интенсивность на 3 уровня, кроме того считает параметр "позитивномть" отношение позитивных пикселей (можно перевести в микрометры) к негативным в выделенном участке полн зрения. Удачи

Добавлено (2008-06-24, 0:11 Am)
---------------------------------------------
P.S. за ссылку на программу спасибо Patologoanatom!!!!

Добавлено (2008-06-24, 0:26 Am)
---------------------------------------------
Ой позитивность отношение позитивных пикселей (можно перевести в микрометры) к общему количеству пикселей в выделенном участке полн зрения.

Прикрепления: 1184682.jpg(123Kb)
 
CatДата: Вторник, 2008-06-24, 12:11 PM | Сообщение # 6
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Репутация: 0
Статус: Offline
Спасибо огромное!!!!!!:))))))
Мне очень помогли..... я бы хотела еще узнать: я исследую заболевание - гестоз. и оцениваю площадь экспрессии на контроле (плацента без гестоза) и на плаценте с гестозом, мой научный руководитель говорит, что нам важно наличие или отсутствие белка,а не интенсивность,поэтому мы ее не учитываем.....но ведь интенсивность пропорциональна экспрессии??!!! просто я не очень хорошо понимаю: мы оценили экспрессию по площади экспрессии, но ведь окрашивание где-то сильнее, где-то слабее, где сильнее там больше экспрессия,мы не учитывали это и лишь по площади занимаемой коричневым цветом сделали вывод о большей экспрессии при гестозе, я бы хотела узнать это корректно??
 
newДата: Вторник, 2008-06-24, 10:52 PM | Сообщение # 7
Мастер цифровой микроскопии
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 27
Репутация: 4
Статус: Offline
Посчитайте отдельно площадь слабоинтенсивной реакции, умеренно- и сильно инттенсивной, и выведите интегральный параметр по интенсивности и площади, выше указанная программа это позволяет сделать, хотя мне кажется для Вашей задачи достаточно полуколичественной визуальной оценки.
 
CatДата: Среда, 2008-06-25, 2:21 PM | Сообщение # 8
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Репутация: 0
Статус: Offline
СПАСИБО)))))))))
 
niksavelovДата: Вторник, 2008-07-08, 5:48 PM | Сообщение # 9
Профессионал
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 41
Репутация: 3
Статус: Offline
Quote (Cat)
.....но ведь интенсивность пропорциональна экспрессии??!!!

Это так только в теории. На самом деле интенсивность окрашивания пропорциональна концентрации первых антител, температуре инкубации (температуре в комнате при ручном окрашивании - а она во многих лаборатория зависит от времени года), времени и температуре демаскировки, для ряда антигенов рН раствора для демаскировки, чувствительности используемой системы детекции, а так же, для многих антигенов, обратно пропорциональна содержанию ионов натрия в растворе для разведения антител и длительности фиксации образца ткани. Все эти факторы вкупе далеко не всегда позволяют соотнести интенсивность окрашивания с содержанием антигена в ткани.


Никита Савёлов
 
newДата: Четверг, 2008-07-10, 9:47 PM | Сообщение # 10
Мастер цифровой микроскопии
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 27
Репутация: 4
Статус: Offline
Трудно не согласиться с niksavelov, однако данная проблема преодолима с помощью контрольных срезов, так
например в наборе НercepTest есть набор контрольных микрорепаратов с различной степенью экспрессии her 2, на основании этих срезов калибруется протокол исследования для каждой индивидуальной лаборатории и приготавливаются свои контрольные срезы, которые должны исследоваться в месте с партией основного исследуемого материала. Аналогично можно приготовить контрольные срезы практически по любому маркеру, на основании каоторых также можно откалибровать анализатор изображений.
 
PatologoanatomДата: Четверг, 2008-07-10, 10:00 PM | Сообщение # 11
___
Группа: Администраторы
Сообщений: 752
Репутация: 11
Статус: Offline
Еще одна важная техническая вещь о которой уже сказал уважаемый niksavelov: фиксация материала. Если материал фиксирован правильно с правильной pH и оптимальным временем, то окраска должна быть равномерной. Ведь многие знакомы с картинкой когда наружные слои опухоли (периферия) дают более интенсивное окрашивание, чем центр, куда формалин не смог проникнуть. С другой стороны, перефиксированный материал тоже может дать ложно негативное окрашивание.
Опять возвращаемся к теме стандартизации и оптимизации...
 
Форум » ИММУНОГИСТОХИМИЯ » Технические вопросы » Помогите!!!!пожалуйста
Страница 1 из 11
Поиск:

Сайт управляется системой uCoz