Проводка и заливка - Страница 14 - Форум
 
Проводка и заливка - Страница 14 - Форум
[ Новые сообщения · Участники · Правила форума · Поиск · RSS ]
Вы вошли как Гость
Текущая дата: Пятница, 2016-12-09, 6:49 AM

Страница 14 из 34«1212131415163334»
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Проводка и заливка (Детали разныя)
Проводка и заливка
MaximДата: Пятница, 2011-01-28, 10:04 PM | Сообщение # 196
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Уважаемая SOVA! Проткол и все детали написаны очень понятно. Только не увидел толщину кусочков на вырезке (не более 3 мм!, если жир - не более 2мм!). Еще не понятно, где перерыв на ночь? Или лаборанты работают в 2 смены?
Общее время проводки у вас 11ч. Из написанного я понял, что проводку вы делаете в марлевых узелках. Купите 1-2 упаковки кассет по 500шт (меньше не продают). Как с ними обращаться, есть в форуме (проводка и заливка, сообщение 46).
Вот что можно сделать по протоколу:
1. Помещать в марлю по 1 кусочку, завязывать неплотно. Несколько кусков слипаются между собой и реагенты внутрь проникают хуже.
2. Сократить промывку до 30 минут в проточной воде.
3. В одну чашку 1,8л помещать 60-65 узлов. Или в литровые банки по 35-40 узлов (кассет).
4. Проводку можно начать вести в АТ до этапа парафина, а потом руками. Или вообще все вести руками. Это не трудно.
5. Протокол сделать таким:
формалин 24 часа
промывка в воде 20-30 минут
1. Этанол 45 мин 8:30-9:15
2. Этанол 45 мин 9:15-10:00
3. Этанол 45 мин 10:00-10:45
4. Этанол 45 мин 10:45-11:30
5. Этанол 45 мин 11:30-12:15
6. Этанол-хлороформ (1:1) 1час 12:15-13:15
7. Хлороформ 1 час 13:15-14:15
8. Хлороформ 1 час 14:15-15:15
9. Хлороформ-парафин (1:1) 1 час (можно оставить до утра) термостат 37-40оС
10. Парафин 1 час 60оС 8:00-9:00 11.
Парафин 1 час 60оС 9:00-10:00 12.
Парафин 1 час 60оС 10:00-11:00 13.
Парафин 1 час 60оС 11:00-12:00
Общее время 11 часов 45 мин (не считая переыва на ночь).
Промежуточные этапы будут давать более мягкие переходы меджу реагентами, поэтому я их добавил. Какое-то время я тоже избегал их, однако, в последние лет 5 я заново оценил их необходиомсть и теперь рекомендую. По смене - каждая новая партия: последний спирт свежий, остальные влево. Спирт-хлороформ сменить через 3-4 партии, Парафин-хлорформ новый 1 раз в неделю. Последний парафин также, остальные парафины передвигаются влево. Это должно давать вполне удовлетворительный результат (если, конечно, хлороформ нормального качества).
Эндоскопии и прочая мелочь диматером до 1-2 мм.
Фиксация 24 часа, не меньше!
Промывка в воде 5-10 минут, пока не отмоется избыток эозина из фиксатора.
1. Этанол 10 мин
2. Этанол 10 минут
3. Этанол 10 минут
4. Этанол-хлороформ 10 мин
5. Хлороформ 30 минут
6. Парафин-хлороформ 1:1 20 мин при 37-40оС
7. Парафин 20 минут при 60оС
8. Парафин 20 минут при 60оС.
Общее время: 2 ч 10 мин. Этанол сменить через 40-45 кусочков. Остальные влево, последний свежий. Этанол-хлороформ, хлороформ, парафин-хлороформ и парафин сменить черерз 100-130 кусочков. Сменять, как выше написано. Если материал получается при резке слишком пересушенным, смочите обнаженную лицевую поверхность блока при резке теплой водой (марлей) 1-2 мин и пробуйте получить срезы.
Другой вариант - использование размягчающих растворов. Иногда помогает. Если есть возможность выбора нового оборудования, лучше возьмите вакуумный процессор, чем карусель.
Нам будет интересно знать, как пойдет работа по новой схеме. Держите нас в курсе. Поскорее добывайте изопропанол!


Сообщение отредактировал Maxim - Пятница, 2011-01-28, 10:08 PM
 
SOVAДата: Суббота, 2011-01-29, 6:20 PM | Сообщение # 197
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 81
Репутация: 5
Статус: Offline
Большущее спасибо за информацию и посвященое время уважаемый Maxim. Кассеты у нас есть , пришли в подарок вметсе с гистопроцессором. Материал сейчас идет в нем. Оборудование TermoSencific STP120. Сначала пыталась в кассеты запихать плаценты, но сами понимаете, вырезать их толщиной 2 мм крайне сложно, особенно когда свежий материал, а фиксированный так всеми слезами умоешься. Вот поэтому плаценты идут в мешочках. Весь остальной материал в кассетах.
С понедельника начнем работать по Вашей схеме. Большой материал в карусель, мелкий руками. Большая надежда на выравнивание ситуации. Нервы лаборантов, да и мои уже ни к черту. Стараюсь добыть для лаборатории лучший расходник, есть и ножи, и гистомикс, и реагентика вдоволь. Сейчас загорелась изопропанолом, вернее Isoprep от Biovitrum. Если нам его купят, тоже будет много переживаний, как внедрить такого зверя.
Но первоочередная задача уйти от дубового материала angry
 
MaximДата: Суббота, 2011-01-29, 6:30 PM | Сообщение # 198
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Я Вас поздравляю с новой каруселью и искренне завидую Вам.

Плаценты мы вырезаем свежими обычным кухоным ножом (так приспособились) и все прекрасно получается поместить в кассету. Делаем это уже 6 или 7 лет.
Фиксированный материал вырезаем при включенной вытяжке. Он приходит нам завязанный в марлю. Мы промываем его под проточной водой в ведре и тогда запах не такой жуткий.
Избавляйтесь от марли, сами потом увидите, как это утомительно на заливке пользоваться ножницами. Наши тоже вопили, а потом и забыли об этом.
Мой совет: при заказе реагентов смотрите на цены. Поищите обычный изопропанол, он вполне пригоден и стоит достаточно приемлемо. Неразумно тратить деньги, если есть более дешевые варианты.

Парафин меняйте 2 раза в неделю, так как у Вас только 2 смены в карусели.

 
SOVAДата: Суббота, 2011-01-29, 8:38 PM | Сообщение # 199
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 81
Репутация: 5
Статус: Offline
ой, простите, забыла сказать! Лаборанты конечно ночью не работают, в отличие от меня happy . Процессор загружается в 16-17.00, приезжает к утренней заливке. Затем работают на модуле для заливки Tissue Tec. Выклянчила им щаливочные формы, ан нет, опять ноют, говорят что они слишком неглубокие, залить не получается, поэтому заливают в ячейки для льда от нашего советского холодильника. Но еще в ходу бумажные коробочки от Меркулова, даже очень. Вечерком санитары да сторожа их складывают, мелкую моторику развивают.

Добавлено (2011-01-29, 8:33 PM)
---------------------------------------------
Дорогой Maxim! Конечно экономия дело благородное. Много лет наша служба находилась на помойке не только здравоохранения... Все бросовое нам, и все в последнюю очередь. Да еще с брезгливостью. Надоело конечно. Сейчас у нас большой плюс. Смена власти два года назад!!!. Пришло новое руководство- прислушиваются, прошу - покупают, за что большое человеческое спасибо. Отделение сделало большой прорыв в комплектации оборудованием и расходником. 24 часов не хватает, что бы все привести в нормальный ритм работы и освоить. Даже биопсийные мешочки приехали вместе с прокладками. Правда моим дамам мешочки не понравились. Оказывается к новому тоже нужно быть готовым. Изопропанол можно получить , только мои девочки его тритоном разводить не знают как, да и где то вещество брать тоже загадка?

Добавлено (2011-01-29, 8:38 PM)
---------------------------------------------
На счет промывки в ведре в проточной воде, спасибо за совет, хорошее дополнение моим коллегам. Они категорически отказывались это делать по своим непонятным причинам. внедрим заново!!!!

 
MaximДата: Суббота, 2011-01-29, 9:15 PM | Сообщение # 200
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Никакой загадки нет. TritonX100 это обычное неионное поверхностно-активное вещество. Купить можно в Сигме или в громадном большинстве перекупщиков. И если даже купите и станете добавлять его в изопропанол самостотоятельно и потом сравните с ценой изопрепа сильно удивитесь. 3-4 цены.
С моей точки зрения и обычный технический изопропанол дает вполне приемлемые результаты и без всяких других добавок. TritonХ100 облегчает проникновение изопропанола, но не растворяет жиры и не делает что-то еще особое, чего не делает обычный изопропанол. Конечено, мне не попались опубликованные сранительные данные по этим видам изопропанола. Но судя потому, что люди по всему миру работают и без добавок в ИПА уже десятки лет, то все в порядке.

Заливка в плоские формы предусматривает прикрепление сверху заливочного кольца или кассеты. Тогда кассеты будут одноразовыми, а крышка выбрасывается. Кассета зажимается в держателе микротома. Очень удобно, осбенно если зажим - защелка с эксцентриком.
Вашим санитарам и диспетчерам еще и спасибо надо сказать, что помогают. Нашим бы такое сказать...
Но, как говорится, нет ничего дешевле ручного труда в России. Купите лучше на сэкономленные средства от ИПА заливочные уголки из стали.
С промывкой в воде нужно быть аккуратнее. Описанный фокус годится для образцов, которые уже пробыли в фиксаторе хотя бы несколько часов. Имейте в виду, что они никак не могут считаться фиксированными. Промывка только для того, чтобы не травиться формалином. Нефиксированные образцы водой промывать нельзя - большинство тонких структур поверхностных клеток разрушаются из-за разницы в осмотическом давлении внутри клетки и извне. Этот аргумент часто патологи используют для объяснения лаборантам. Если требуется промыть не фиксированный образец, пользуйтесь обычным физраствором, но не долго.

 
SOVAДата: Воскресенье, 2011-01-30, 11:28 AM | Сообщение # 201
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 81
Репутация: 5
Статус: Offline
Здравствуйте Maxim. Поразила информация про промывку. У меня идут дибаты с гинекологами. Они присылают соскобы с попутной кровью, конечно материал плохо фиксирован, да еще фиксатор и сам соскоб не перемешиваются. Кровь сворачивается, получается ком. Сверху еще приветренный,т.к. все к нам едет в обычной банке стеклянной. Снабдила их инструкцией как готовить материал на наше исследование. Но сердце чует, что промывать начнут водой, а не формалином. Срочно в понедельник снаряжу на них свою старшую. На счет уголков идея хороша, только их тоже нужно будет класть на основу и заливать. Боюсь под кранчик заливочного модуля не пролезет.
 
MaximДата: Воскресенье, 2011-01-30, 12:30 PM | Сообщение # 202
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Уважаемая Sova!
Боюсь быть понятным неправильно.
Промывать в воде можно материал, который фиксирован. Если соскобы были фиксированы в объеме 20:1 (фиксатор:ткань), и прошло хотя бы часов 6-10, можно промыть водой. Фиксатор с соскобом никто перемешивать не станет. Это рыхлый материал и формалин хорошо проникает в него.
ГИНЕКОЛОГАМ: Соскоб брать в чистую сухую банку, никакая часть не должна подсыхать и иикакой промывки водой в этот момент. Соотношение фиксатор:ткань 20:1 (примерно). Больше пусть ничего не делают.
Я подозреваю, что материал приходит к вам на следующий день. Соскобы обычно мы не промываем. просто сливаем фиксатор и выбираем нужный материал для проводки (если скудный - целиком в кассету). И в фиксатор до утра (у нас термостат 37оС, поэтому там фиксация заканчивается через 18 часов, т.е. к 8 утра все готво. Больше нагревать нельзя). Утром промывка и проводка и т.д.
Даже если соскобы приходят через 2-3 дня, мы все равно их фиксируем вместе со всем материалом, до утра.

Уголки продаются в комплекте с поддончиком. На нем собирается 10 формочек из уголков. В центре их заливать неудобно. Или прийдется жертвовать кассетами, помещая их сверху. После резки на микротоме кассеты можно удалить и снова запустить в работу (но это худший и крайний вариант). Или просто взять стеклянный стаканчик и заливать в уголки рядом на столе (стакан ставить на нагревательную плату центра). Чтобы блоки хорошо отставали от уголков, смажьте уголки или гилцерином или спиртом с глицерином (не меньше 10-15% глицерина). В нашей лаборатории так делают более 25 лет.
Ни центров ни аппаратов для проводки и окраски у нас до сих пор нет. Пинцеты подогреваем на спиртовках (нам известно о существовани пинцетов с электроподогревом). Все вручную делаем, включая все реактивы для гистохимии.
Так что, приспосабливайтесь.

 
ЯнварьДата: Понедельник, 2011-01-31, 9:26 AM | Сообщение # 203
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 5
Репутация: 0
Статус: Offline
Здравствуйте, коллеги!
Не могли бы порекомендовать какой нибудь аппарат для гистологической проводки и, если возможно, расскажите на каких работаете Вы? Довольны ли?
хотелось бы знать как у вас идет обычная гистология, ИГХ и CIHS?
 
MaximДата: Понедельник, 2011-01-31, 7:58 PM | Сообщение # 204
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Уважаемая Январь!
Мы проводим все руками. На АТшки нервов не хватило, вынесли в подвал в еще рабочем состоянии, поскольку проводить по 20 кассет в каждом из трех сил нет. Ручками тянем в 6 параллельных батареях 40х6=240 кассет ежедневно. Это 72 литровых банки, включая парафиновые.
Когда будет возможность купим только вакуумный процессор и только Sakura VIP 6. Остальные аналоги уступают оному.
Обычная гистология идет хорошо, насколько позволяют микротомы МС-2 20- и 30-летней давности и такого же возраста ножи.
Фото срезов где-то в формуе присутствуют в приложениях.
ИГХ режем на "Техноме". Микроны он пропускает невзирая на цифорвое управление. Через 2-3 раза срезы все-таки получаются и иногда очень даже нормальные. Он для ИГХ используется. Не советую тратить на такой деньги.
В другой лаборатории с наших же блоков с полоборота сделали шикарные срезы на обычном заграничном ротационном микротоме.
 
ЯнварьДата: Среда, 2011-02-02, 8:01 AM | Сообщение # 205
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 5
Репутация: 0
Статус: Offline
Благодарю за ответ, Maxim!
Уважаемые коллеги, прошу "активней советовать"
 
SOVAДата: Среда, 2011-02-02, 7:46 PM | Сообщение # 206
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 81
Репутация: 5
Статус: Offline
Здравствуйте, Январь. Конечно лучше чем Maxim Вас никто не проинформирует о оборудовании. Мы же методом тыка сперва просили Лейку 1020. Но нам купили аналог: Microm STP120. Чашки 1,8л, пластик.Табло на английском и немецком. Ну ничего, привыкли. Фирма Оптек основной диллер оборудования. Приезжает сервис инженер, все хорошо объясняет и устанавливает. Год они вас ведут, звонят. интересуются как работает их зверь. Конечно мы были в некотором порясении. Не все получается. Я вот и на форум вышла, что бы распросить. Но как выясняется что вся проблема в простом -фиксации. А мы как Маши, все напихали и вперед. Первый материал просто сырой пришел. Плаценты в середине формалином пахли, все вывалилось. Потом стали уже оттягивать запуск. Она это позволяет, там до недели отроченный запуск есть. В пятницу уходим, в понедельник уже к 8.00 материал приехал. Карусель снабжена угольным фильтром на 400 запусков. Нуждается в дополнительном источнике бесперебойного питания (желательно на 5 часов), что бы материал не застрял во время кратковременного отключения электорэнергии. Есть в ней встроенные аккумуляторы., но их хватит на 20 минут работы ( вернее что бы только достать материал). Сколько кассет у вас идет ежедневно? Чашки в ней большие, поэтому мы пускаем ее через день. Реагентика полилась рекой (особенно спирт, стало не хватать). К карусели фирма прислала подарок - 2000 кассет. Приятно конечно было их получить. Сейчас бережем, ждем когда еще закупят.
 
вивьенДата: Четверг, 2011-02-03, 4:32 PM | Сообщение # 207
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 40
Репутация: 2
Статус: Offline
Добрый день, коллеги!
Благодарю уважаемого Максима за предоставленную методику проводки ИПА+масло. Попробовали длинный и короткие протоколы на разном материале, прекрасно работает. Лаборанты удовлетворены результатами, особенно резкой - мягко режется даже плотный, проблемный материал. Думаю этот метод приживется у нас в отделении без проблем и на долго.
На фото несколько препаратов.
Прикрепления: 9194589.jpg(142Kb) · 2674088.jpg(131Kb) · 7801476.jpg(229Kb) · 2594729.jpg(176Kb) · 9331541.jpg(150Kb)
 
вивьенДата: Четверг, 2011-02-03, 4:35 PM | Сообщение # 208
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 40
Репутация: 2
Статус: Offline
и еще несколько фото
Прикрепления: 5375888.jpg(143Kb) · 6850292.jpg(126Kb) · 4559713.jpg(185Kb) · 7880845.jpg(187Kb) · 2389628.jpg(148Kb)
 
MaximДата: Четверг, 2011-02-03, 8:04 PM | Сообщение # 209
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Уважаемая Вивьен!
Очень рад, что у Вас получилось самостоятельно наладить этот метод. Как видите, он не труднее тех, что описаны в наших книгах по микротехнике.
Фото мне понравились.
Есть небольшие комментарии.
1. На фото 9331541 и 7880845 имеется растрескивание среза. Такие штуки и у нас возникают время от времени. Особенно заметно бывает на коллоиде щитовидки и соскобах, богатых кровью. Методы борьбы прост. Срезать грубо лицевую поверхность блока, капнуть 2-3 капли теплой воды (можно из ванночки для срезов). Через 1 минуту попытаться сразу получить срезы. Первые 3-4 среза должны быть оптимальными (глубже вода не проникает или начинается избыточное наводнение).
2. Если капните в свой рабочий раствор эозина по 1 капле ледяной уксусной кислоты на каждые 100 мл раствора (не больше!), картинка будет выглядеть контастнее и живее (однако, цветовые оттенки - это личные предпочтения).

Есть вопросы: проводили в автомате или руками? Если руками, то скоро кожа рук лаборантов, занимающихся проводкой, будет мягкой и бархатной. Это побочный эффект масла.
Сравнивали вслепую пары стекол с обычным протоколом проводки? Угадали, где какой метод был применен?

Можно будет добавить Вашу лабораторию в список пользователей этого метода?

 
doctorbiДата: Пятница, 2011-02-04, 0:58 AM | Сообщение # 210
Рядовой
Группа: Проверенные
Сообщений: 6
Репутация: 0
Статус: Offline
Уважаемая SOVA! изопреп от биовитрум очень дорогой.гораздо дешевле будет если воспользуетесь советом Максима(ипа+масло) или в кранем случае сами изготовите ипа+Triton-X15 примерно 1000:1(это и есть "изопреп").Удачи вам.
 
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Проводка и заливка (Детали разныя)
Страница 14 из 34«1212131415163334»
Поиск: