Первичные антитела - Форум
 
Первичные антитела - Форум
[ Новые сообщения · Участники · Правила форума · Поиск · RSS ]
Вы вошли как Гость
Текущая дата: Пятница, 2016-12-09, 6:51 AM

Страница 1 из 11
Форум » ИММУНОГИСТОХИМИЯ » Технические вопросы » Первичные антитела
Первичные антитела
RomanДата: Вторник, 2009-09-08, 10:06 PM | Сообщение # 1
Просто профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 220
Репутация: 7
Статус: Offline
Уважаемые коллеги, поделитесь опытом.
Храните ли вы первичные антитела в разведенном состоянии, какое время разведенное первичное антитело сохраняет реактогенность?
Заранее спасибо.


От всего человека вам остается часть...
И. Бродский
 
PatologoanatomДата: Среда, 2009-09-09, 0:11 AM | Сообщение # 2
___
Группа: Администраторы
Сообщений: 743
Репутация: 11
Статус: Offline
Quote (Roman)
Храните ли вы первичные антитела в разведенном состоянии

Практически только в день процедуры ИГХ окрашивания.
 
RomanДата: Среда, 2009-09-09, 8:37 PM | Сообщение # 3
Просто профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 220
Репутация: 7
Статус: Offline
Спасибо, на основании небогатого личного опыта сложилось то же мнение.

От всего человека вам остается часть...
И. Бродский
 
niksavelovДата: Вторник, 2009-10-06, 2:55 PM | Сообщение # 4
Профессионал
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 41
Репутация: 3
Статус: Offline
Quote (Roman)
какое время разведенное первичное антитело сохраняет реактогенность?

Смотря чем и для какой цели разводить. Антитела в рабочем разведении, разведённые, например, на чистом 50мМ Трис-буфере или на PBS, лучше использовать в день разведения. Антитела в рабочем разведении, разведённые на 50мМ Трис-буфере с добавлением как минимум 150мМ NaCl, 0,5% BSA и Twin20 могут сохранять свою активность 2-3 дня (хотя лучше их не хранить, а в конце рабочего дня всё неиспользованное в помойку). Однако, существует техника предразведения антител. Она применяется когда используется чувствительный протокол иммунного окрашивания. Т.е. рабочее разведение, например, составляет 1:3000. Такое разведение сразу готовить неудобно. Проще сделать предразведение 1:10, а затем финальное разведение 1:300. При этом, если предварительное разведение делать на буфере приблизительно следующего состава: 50мМ Трис/НCl, 300мМ NaCl, 1-2% BSA, 0,09% азида натрия, да ещё Twin20 добавить, то храниться такие антитела при +4С могут до 5-6 мес. Хотя, лучше обновлять предразведённые антитела каждые 2-3 мес.


Никита Савёлов
 
RomanДата: Суббота, 2009-10-10, 6:20 PM | Сообщение # 5
Просто профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 220
Репутация: 7
Статус: Offline
Спасибо за комментарии, но все таки, я понял, лучше готовить необходимое количество разведенных антител, а излишки, если вдруг таковые остались, в раковину.

От всего человека вам остается часть...
И. Бродский
 
DOLORESДата: Пятница, 2009-10-23, 3:15 PM | Сообщение # 6
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 1
Репутация: 0
Статус: Offline
Добрый день.
Не могу добиться работы CD79а (Novocastra? clon 11D10).
Поделитесь, у кого получается.
Меня интересует буфер, используемый для демаскировки, система визуализации. Может у кого-то есть секреты.
 
AnitraДата: Четверг, 2011-07-21, 0:37 AM | Сообщение # 7
Майор
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 31
Репутация: 2
Статус: Offline
На нашем разбавителе написано что аж до 18 месяцев можно хранить! (но мы не пробовали).
Лучше правда нужное кол-во развести в эппендорфе и не переживать стухло али нет.


Червяк длинный, а жизнь короткая
 
ЯнварьДата: Четверг, 2011-11-10, 9:10 AM | Сообщение # 8
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 5
Репутация: 0
Статус: Offline
Anitra, я думаю это самого разбавителя срок годности.

А антитела если разводите фирменным раствором для разведения антител с азидом - 14 дней в холодильнике 4 градуса.
У нас если постоянно что то идет, можно на 2-3 дня антитело развести , например, СD20, несколько дней науку ведем разведение 1:300 вот и можно оставить до завтра или послезавтра, только конечно наконечник убрать и плотно закрыть эппендорф.
 
AnitraДата: Четверг, 2011-11-10, 9:36 PM | Сообщение # 9
Майор
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 31
Репутация: 2
Статус: Offline
Январь, это стабильность разведенных антител.
Лично хранила 8 месяцев. Все работает smile
Возможно 18 это слишком... Но я обязательно проверю!
Хранить так долго конечно не обязательно, но и мучиться каждый раз перед использованием готовить тоже.
В принципе, обычно по вашей схеме и работаем smile

Добавлено (2011-11-10, 9:36 PM)
---------------------------------------------
DOLORES,
Quote (DOLORES)
Не могу добиться работы CD79а (Novocastra? clon 11D10).
Поделитесь, у кого получается.
Меня интересует буфер, используемый для демаскировки, система визуализации. Может у кого-то есть секреты.

http://www.nordiqc.org/Run-29-B9/Assessment/assessment-29-CD79a.htm

судя по всему самый неудачный клон.


Червяк длинный, а жизнь короткая

Сообщение отредактировал Anitra - Четверг, 2011-11-10, 9:37 PM
 
Форум » ИММУНОГИСТОХИМИЯ » Технические вопросы » Первичные антитела
Страница 1 из 11
Поиск: