Проводка и заливка - Страница 17 - Форум
 
Проводка и заливка - Страница 17 - Форум
[ Новые сообщения · Участники · Правила форума · Поиск · RSS ]
Вы вошли как Гость
Текущая дата: Пятница, 2016-12-09, 6:47 AM

Страница 17 из 34«1215161718193334»
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Проводка и заливка (Детали разныя)
Проводка и заливка
MaximДата: Четверг, 2011-04-07, 10:31 PM | Сообщение # 241
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Если добавите 1 каплю ледяной уксусной кислоты на каждые 100 мл рабочего раствора эозина яркость эозина заметно прибавится.
Я предпочитаю работать с водными растворами растворами эозина (вода дист до и после) тогда эозин не вымывается спиртами.
 
LEDDIAДата: Воскресенье, 2011-04-10, 9:07 PM | Сообщение # 242
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 1
Репутация: 0
Статус: Offline
Quote (Феникс)
Безусловно,нет предела поиску,и в том же Пирсе можно найти множество embedding-методов.В нашей лаборатории(да, думается, и во всех лабораториях страны) безотказно работает ксилольная проводка, с фиксацией в 4%формалине.С той лишь разницей, что у нас 100% этанол заменён изопропиловым спиртом - но это не отменяет наличия ксилола. Проводки ведутся в ваккуумном Tissue Processing фирмы Leica (http://www.leica-microsystems.com/products/histology-systems/tissue-processing).

Уважаемая, Феникс, мы тоже работаем на аппарате для патогистологической проводки LEICA по ксилольной проводке. Если Вам не трудно, поделитесь своей схемой проводки.


Сообщение отредактировал LEDDIA - Воскресенье, 2011-04-10, 9:07 PM
 
nastjaДата: Вторник, 2011-04-12, 12:46 PM | Сообщение # 243
Подполковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 64
Репутация: 6
Статус: Offline
Quote (Maxim)
Если добавите 1 каплю ледяной уксусной кислоты на каждые 100 мл рабочего раствора эозина яркость эозина заметно прибавится.

Надо попробовать. Спасибо.

 
SOVAДата: Четверг, 2011-06-09, 8:24 PM | Сообщение # 244
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 81
Репутация: 5
Статус: Offline
Уважаемы коллеги. С целью познания гистологической техники просвятите, что вы думаете на счет проводки ацетоном?
 
MaximДата: Четверг, 2011-06-09, 9:24 PM | Сообщение # 245
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Ацетон как дегидратант гораздо сильнее этанола и изопропанола. Очень быстрый и мощный.
Для тканей это не так удобно, поскольку содержание воды в тканях разное и приходилось делить ткани на типы. Безумно трудно уловить момент, когда из ткани удалилась несвязанная вода и можно начать просветление (если продолжать обезвоживание, то начнет удаляться связанная вода и кусочки превратятся в камни).
Другие минусы: токсичность для персонала (почки, печень, репродуктивная токсичность), очень высокая пожароопасность, прекурсор, сложность в хранении и транспортировке особенно летом.
Также ацентон бешено коагулирует многие антигены, поэтому возможны "большие благодарности" от лабораторий, выполняющих ИГХ на вашем материале после того, как они изведут антитела (ну и от пациентов, потративших нервы, средства и время и не получившие диагноз и соответствующее лечение).
Когда у нас был 96% этанол и ксилол, мы были недовольны качеством дегидратации и сначала ставили после спиртов по 2 смены ацетона. Но тогда ткани становились жесткими после ксилола. Мы заменили ксилол на уайт-спирит. Это сочетание работало очень хорошо, но зачастую результаты ИГХ были неудовлетворительными - получили массу ответов из ИГХ-лабораторий о невозможности приготовления препаратов. Мы были вынуждены отказаться от ацетона и уайт-спирита. Благо в этот момент стали экспериментировать с изопропанолом и минеральным маслом.
Взвесьте за и против и выбирайте, что лучше подойдет для вашей лаборатории, но не забывайте о пациентах, для которых мы работаем.
 
SOVAДата: Воскресенье, 2011-06-12, 7:48 AM | Сообщение # 246
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 81
Репутация: 5
Статус: Offline
Уважаемый Maxim, вы на на 100% правы, что вся наша работа и труды только для пациентов! Имено в этих целях я узнаю о методах, которые могли бы дать результат через 24 часа ( ну конечно вакуумный процессор мы не берем во внимание, т.к. такую штуку купят не совсем скоро, а может быть и вообще не купят). Плаценты, как тут важно дать результат на следующий день после поступления материала в лабораторию. Посмотрела презентацию из г.Чебокссары, там в год проходит до 7000 тыс плацент. Попробовала у себя:

Добавлено (2011-06-12, 7:48 Am)
---------------------------------------------
Как видите, к сожалению сильно разряжается межворсинчатое пространство. Лаборанты отмечают, что срез быстро расплывается в водяной бане. На этих образцах ацетон работал 1,5 часа( по 3 смены 30 мин), затем хлороформ по 20 ми 2 сметы и в парафин.
В Морозовской на вырезке нативного материала плацент увидела, что они срезы в кассетах промывают в проточной воде с целью предотвращения загрязенения реагентики. Стала у себя пробовать. Конечно реагенты посветлее. Жду поступление изопропанола и вазелинового масла. Как только торги пройдут и нам это поставят начну опробировать. А пока сама купила несколько бутылей с ацетоном и провожу плаценты.

Прикрепления: 0605185.jpg(197Kb) · 5883657.jpg(218Kb) · 3180787.jpg(195Kb)
 
SOVAДата: Воскресенье, 2011-06-12, 7:51 AM | Сообщение # 247
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 81
Репутация: 5
Статус: Offline
Еще несколько более удачных срезов. Такая проводка помогает значительно ускорит выход ответа , диагностировать хориоамниониты, фуникуллиты. Это так же работает на диагностике маточнои и внематочной беременности. Операционник конечно страшновато так вести.
Прикрепления: 1743767.jpg(245Kb)
 
SOVAДата: Воскресенье, 2011-06-12, 7:57 AM | Сообщение # 248
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 81
Репутация: 5
Статус: Offline
И :

Добавлено (2011-06-12, 7:57 Am)
---------------------------------------------
Лаборанты на твердостьл пожалоались пару раз, в основном говорят, что резежется хорошо. Недавно подрезали старый архив формалиновых плацент, девицы говорили, что жесткий. А льстить они мне не будут, т.к. любые новые перемены их тяготят. Вот и пытаюсь для своей лаборатории найти оптимальный метод проводки.

Прикрепления: 0615817.jpg(197Kb) · 5160377.jpg(197Kb)
 
MaximДата: Воскресенье, 2011-06-12, 8:40 AM | Сообщение # 249
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Уважаемая SOVA,
Нет таких методов, которые дают отличный результат через 24 часа, поскольку одна фиксация должна быть не менее 24 часов!
Картинки показывают плохую фиксацию. Все эти скукоживания ворсин произошли от того, что материал был недофиксирован.
Все, что недофиксировалось скоагулировалось ацетоном.
Самый наджный способ получить относительно быстро готовый препарат - организовать работу лаборатории в 2 или даже в 3 смены.
Можно сделать так:
1. Фиксация вырезанного материала 24 часа. Над доставкой материала в отделение нужно еще думать, поскольку роды следуют одни за другими круглосуточно. (Например, нам материал из городского роддома приносят утром, а почти сутки все плаценты складируют в холодильнике +4оС, завернутыми в целлофановые пакеты, без фиксации. В этом есть преимущество, поскольку аутолиз несколько замедляется на холоду из без доступа кислорода.).
Нарушение любого из правил фиксации ведет к гадким препаратам: 10% забуференный формалин; соотношение к ткани 20:1; 24 часа при комнатной температуре или 16 часов при 37оС; толщина кусоков для проводки 3 мм.
2. Промывка в проточной воде 15-20 минут для удаления избытка фиксатора.
3. Проводка (только для плацент и соскобов, поскольку этот материал не содержит жира и реагенты можно сменять реже, чем обычно):
Ацетон 4 смены х 30 мин (менять после каждой партии, первый вылить, остальные ротировать влево на одну позицию). Если изначально ставятся все ацетоны свежие - то 4 х 20 мин.
Уайт-спирит 3 смены по 1 часу (менять через каждые 3 партии: первый вылить, остальные влево на одну позицию, последний свежий). В последней смене спокойно можно оставить материал до утра или на выходные не опасаясь уплотнения. (Уайт-спирит в несколько раз дешевле ксилола).
Парафин 4 х 1 час при 60оС (смена 1 раз в неделю при ежедневной проводке, первый вылить, остальные влево на одну позицию. последний свежий).
Таким образом, начиная промывку в 8:00 проводка будет закончена в 17:30.
Заливка. Средня скорость по данным 241 лаборатории со всего мира 1 минута - 1 блок. примерно 20 минут ему нужно для остывания в морозилке. Иначе внутри он не замерзнет и будет плохо резаться.
Микротомия: 2 минуты 1 блок. Это также данные обзора продуктивности, который помещен в каталоге файлов в виде статей "Стандарты продуктивности для гистологических лабораторий" и "Уровни для шата...".
Далее сушка стекол 30 мин вертикально при 60оС.
Окраска и заключение примерно 30-40 мин.
Если провести 40 кассет в одной банке (1 кусочек в кассете), то получится примерно 5 случаев провести за раз (если брать из каждой плаценты по 7 кусочков). Вся заливка займет 45 минут, охлаждение также минут 45 (последние блоки поместятся на лед, а первые ужу будут резаться). Резка 1 час 15 мин или меньше. Окраска 1.5 часа. То есть, примерно к 21:00 вы получите готовые препараты. Все описано, если с этой партией будет возиться один лаборант. При работе в потоке бригадой из 2-3 человек, все выглядит несколько быстрее.
Сможете ли Вы организовать так работу при нашем законодательстве и уровне зарплаты? Будете ли сами отвечать поздно вечером случаи? Нужно ли будет это лечащим врачам в первом часу ночи? Если да, то в нашей специальности есть возможности улучшения или чего-то нового.
За рубежом работа очень многих гистологических лабораторий орагнизована круглосуточно и полата почасовая (лаборатории в онсовном коммерческие и частные). И никто не считает зазорным работать по 4-6 часов в 2-3 разных местах. У них часто проводка заканчивается к 0:00 или к 2:00 часам ночи. Заливщики приходят на работу к этому времени. Заливают до 4 утра, режут до 6, затем красят и к 8 утра патолог наблюдает готовые стекла.
И еще, лаборанты в среднем за такой напряг получают по 25$/час или больше. Патолог раз в 4-5 больше.
Вышеописанной проводкой мы пользовались более 4 лет и всегда с хорошим результатом. Материал плацент практически не плдвергается ИГХ, если это не научное учреждение. Так что, при отсутсвии альтернативы можно работать и так. Кстати, у нас тоже ежегодно проходит порядка 6000 плацент.
 
SOVAДата: Воскресенье, 2011-06-12, 11:22 AM | Сообщение # 250
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 81
Репутация: 5
Статус: Offline
Уважаемый Maxim.Как ценны Ваши рекомендации. Я к сожалению сейчас осталась в некоторой затруднительной ситуации. Вышел из строя новый карсусельный процессор STP120, ждем замену панели. На 2 месяца я осталась с одним лаборантом, нагрузка 1500 номеров в месяц. Достала стару карусель АГТ--шку, в ее корзину влезает до 8 кассет. И я никак не могу определить нужное среденее время проводки, что бы не накапливать материал. Когда получаются долги, крайне мало интересно их разгребать. Формалин забуференный есть, получили по моей служебке с ОПТЕКА. А можно ли ауйт-спирит замеить хлороформом, т.к. у нас его нет, а последний еще эксплуатируется.
 
MaximДата: Воскресенье, 2011-06-12, 7:02 PM | Сообщение # 251
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Да, хлороформ подходит, но в нем нельзя оставлять ткани надолго. И нужно делать промежуточную смесь с парафином 1:1.
Мы извели у себя хлороформ по причине высокой нефро- и гепатоотоксичности, а также канцерогенности.
Уайт-спирит доступен в любом сторительном магазине в изобилии. Даже его магазинная цена на порядок ниже ксилола.
Он не является канцерогеном, хотя и содержит 10% ароматических углеводородов. Для трудных тканей, как матка, жир, фиброзные ткани он мягкий. Запах, конечно, на любителя, но можно найти и малопахнущие варианты.
У нас было 3 аппарата АТ-4. В корзинку можно впихнуть до 11 кассет (мы это делали). Но даже при двух последовательных корзинках он малопродуктивен. Мы от них отказались. Сначала не верили, что руками быстрее, а теперь привыкли. Гораздо быстрее все сделать руками, даже если человек один. Даже если вы параллельно поставите 2 или 3 батареи из литровых банок (это 80 или 120 кассет), время на перекладку каждого этапа будет не более 3 минут. Раз в полчаса - это муторно, не набегаешься к банкам. Но зато примерно к часу материал остается в последнем уайт-спирите и в это время можно делать работу без отрывов.
Перерыв на ночь в уайт-спирите очень удобен. И подготовка к пропитке парафином хорошая и ткани не становятся плотными.
Одному в любом случае будет очень трудно; и за рабочий день никогда нельзя все сделать, чтобы не было хвостов, ни патологу, ни лаборанту.
Даже можно поручить перекладку анализов санитарке (только в поле зрения лаборанта), если уж такой кадровый дефицит.
 
SOVAДата: Четверг, 2011-06-16, 7:23 PM | Сообщение # 252
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 81
Репутация: 5
Статус: Offline
Уважаемый Махim, подскажите. Нам поступили биопсийные мешочки. Несколько упаковок. Стоят мертво. Никак не эксплуатируются. В кассеты лаборанты кладут прокладки. Куда эти мешочки можено приспообить? Зашивать их проблемно, соскоб из них вытягивать сложно, да и пропитанные парафином они плохо разрезаются.
 
MaximДата: Четверг, 2011-06-16, 9:26 PM | Сообщение # 253
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Очень сложный вопрос.
Можно попробовать следующее:
1. В поиске аналогии биопсийным мешочкам я пробовал разные материалы. До мешочков дело не дошло. Я представляю себе, что они могут пригодиться только для проводки эндоскопий. Кусочек вместе с номером поместить в мешочек и в кассету. По идее потеряться ничего не должно. По длиннику разрез - и доступ почти ко всей площади обеспечен. В крайнем случае по двум краям разрез при заливке.
2. Если без кассет - мешочки нужно сложить сверху вдвое (или углы подогнуть) и скрепить скрепкой (степлером). Одна тонкость: в обычном степлере скрепки железные, т.е. ржавеют в водных растворах. В чайных пакетиках - нержавеющие скрепки. Если есть возможность запастись нержавеющими скрепками (я не знаю, подходят ли они в обычный степлер), то эти пакетики можно провести просто в банке. И после забыть об этих мешочках навсегда с чистой совестью.
3. Второй вариант запаковки - добыть аналог запаивающего целлофан аппарата (наподобие "Молнии" из советских времен). Он не много ест электричества, безумно прост в обращении и эффективен. Останется возня при заливке с разрезанием.
4. Приспособить мешочки для хранения влажного архива (если маленький запас).
5. Произвести бартер с коллегами, которые жить без этих мешочков не могут.
Больше не знаю, куда их можно деть.
Мне прокладки из хирургических халатов нравятся больше. Дешево и сердито. Ни степлировать, ни разрезать не нужно. Теряются иногда лишь совсем мелкие фрагменты, которые меньше 0.5 мм.
 
SOVAДата: Вторник, 2011-06-28, 5:18 PM | Сообщение # 254
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 81
Репутация: 5
Статус: Offline
Maxim, добрый вечер.
Подскажите, как у Вас проводятся соскобы? Я полезла к своим девчатам и отметила, что соскобы завернутые в марлю проводятся не очень тщательно. Через поры нашей современной марли вылетает материал : то крупинки крови, а то и ткань (Я конечно так полагаю). еще вижу остатки материала на марле после заливки. В кассеты говорят уложить соскоб нереально, ососбенно после выкидышей или гиперплазии эндометрия, особенно тогда, когда фиксируется к ткани еще и кровь. Сейчас через мелкое сито пытаюсь формалином 10% промывать соскобы, беру это на себя. Ну и конечно переживаю, как мне все наладить в мое отсутствие?

Добавлено (2011-06-28, 5:18 PM)
---------------------------------------------
Большущее спасибо за совет по мешочкам!!!!!! Но к сожалению они в кассету не вползают никак. Степлер не всегда их пробивает, на проблемно разрезать, когда он напрочь пропитан парафином. Вот и стоят они у нас мертвым грузом. А мне конечно это краейне не нравится. Я воспользуюсь Вашей подсказкой обмеять их на что нибудь, но кому это добро нужно????? Я не видела нигде это чудо технической мысли,и не слышала, везде илди кассеты, или марля.

 
MaximДата: Вторник, 2011-06-28, 11:28 PM | Сообщение # 255
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 478
Репутация: 25
Статус: Offline
Здравствуйте, SOVA!
Мы проводим соскобы абсолютно также, как и весь материал. Просто помещаем в кассету. Если большой - несколько кассет и несколько номеров. Один номер для одной кассеты. Ничего никуда не завровачиваем. Все влазит нормально. Грязь и мелочь из соскобов выходят через щелки. Если сосокоб скудный - пользуемся прокладкой.Прокладка свернута вдвое, и на заливке легко раскрывается, пока парафин не застыл.
Марлю ни в коем случае не используйте. Только возни прибавит, да и риск потери большой.
Если мешочки закрепить степлером, то проводить можно и без кассет. Ничего не потеряется. Опять же, они не дожны быть набитыми
Если не влазит материал в кассету - плохо. Значит толщина объекта больше, а все, что толще 3 мм обычно не проводится должным образом (хотя толщина цуга эндометрия обычно не больше 3 мм). Как толстые цуги ориентировать в кассете?

Работу наладить в свое отсутствие только одним способом. Взять кого-нибудь смышленного и держать за руки, няньчить, показывать нюансы и сопровождать все объяснениями. Умный человек сделает вывод и возьмет на вооружение. А на глупого будет рычаг давления: тебе показывали, почему не сделал именно так?
 
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Проводка и заливка (Детали разныя)
Страница 17 из 34«1215161718193334»
Поиск: