Вы вошли как Гость
Текущая дата: Суббота, 2024-04-27, 5:55 PM
|
Проводка и заливка
|
|
| RAlexandr | Дата: Среда, 2021-11-17, 10:29 AM | Сообщение # 631 |
|
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 25
Статус: Offline
| спасибо. через 2 дня все узнаем  Добавлено (2021-11-19, 10:20 AM)
---------------------------------------------
да материал стал лучше чем первая нарезка/покраска. но далеко не идеальный. и кусочки очень плотные (деревянные) плохо режутся.
|
| |
| |
| Karen | Дата: Вторник, 2021-12-07, 5:29 AM | Сообщение # 632 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 11
Статус: Offline
| Максим, здравствуйте, возможно Вы меня помните, использовал вашу методику для резки морских беспозвоночных с публикацией статей по ним.
Возможно сможете посоветовать: режу морских губок со скелетом состоящим из тонких спикул из карбоната кальция. Мне нужно на препаратах получить окраску ядер (без тонких деталей, просто чтоб визуализировать клетки) и, одновременно, сохранить спикулы. Все знакомые мне методики подразумевают на том или ином этапе использование кислых реактивов, спикулы растворяются. Например методика кислый фуксин-> фосфорномолибденовая к-та -> метиловый синий дает отличный для меня результат (не знаю как вставить картинку, посмотреть можно Fig.1C,D, в моей статье по ссылке: http://sanamyan.com/publications/sanamyan_et_al_2019-ernstia.pdf ), но полностью растворяются спикулы, на препарате от них видны только дырки.
Пробовал красить толуидиновым синим - красит, но окраска выходит (расплывается) при заключении в бальзам (который у меня на изопропаноле разведен и менять его на ксилол не хочу, т.к. дома работаю). Чтобы не выходила требуется ее закрепление в той же фосфорномолибденовой кислоте, которая тут же растворяет спикулы.
Гематоксилины, в состав которых входит железо, тоже, я так понимаю, все кислые и будут портить спикулы (правда не пробовал).
Может быть Вы знаете, есть ли способ покрасить ядра, в любой цвет, без кислых растворов в рецепте?
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2021-12-07, 8:13 PM | Сообщение # 633 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Карен, ничего особенного в голову не приходит, кроме эозина-метилового синего по Манну. Здесь нет кислот, все нейтральное.
Метод приложить?
Еще думаю, что Романовский - Гимза должен хорошо получиться. Но дифференцировку лучше делать без добавок капли уксусной кислоты. Просто несколько раз применить последовательность вода-спирт-вода.
Картинки видел - классные. Но тут уж выбирать надо - либо спикулы, либо ткань. Спикулы наверное будут классно видны на растровой микроскопии...
|
| |
| |
| Karen | Дата: Среда, 2021-12-08, 3:54 AM | Сообщение # 634 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 11
Статус: Offline
| Спасибо, попробую для начала эозин-метиловый синий, оба красителя есть в загашнике (все ж самому где-то таскать/покупать приходилось)
Цитата Maxim (  ) Спикулы наверное будут классно видны на растровой микроскопии...
Спикулы, когда их структуру надо показать, обычно делают на сканирующем электронном микроскопе, но мне это коллег просить надо, у самого нет возможности.
А вот показать структуру спикульного скелета (то есть как именно они в пространстве расположены - красиво это сделать сильно сложнее. А я как бы из старой школы, мне важно не просто показать, а показать красиво. Пока что делаю парафиновые срезы от 200 до 400 (!!!) микрон толщиной, но так себе результат - спикулы ломаются при резке и много обломков. Но что надо увидеть - видно. Буржуи на две категории делятся - большинство ляпают как попало и публикуют мутные фото, но есть группа немцев, заливают губку в эпоксидку, далее полируют блок до толщины 100-200 микрон (я совершенно не представляю как это можно сделать) и получаются красивые (относительно) срезы без обломков. Иногда даже покрасить ядра умудряются накапав краску на поверхность эпоксидного блока - блок толстый, но прокрашивается только самая поверхность, выглядит в итоге очень хорошо. Где такую эпоксидку купить, а даже если и куплю то как сполировывать до тонюсеньких пластин - не представляю. Так что пока парафин наше все.
Сообщение отредактировал Karen - Среда, 2021-12-08, 3:54 AM |
| |
| |
| Maxim | Дата: Среда, 2021-12-08, 12:09 PM | Сообщение # 635 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Что касается сохранения скелета и спикул, но уже без мягких тканей, есть два пути.
1. Дать справиться с мягкими тканями муравьям. Обычно так поступают с крупными костями животных. Я не уверен, что этот способ может подойти для губок.
2. Мацерировать мягкие ткани "спиртом в треть по Ранвье". Такой способ у Ромейса описан. Но тоже не сильно уверен, подойдет ли он.
Много всяких советов по работе с таким материалом есть в книге Ромейса 1953, а также у Gatenby and Beams (Bolles Lee) в Microtomist vade mecum 11th ed, 1950.
Заливка в пластики выходит за рамки обычной гистологической лаборатории и является методом ЭМ-лабораторий. Они широко используют аралдиты, эпоны, метилметакрилаты и что-то похожее.
|
| |
| |
| tshevhenko87 | Дата: Среда, 2021-12-08, 9:56 PM | Сообщение # 636 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 10
Статус: Offline
| Здраствуйте! Помогите снова, материал после проводки режется отлично срезы получаются тонкие-их переносим на стекла з белком и оставляем в термостате 37 на ночь и на следущий день красить. Когда опускаем в ксилол срезы начинают отваливаться(папиломы не отваливаются) очень сильно слетают соскобы, матка (фиброматозные узлы,шейки,яичники,трубы-слетают выборочно).
|
| |
| |
| Karen | Дата: Четверг, 2021-12-09, 10:28 AM | Сообщение # 637 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 11
Статус: Offline
| Я от белка отказался давным давно. Попробуйте такой "клей": развести 2,5 г желатина в 500 мл дистиллированной воды,нагревая раствор до 50°С при постоянном помешивании. После растворения желатина добавляют 0,25 г хромокалиевых квасцов. Хранить в холодильнике. Чтоб не портился я немного фенола добавляю (иначе протухает даже в холодильнике).
Макаю стекла в этот раствор, высушиваю и храню (сколько угодно) в коробке. Срезы с таких стекол не слезают. А с белком постоянно проблемы были.
Сообщение отредактировал Karen - Четверг, 2021-12-09, 10:29 AM |
| |
| |
| Maxim | Дата: Четверг, 2021-12-09, 5:32 PM | Сообщение # 638 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Цитата Karen ( ) Я от белка отказался давным давно. Попробуйте такой "клей": развести 2,5 г желатина в 500 мл дистиллированной воды,нагревая раствор до 50°С при постоянном помешивании. После растворения желатина добавляют 0,25 г хромокалиевых квасцов. Хранить в холодильнике. Чтоб не портился я немного фенола добавляю (иначе протухает даже в холодильнике).Макаю стекла в этот раствор, высушиваю и храню (сколько угодно) в коробке. Срезы с таких стекол не слезают. А с белком постоянно проблемы были. Добавлено (2021-12-09, 5:33 PM)
---------------------------------------------
Цитата tshevhenko87 ( ) Здраствуйте! Помогите снова, материал после проводки режется отлично срезы получаются тонкие-их переносим на стекла з белком и оставляем в термостате 37 на ночь и на следущий день красить. Когда опускаем в ксилол срезы начинают отваливаться(папиломы не отваливаются) очень сильно слетают соскобы, матка (фиброматозные узлы,шейки,яичники,трубы-слетают выборочно). |
| |
| |
| tshevhenko87 | Дата: Четверг, 2021-12-16, 4:57 PM | Сообщение # 639 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 10
Статус: Offline
| Большое спасибо! Приготовила Ваш "Клей" всё получилось, срезы держатся на стёклах. Ещё раз большое спасибо
|
| |
| |
| oopab | Дата: Вторник, 2022-01-25, 9:05 PM | Сообщение # 640 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 2
Статус: Offline
| Доброго времени суток.
Прошу совета.
Суть проблемы-не работает ИГХ. Только молочки. Внутренний контроль мозаично положительный.
Проводка ручная.
В кассетах. Толщина соблюдается строго.
Вырезка-фиксация 10% формалин до 9 утра в термостате 37 градусов.
Затем промывка 30 мин в проточной воде.
5 изопропилов по 1 часу при комнатной температуре, 5й-ночь
Затем 3 парафина по 1 часу 58 градусов.
Операционный материал весь идёт вместе.
Отдельно только биопсии.
Весь остальной материал проходит ИГХ без вопросов.
Что может быть?
Благодарю заранее)
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2022-01-25, 9:14 PM | Сообщение # 641 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Цитата oopab ( ) Что может быть? |
| |
| |
| oopab | Дата: Вторник, 2022-01-25, 10:28 PM | Сообщение # 642 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 2
Статус: Offline
| Максим!
Благодарю!
Я так и думала.
Больше ничего в голову не приходит, кроме первичной фиксации
|
| |
| |
| tshevhenko87 | Дата: Воскресенье, 2022-06-12, 5:33 PM | Сообщение # 643 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 10
Статус: Offline
| Здраствуйте! Подскажите пожалуйста готовим гематоксилин Майера-он в конце приготовления делается коричневый(до этого готовили всё было нормально)?в чем причина подскажите?
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Воскресенье, 2022-06-12, 9:01 PM | Сообщение # 644 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Цитата tshevhenko87 ( ) Подскажите пожалуйста готовим гематоксилин Майера-он в конце приготовления делается коричневый(до этого готовили всё было нормально)?в чем причина подскажите? |
| |
| |
| tshevhenko87 | Дата: Воскресенье, 2022-06-12, 9:29 PM | Сообщение # 645 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 10
Статус: Offline
| в 1л -дист.воды растворяем 1г. гематоксилина
-добавляем 0,2г.йодноватокислого натрия
-50г.калийных квасцов
-потом размешиваем до полного растворения и он делается фиолетовым
- потом 50г. хлоралгидрата
-1г. лимонной кислоты и он становится коричневым(как йод) .
|
| |
| |
|
|
