Вы вошли как Гость
Текущая дата: Четверг, 2024-04-25, 11:56 AM
|
Проводка и заливка
|
|
| Maxim | Дата: Суббота, 2019-03-16, 7:44 AM | Сообщение # 586 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Получается, что многовато ткани находятся в изопрепе. Сократите до 30 минут в каждом, пусть останутся 4 станции с изопрепом, но жобавьте одну промежуточную станцию изопреп/парафин 1/1, 30 мин при 60оС. Парафин оставьте как есть.
Проверьте, правильно ли все в вырезке и фиксации. Толщина не более 3 мм, хороший ли забуференный формалин, не используется ли он повторно.
Также проверьте, хорош ли режущий край ножа (лучше возьмите одноразовое лезвие) и проверьте адекватность наклона ножа. Не должно получаться таких артефактов.
|
| |
| |
| Страна_Оз | Дата: Воскресенье, 2019-03-17, 3:10 PM | Сообщение # 587 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Maxim, спасибо огромное!
В следующие 1-2 недели смогу провести пробные препараты, тогда отчитаюсь, что получилось.
Формалин повторно не используется, лезвия одноразовые. С вырезкой, пожалуй, может быть самый скользкий момент, проконтролирую.
Проводку с минеральным маслом я пробовала, там получались похожие артефакты, но тогда у меня ещё было долгое время нахождения в изопрепе. Надо попробовать ещё раз, сократив нахождение в изопрепе по Вашим рекомендациям.
В общем, буду прорабатывать эти артефакты, откуда оно берётся.
Спасибо!!!)
|
| |
| |
| toksikology | Дата: Пятница, 2019-03-22, 12:54 PM | Сообщение # 588 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 2
Статус: Offline
| Когда искал информацию про сколько грамм эозина нужно для приготовления раствора наткнулся на информацию, что Эозин отнесен к канцерогенам 3 группы по МАИР 
https://en.wikipedia.org/wiki/List_of_IARC_Group_3_carcinogens
https://en.wikipedia.org/wiki/Eosin
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Суббота, 2019-03-23, 5:01 PM | Сообщение # 589 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Да практически все красители - канцерогены. Но, пока они в производстве и в порошке. В растворе они таковыми уже не являются, так как концентрации их редко превышают 1-2%. Это еще один аргумент в пользу того, что лучше пусть красители делают в производстве, а не в лаборатории.
Для защиты в лаборатории достаточно простых мер: перчатки, защитная маска, щиток, фартук. Вытяжной шкаф.
|
| |
| |
| olya2415 | Дата: Четверг, 2019-08-01, 5:00 PM | Сообщение # 590 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 1
Статус: Offline
| Добрый день, уважаемые коллеги. Прошу Вашей помощи, как последней надежды.Помогите пожалуйста, я недавно работаю в сфере ветеринарной гистологии, сама
запускаю мини отдел, раньше работала с гистологом, училась чисто патоморфологии, пробоподготовку знала, умела, но особо не вникала, у нас были замечательные проффесиональные лаборанты. Теперь пошла на самостоятельную практику, и уже год пытаюсь добиться адекватной проводки, в маленькой частной лаборатории. Ткань слетает при покраске, на
препаратах сожженная, слизистая трахеи горит, клубочки почек сморщенные. У нас Ляйка полуавтомат, HistoCorePearl. Заливка, микротом - тоже. Кожа, опухоли получаются нормально, но птица горит и слетает вся, крс - почки горят, печеньсносно. Раз на раз не приходиться. И каждый новый образец - как испытание. Выйдет/не выйдет.
Перепробовали 7 протоколов - безрезультатно. Мы с дистрибюторами считаем, что проблема в самом приборе.Протоколы, которые работают в других лабораториях (с нашими образцами), на
карусельках - у нас все равно сгорают. Думала может проблема в покраске. Но с
моих блоков не смогли сделать нормальные стекла в трех других
лабораториях, онкологических.
Сейчас пытаюсь поставить протокол для ручной проводки. Но тоже успехов
нет(((
Были протоколы на ксилоле, в спиртах 70, 80, 90, 95, 95, 95, 3 ксилола, при
45 градусах - сгорали и слетали. Затем убрали температуру к комнатной - и все равно сгорали. Был
протокол на чистом изопропаноле, 5 емкостей по часу, последний чистый - ночь,
обезжиривали - изопропанол-ксилол 1:1 - слетали. На хлороформе - 70, 80, 90 по
два часа, 95, 95, 95 - по часу, 3 хлороформа по 35 минут, комнатная
температура, 3 парафина - по часу - 56 градусов, - слетали. Меняли
производителей реактивов, температуру, концентрации, но все равно образцы
слетают, и под микроскопом ткань сожженная. Уже не знаю что делать. Формалин
Ляйковский 10%, фиксация 24 часа, обьем 1:15 где то.
Я ездила учиться и к гуманным онкологам, изучала их технологию, работала и на автоматах с ксилолом, и
карусельках с хлороформом, резала и на обычном ротационном и на водяном
темповском микротоме, красила разными красителями. Везде все получалось и получается
сейчас. А у себя год не могу добиться нормальных препаратов. Помогите,
пожалуйста, я в отчаянии...(((
Сообщение отредактировал olya2415 - Четверг, 2019-08-01, 5:01 PM |
| |
| |
| toksikology | Дата: Четверг, 2019-09-19, 3:20 PM | Сообщение # 591 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 2
Статус: Offline
| Здравствуйте, olya2415!
Раз никто не отвечает, задам уточняющие вопросы. Как можно подробнее опишите фиксацию, промывку,проводку, модель микротома. Странно что у других не получается. Раз все перепробовали, вы не пробовали метод с ИПС и мин.маслом, описанный Maxim здесь на форуме? Что вы подразумеваете под " сгорают и слетают"? Есть ли фотки этих сохранившихся препаратов? Если срезы отходят от стекла только, то лучше не мазать пальцем из банки клей, а капать маленькую каплю с помощью емкости из под тауфона или шприца. Еще советуют делать тонкие срезы. В таком случае сила натяжения препятствует отклеиванию.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Четверг, 2019-09-19, 7:59 PM | Сообщение # 592 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Здравствуйте, olya2415!
Начните не с прибора, а с формалина. Проблема именно в нем. Каким пользуетесь? Как идет фиксация?
|
| |
| |
| Страна_Оз | Дата: Пятница, 2019-10-25, 12:31 PM | Сообщение # 593 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Добрый день, Maxim!
Огромное спасибо за рекомендации по сокращению времени проводки в изопропаноле и добавление станции изопреп/парафин! Прежних артефактов действительно больше нет! Некоторые артефакты ещё есть, но об этом проконсультируюсь как-нибудь позже.
Сейчас у меня есть образцы мозга крысы, которые были проведены с промежуточной станцией изопреп/парафин, но время нахождения в изопрепе было дольше (не 4 станции по 30 минут, а 5 станций по 40 минут).
При заливке в мозге видны вот такие дыры, как показано стрелками на фото, по словам коллег при вырезке никаких дыр не было.
http://ihc.ucoz.ru/photo/mozg_krysy_artefakty/23-0-763
Раньше мозг крыс фиксировали не в формалине, а в 90% этаноле. Тоже были артефакты и проблемы, но не такие. Сейчас мозг был фиксирован в 10% забуференном формалине БиоВитрум, кусочки толщиной 3 мм.
Вопросы:
1) Это тоже последствия долгой проводки в изопрепе, или могут быть другие причины?
2) Понятно, что чудес не бывает, но это уже не подлежит никакой обратной проводке?
Спасибо огромное за ваши рекомендации!
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Суббота, 2019-10-26, 8:41 PM | Сообщение # 594 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Именно про эти дыры ничего сказать не могу - у меня нет большого опыта работы с мозгом грызунов.
Нужно смотреть в срез и тога будет понятно происхождение этих дефектов.
От обратной проводки они не исчезнут, раз уж появились.
Что они собой представляют микроскопически?
|
| |
| |
| danilsafronov92 | Дата: Пятница, 2020-01-31, 10:20 AM | Сообщение # 595 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Здравствуйте! Только начинаю постигать изготовление гисто препаратов. Читая литературу, сталкиваюсь с разными схемами проводки и заливки. Подскажите, пожалуйста, исходя из вашего опыта, на каком варианте проводки с изопропиловым спиртом и заливки парафином для ручного метода лучше остановиться.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Пятница, 2020-01-31, 8:44 PM | Сообщение # 596 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| danilsafronov92
А какова цель проводки? Объекты? Ежедневный объем?
|
| |
| |
| danilsafronov92 | Дата: Суббота, 2020-02-01, 7:24 PM | Сообщение # 597 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Maxim, объем небольшой, раз в 1-2 недели. Вообще планирую заниматься рыбами. Планирую гистологию жабр, кишечника, печени.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Суббота, 2020-02-01, 7:28 PM | Сообщение # 598 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| danilsafronov92, а в каких книгах рекомендуется этот метод для морских объектов?
Какие книги есть в вашем распоряжении?
|
| |
| |
| danilsafronov92 | Дата: Суббота, 2020-02-01, 9:02 PM | Сообщение # 599 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 4
Статус: Offline
| Maxim, в распоряжении книга Гистология для ихтиологов, автор Микодина Е.В. и несколько статей. Там, конечно, в основном используют не изопропиловый спирт, а этиловый.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Суббота, 2020-02-01, 9:18 PM | Сообщение # 600 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| С литературой понятно.
Для гистологического исследования не представляет сложностей печень, кишечник. Изопропанол-парафин для него подойдет. Но вот жабры - это трудный объект. Тут даже не уверен, что можно будет применить изопропанол-парафин. Надо пробовать.
Я же так понимаю, что работа будет проводиться как минимум на кафедре зоологии позвоночных и под руководством людей, понимающих в этом?
Для начала нужно научиться вырезать тонкие объекты, не толще 2-3 мм.
Фиксация: формалин 10% нейтральный забуференный, 24-72 часа. Лучше, если больше 48 часов.
Промывка в воде 30-60 минут.
Проводку можно попробовать такую:
1.Изопропанол 70%, 2 час
2. Изопропанол 90%, 2
час
3. Изопропанол абсолютный, 2 час
4. Изопропанол
абсолютный, 2 час
5. Изопропанол
абсолютный, 16 час (ночь или выходные)
6. Парафин 2 часа
7. Парафин 2 часа
8. Парафин 2 часа
Заливка.
По крайней мере, после этой пробы может стать понятным, что делать дальше.
Дайте знать о результатах. Если будет что-то не так, скорректируем.
|
| |
| |
|
|
