Вы вошли как Гость
Текущая дата: Суббота, 2024-05-04, 10:44 AM
|
Проводка и заливка
|
|
| Maxim | Дата: Пятница, 2020-11-20, 8:53 AM | Сообщение # 616 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Цитата tshevhenko87 (  ) У нас комната для покраски большая с 2-мя вытяжками её нам никто обогревать не захочет, но в этой комнате есть термостаты. Я про реактив Майера-что он был фиолетово-красный, а стал коричневым. Я думаю проблема, что этот реактив наверное нужно чаще менять, в нем как вроде не осталось гематоксилина(я прочитала Вы там писали, что через 100 стекол, а у нас прошло больше - и спросить не у кого).
Коричневый гематоксилин - безвозвратно умерший. Удалить, вымыть тщательно контейнер, залить свежий. Фильтровать ежедневно после работы, доливать до уровня свежим. Перед гематоксилином обязательно ставить дист воду, а не проточную, и ни в коем случае не погружать стекла из спирта прямо в краситель и не высушивать стекла перед красителем. В процессе эксплуатации обязательно закрывать крышкой и не оставлять на солнце - гематоксилин от этого избыточно окисляется. Коричневый цвет - переокисленный гематоксилин.
Мы фильтруем наш гематоксилин ежедневно и доливаем свежим, никогда не меняем, он получается практически вечным. Но мы не красим Маером.
|
| |
| |
| tshevhenko87 | Дата: Пятница, 2020-11-20, 2:56 PM | Сообщение # 617 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 10
Статус: Offline
| Спасибо в понедельник попробуем, мы ещё приготовили гематоксилин Караци (перенесла гематоксилин в другой кабинет, чтоб в тепло), а обычный гематоксилин у нас убрали, чтобы не использовать соляную кислоту. Мы ещё из спирта сразу погружали в краситель, а в не в дист. воду.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Пятница, 2020-11-20, 3:26 PM | Сообщение # 618 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Странно, а что плохо п регрессивном методе окраски? Он же гораздо больше деталей позволяет увидеть по сравнению с прогрессивным?
В чем проблема солянки?Добавлено (2020-11-20, 3:31 PM)
---------------------------------------------
Карацци нужно красить минут 15-20, и он не все красит. Хорош для ИГХ, если есть такое время на окраску. И очень быстро истощается и загаживается даже водой.
|
| |
| |
| tshevhenko87 | Дата: Пятница, 2020-11-20, 5:55 PM | Сообщение # 619 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 10
Статус: Offline
| У нас не хотят использовать солянку потому что прекурсор ^_^
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Пятница, 2020-11-20, 6:25 PM | Сообщение # 620 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Так это понятно. Но кто мешает ее купить в виде 15% водного раствора, который не является прекурсором и развести ее в 70% спирте или спирт взять чуть крепче, чтобы в итоге получился нужной концентрации раствор? Ну и раз уж вы покупаете Маера, то и готовый солянокислый спирт есть в продаже.
|
| |
| |
| tshevhenko87 | Дата: Пятница, 2020-11-20, 6:26 PM | Сообщение # 621 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 10
Статус: Offline
| А что не красит Карацци?
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Пятница, 2020-11-20, 6:34 PM | Сообщение # 622 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| В крайнем случае можно купить прекурсор конц соляную кислоту, 1л, и в этот же день его выдать в работу и списать целиком - цель: приготовление либо 15% водного раствора соляной кислоты, либо сразу приготовить 100л солянокислого спирта и на ближайшие годы забыть о проблеме. В журнале прекурсоров сделать две записи и закрыть журнал тут же. Проблема прекурсора исчерпана. Добавлено (2020-11-20, 6:35 PM)
---------------------------------------------
Цитата tshevhenko87 ( ) А что не красит Карацци? |
| |
| |
| ras | Дата: Среда, 2021-04-14, 9:16 AM | Сообщение # 623 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 1
Статус: Offline
| Добрый день!
В лаборатории использую протокол изопропил-масло в такой вариации:
1. Ткани фиксируются в 10% забуференном формалине, не менее 2 суток. Как правило, куда больше двух суток, так как лаборатория научно-исследовательская, и разбирать материал никто не спешит.
2. Промывка в водопроводной текучей воде - 30 минут.
3. Изопропанол 70% - 1 час;
4. Изопропанол 80% - 1 час;
5. Изопропанол 90% - 1 час;
6. Изопропанол 99,7% - до утра (обычно это около 15 часов);
7. Сосуд с изопропанолом ставим в термостат (54°) на 30 минут, для нагрева, чтобы температурный перепад впоследствии не был таким разительным.
8. Изопропанол:мин.масло (И-20) в пропорции 5:1, в термостате (54°) - 1,5 часа
9. Изопропанол:мин.масло (И-20) в пропорции 3:1, в термостате (54°) - 1,5 часа
10. Мин.масло (И-20) в термостате (54°) - до утра (так же, около 15 часов), если это выходные, то банку утром достают из термостата, и образцы в масле могут полежать 1-2 суток.
11. Парафин ( в гистопроцессорных банках с подогревом) - 30 минут
12. Парафин - 30 минут
13. Парафин - 35 минут.
14. Заливка материала.
Органы мышиные, селезёнка-печень-сердце-легкие-кусочки кожи без шерсти-кусочки ЖКТ-опухоли. Толщина 1-3 мм. Все органы от одной мыши в одной гистокассете.
Подскажите, пожалуйста:
1. Насколько адекватны выбранные временные промежутки "до утра" в изопропалноле, не многовато ли это? И по полчаса в парафинах, не маловато ли?
2. Критично ли отсутствие шага "масло-парафин"? Термостата для него подходящегго к сожалению нет.
3. Из-за нерегулярности работы, очень тяжело отследить вовремя смену реактивов. Если, например, проведено 10-15 кассет, а потом к батарее не прикасались месяц-два, можно ли надеяться что реактивами ещё можно пользоваться, или лучше всё же менять батарею?
Раньше проводка показывала изумительно красивые результаты, но в последнее время качество препаратов зааметно ухудшилось, очень много трещин, пытаюь найти корень проблемы 
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Среда, 2021-04-14, 7:33 PM | Сообщение # 624 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Вот что думаю о вопросах в предыдущем сообщении ras. Свои комментарии подсветил синим.
1. фиксация: достаточное время для подобной толщины объектов. Все органы от одной мыши в одной гистокассете. - не надо, 1 кассета 2-3 кусочка и достаточно, они не должны прилегать друг к другу
2. промывка - правильно
3. Изопропанол 70% - 1 час; (можно уменьшить до 30-40 мин)
4. Изопропанол 80% - 1 час; (можно уменьшить до 30-40 мин)
5. Изопропанол 90% - 1 час; (можно уменьшить до 30-40 мин)
6. Изопропанол 99,7% - до утра (обычно это около 15 часов); - нет, так сделать: уменьшить до 30-40 мин.
+ еще одну смену изопропанола чистого на 30-40 мин. До утра не оставлять!
7. Сосуд с изопропанолом ставим в термостат (54°) на 30 минут, для нагрева, чтобы температурный перепад впоследствии не был таким разительным. - нет, категорически не правильно!!!
8. Изопропанол:мин.масло (И-20) в пропорции 5:1, в термостате (54°) - 1,5 часа - да, но 50оС достаточно. Проверить, чтобы смесь была однородная и не расслаивалась.
9. Изопропанол:мин.масло (И-20) в пропорции 3:1, в термостате (54°) - 1,5 часа - Смесь составлена неправильно: 2 изопропанола/1 масло! да (по времени), но 50оС достаточно. Проверить, чтобы смесь была однородная и не расслаивалась.
10. Мин.масло (И-20) в термостате (54°) - до утра (так же, около 15 часов), если это выходные, то банку утром достают из термостата, и образцы в масле могут полежать 1-2 суток. - да, но можно в термостате не держать, а сразу выставить, если планируется задержка до утра или несколько дней.
11. Парафин ( в гистопроцессорных банках с подогревом) - 30 минут - 1 час 60оС
12. Парафин - 30 минут - 1 час 60оС
13. Парафин - 35 минут. - 1 час 60оС
+ еще один парафин 1 час при 60оС
14. Заливка материала.
Критично ли отсутствие шага "масло-парафин"? Термостата для него подходящего к сожалению нет. Этот шаг совершенно не нужен.
Смена реактивов. Если 1 банка - 900 мл, в нее помещается 40 кассет однократно - это один прогон, или 1/2 = 20 кассет. В этом случае смена будет идти через прогон.
Формалин - 1 смена, каждый раз свежий для каждой партии.
Первый изопропанол вылить, остальные сдвинуть на одну позицию вверх по списку, либо влево, если батарея расположена слева направо. Последний - свежий для каждого нового прогона (либо через прогон, если кассет около 20). Чтобы он не испарялся - плотно закрывать банки герметичными крышками.
Смесь 1,2, масло и 1 парафин вылить через 5 полных прогонов. СМеси и масло - сделать новые. Парафины переставить на одну позицию влево, последний - чистый.
Смеси также закрывать герметично крышками. Нежелательно оставлять нагретыми в термостате, если батарея не используется. Нагрева с утра будет достаточно, к моменту переноса кассет в них они достаточно прогреются в термостате. Масло и парафины крышками не накрывать - здесь желательно испарение остатков изопропанола из предыдущих позиций.
Будете следовать этим рекомендациям - будут отличные препараты. Естественно, если микротомист опытный и микротом классный, а также красильщик умеет правильно управлять окраской.
Было бы очень интересно узнать результат - отпишитесь.
|
| |
| |
| andreyporfiriev | Дата: Четверг, 2021-10-14, 3:53 PM | Сообщение # 625 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 1
Статус: Offline
| Добрый день! Хотел узнать, чем можно заменить анилиновое масло в азановой окраске по Гейденгайну, на соединительную ткань? Не могу найти этот компонент в продаже.
Заранее спасибо!
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Четверг, 2021-10-21, 7:24 PM | Сообщение # 626 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Цитата andreyporfiriev ( ) чем можно заменить анилиновое масло в азановой окраске по Гейденгайну, на соединительную ткань? |
| |
| |
| RAlexandr | Дата: Вторник, 2021-11-16, 1:56 PM | Сообщение # 627 |
|
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 25
Статус: Offline
| Здравствуйте коллеги. SOS. Что можно сделать. Лаборант при смене реактивов вместо изопропила последнего в немецкую дуньку налил воду!!! и вся проводка после череды спиртов попала в воду и потом в расплавленный парафин. соответственно была потом залита в блоки ... и не резалась и не клеилась. после чего уже все выяснилось. можно ли как-то восстановить материал для обычной гистологии и ИГХ. Сырого материала для перевырезкки в некоторых случаях не осталось.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2021-11-16, 3:57 PM | Сообщение # 628 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Цитата RAlexandr ( ) Что можно сделать. Лаборант при смене реактивов вместо изопропила последнего в немецкую дуньку налил воду!!! и вся проводка после череды спиртов попала в воду и потом в расплавленный парафин. соответственно была потом залита в блоки ... и не резалась и не клеилась. после чего уже все выяснилось. можно ли как-то восстановить материал для обычной гистологии и ИГХ. |
| |
| |
| RAlexandr | Дата: Вторник, 2021-11-16, 4:03 PM | Сообщение # 629 |
|
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 25
Статус: Offline
| какова вероятность что поможет? Добавлено (2021-11-16, 4:04 PM)
---------------------------------------------
спасибо за быстрый ответ. мы пока расплавили блоки и положили в теплый 38гр изопропил, с помешиванием и 3 сменами до завтра
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2021-11-16, 4:20 PM | Сообщение # 630 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Цитата RAlexandr ( ) какова вероятность что поможет?
мы пока расплавили блоки и положили в теплый 38гр изопропил, с помешиванием и 3 сменами до завтра
не надо в горячий изопропил - все сильно переуплотнится, резать будет невозможно.
сделайте как рекомендовано выше.
|
| |
| |
|
|
