апоптоз - изучение методом ИГХ - Форум
 
апоптоз - изучение методом ИГХ - Форум
[ Новые сообщения · Участники · Правила форума · Поиск · RSS ]
Вы вошли как Гость
Текущая дата: Среда, 2016-12-07, 11:41 AM

Страница 1 из 11
Форум » ИММУНОГИСТОХИМИЯ » Теоретические вопросы » апоптоз - изучение методом ИГХ
апоптоз - изучение методом ИГХ
БеляшДата: Суббота, 2011-01-15, 8:37 PM | Сообщение # 1
Лейтенант
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 9
Репутация: 0
Статус: Offline
Уважаемые коллеги! Стоит задача: идентифицировать на срезах печени и почек клетки, вступившие в апоптоз. Какие маркеры вы бы посоветовали использовать? У меня в распоряжении есть p53, CD95, caspase-3. Какой-нибудь из них подойдет? Помогите:)
 
PatologoanatomДата: Воскресенье, 2011-01-16, 1:22 AM | Сообщение # 2
___
Группа: Администраторы
Сообщений: 743
Репутация: 11
Статус: Offline
Маркеры апоптоза:
ApopTag® TUNEL метод,
ИГХ (caspase-3, соотношение BAX/bcl-2 в совокупности с определением экспрессии p53).
 
БеляшДата: Суббота, 2011-01-22, 9:50 AM | Сообщение # 3
Лейтенант
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 9
Репутация: 0
Статус: Offline
Спасибо:) Получается, что просто подсчитать р53-позитивные клетки недостаточно?
 
lab_nskДата: Воскресенье, 2011-01-23, 8:54 AM | Сообщение # 4
Иммуногистохимик
Группа: Проверенные
Сообщений: 11
Репутация: 2
Статус: Offline
мы для изучения апоптоза, в том числе и в печени, почках, использовали среди нескольких и каспазу-3. Пошла замечательно.
Но плюс к этому взяли соотношение bcl-6/bcl-2, каспазу-9, TRAIL и FADD (CD95).
 
БеляшДата: Воскресенье, 2011-01-23, 12:20 PM | Сообщение # 5
Лейтенант
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 9
Репутация: 0
Статус: Offline
Quote (lab_nsk)
мы для изучения апоптоза, в том числе и в печени, почках, использовали среди нескольких и каспазу-3. Пошла замечательно.
Но плюс к этому взяли соотношение bcl-6/bcl-2, каспазу-9, TRAIL и FADD (CD95).

Круто! Мне бы хотелось обойтись малой кровью:) Исследовать апоптоз - это не основная задача в моей работе, поэтому такой роскоши позволить себе не могу: и антител столько не купить, и времени взять неоткуда.
правильно ли я понимаю вас, уважаемые lab_nsk и Patologoanatom, что каспаза-3 - это необходимо и, возможно с натяжкой, достаточно?
 
ЧаконаДата: Вторник, 2011-01-25, 0:19 AM | Сообщение # 6
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 105
Репутация: 5
Статус: Offline
Стоп!!! Без сомнений, АКТИВНОСТЬ каспазы 3 - маркер апоптоза, но ведь антитела, сколь я могу судить, видят и неактивный профермент!!! Так какой же это нафиг иммуногистохимический маркер?
bcl-6/bcl-2, каспазу-9, TRAIL и FADD (CD95) - то же самое. Наличие этих белков говорит, что данные клетки МОГУТ вступить в апоптоз, но вовсе не указывает на уровень апоптоза в данный момент времени.
Классикой для выявления апоптоза везде и всюду в мире служит TUNEL-метод, выявляющий деградацию хроматина эндонуклеазами.

Добавлено (2011-01-25, 0:11 Am)
---------------------------------------------

Quote (Беляш)
Получается, что просто подсчитать р53-позитивные клетки недостаточно?

Совершенно недостаточно! Есть ряд клеток, где, например, высокий р53 - это вообще норма. Кроме того, мутантный р53 в опухолевых клетках красится позитивно, но к индукции апоптоза неспособен.

Добавлено (2011-01-25, 0:13 Am)
---------------------------------------------

Quote (Patologoanatom)
соотношение BAX/bcl-2 в совокупности с определением экспрессии p53

Мне интересно, как это все технически сделать smile Дело в том, что это должно быть ведь в одних и тех же клетках - а это намек уже чуть ли не на конфокальную микроскопию с колокализацией маркеров с разными флюоресцентными метками.

Добавлено (2011-01-25, 0:19 Am)
---------------------------------------------
О, прошу прощения, насчет каспазы 3 погорячился - действительно, коммерческие антитела позволяют видеть только активную каспазу. Тогда - да, она может сама по себе быть маркером апоптоза.

 
БеляшДата: Пятница, 2011-04-01, 9:50 AM | Сообщение # 7
Лейтенант
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 9
Репутация: 0
Статус: Offline
Сапсибо всем большое, коллеги! да здравствует каспаза-3!

Добавлено (2011-04-01, 9:50 Am)
---------------------------------------------
Добрый день, коллеги! Нужна помощь, срочнооо! Хотим приобрести реагенты для TUNEL-метода, а лучше сразу kit для ИГХ на парафиновых срезах. Подскажите, где их купить?!

 
Форум » ИММУНОГИСТОХИМИЯ » Теоретические вопросы » апоптоз - изучение методом ИГХ
Страница 1 из 11
Поиск: