Вы вошли как Гость
Текущая дата: Воскресенье, 2024-05-05, 7:50 AM
|
Проводка и заливка
|
|
| Maxim | Дата: Понедельник, 2012-09-10, 10:23 PM | Сообщение # 316 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Да, так! Удаляется избыток парафина промоканием кусочка, извлеченого из блока фильтровальной бумагой. Парафин можно удалять только в расплавленном состоянии. Затем положить в фиксатор. и т.д.
Это против правил, но зато работает! Участки, хорошо пропитанные парафином останутся нетронутыми, а плохо фиксированные зафиксируются, если это возможно.
Разумеется, проводку таких кусков нужно вести в отдельной батарее, чтобы не изгадить весь объем.
|
| |
| |
| mistermm | Дата: Вторник, 2012-09-11, 10:07 PM | Сообщение # 317 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 17
Статус: Offline
| Продолжаю отчёт ) Утром посмотрели куски, оставленные на ночь в парафине. Те, что поменьше, были нормальными (в основном биопсия - т.е. маленькие куски) - их залили, порезали-покрасили. На мой непритязательный взгляд препараты вышли отличными. Куски побольше были все еще недопропитанными - их оставили ещё на одну ночь в парафине..
А вообще решили внести в приготовление препаратов следующие изменения: 1) куски вырезать тоньше - 3 мм; 2) отказаться от 50% аИП; 3) вместо пяти смен аИП поставить восемь; 4) к трем парафинам по часу добавить четвертый на ночь.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2012-09-11, 10:29 PM | Сообщение # 318 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Кроме всего перечисленного добавьте не меньше 24 часов фиксации в формалине после вырезки. Все что до выреззки (кроме мелких биопсий и соскобов) - это не фиксация, и даже не пропитывание.
Достаточно 5-6 смен аИП. Равномерно распределите их время на всеь рабочий день. В последних можно сделать больше, чем в первых. Лучше на ночь ткани бросить в первой смене парафина, а утром провести в чистых парафинах. Не бросайте на ночь в чистом парафине (я вообще не сторонник ночных парафинов - ткани лучше не передерживать в парафинах дольше необходимого срока).
Смену и спиртов и парафинов делайте передвижением на одну позицию влевло. Каждая партия анализов должна проходить через последний чистый аИП. Паарфин можно менять разв неделю.
|
| |
| |
| mistermm | Дата: Вторник, 2012-09-11, 11:35 PM | Сообщение # 319 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 17
Статус: Offline
| С фиксацией у нас все в порядке. Я писал, что у нас операционный материал фиксируется 2 ночи (прим. 41-42 часа). Вы имеете в виду, что на ночь не оставлять в изопропаноле - т.е. днем проводка (с 9:00 до 15:00) и на ночь в первый парафин? Или все-таки ночь в изопропаноле, а потом еще одна в первом парафине?
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2012-09-11, 11:47 PM | Сообщение # 320 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Да, в спиртах днем, а первый парафин на ночь. Или в спиртах по 1 часу, последний спирт на ночь, а утром все парафины по 1 часу.
Я бы предпочел второй вариант, если бы не метод с маслом.
|
| |
| |
| mistermm | Дата: Суббота, 2012-09-15, 0:44 AM | Сообщение # 321 |
|
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 17
Статус: Offline
| Пока мы решили оставлять куски на ночь и в спиртах, и в первом парафине. Ночь в парафине - с учетом имевшегося опыта, когда куски не успевали пропитаться парафином за дневные смены (хотя мы и стали с тех пор вырезать более тонкие куски), в спиртах - опасаемся, что 5 смен в изопропаноле по 1 часу будет недостаточно...
Сообщение отредактировал mistermm - Суббота, 2012-09-15, 0:47 AM |
| |
| |
| первопроходец | Дата: Воскресенье, 2012-11-18, 5:37 PM | Сообщение # 322 |
 Лейтенант
Группа: Проверенные
Сообщений: 51
Статус: Offline
| Мне досталась во "владение" лаборатория "каменного века":ручная проводка, краски собственного приготовления,канадский бальзам и т.д.,
провожу гастробиопсии на хлороформе
сп1-1час
сп2- 10мин
сп3-30мин
сп4-30мин
сп-хлороформ 20мин
хлороформ 30мин
парафин-хлороформ 30мин
парафин1-30мин
парафин2-30мин
режется отлично(на стареньком "харькове") ,но при окраске срезы частично опадают со стекла,а в оставшихся под микроскопом нет целостной гистологической картины,просто набор желез и фрагментов ткани.
Операционный материал веду так
спирты по 1 часу
сп-хлороформ-1час
хлороформ-1час
парафин-хлороформ -на ночь
2 парафина по 1 часу
материал тоже стремится "слететь" со стекла.
ПОМОГИТЕ!!!
Сообщение отредактировал первопроходец - Воскресенье, 2012-11-18, 5:45 PM |
| |
| |
| Maxim | Дата: Воскресенье, 2012-11-18, 10:36 PM | Сообщение # 323 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Уважаемый первопроходец!
Прежде, чем делать проводку, пролейте свет на вопросы фиксации вашей лаборатории:
1. Сколько длится фиксация мелких биоптатов?
2. Сколько обычных кусоков?
3. Какой фиксатор?
4. Какова толщина больших кусокв?
5. Каково соотношение объемов фиксатор/ткань?
Без этого двигаться дальше нельзя. В слетах со стеклах виновата прежде всего фиксация.
|
| |
| |
| первопроходец | Дата: Понедельник, 2012-11-19, 8:50 PM | Сообщение # 324 |
|
Лейтенант
Группа: Проверенные
Сообщений: 51
Статус: Offline
| УРА! Мне ответили!Фиксация гастробиопсий и крупных объектов 20 часов(приносят в своем формалине около 14 00, я перекладываю в свой 10% ,проводку начинаю на следующий день в 8 00) Большие биопсии(в основном папилломы,липомы,атеромы,фибромы)от 0.1*0.1 до 0.5*0.5*0.1 В день всего около 3-10 гастробиопсий и 1-5 операционных.Объем фиксатора 500 мл.Сегодня та же картина: режется на ура, все осталось на стекле ,а микро - куча желез в каких-то обрывках. 
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Понедельник, 2012-11-19, 9:02 PM | Сообщение # 325 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Хорошо, тогда второй вопрос: какой у Вас формалин и в отделениях: покупной 10% нейтральный забуференный или самодельный?
Если самодельный, то какой %?
По времени фиксации маловато получается. Необходимо не менее 24 часов в хорошем формалине. плохой фиксатор при первичной фиксации может оказывать решающее действие.
Лучше, если на ночь оставите все объекты фиксироваться в 10% нейтральном забуференном формалне при 37-40оС в термостае, но выше темпеературу не поднимайте.
По объему фиксатора все в порядке.
Толщина объетов не должна превышать 2 мм, а площадь - предметное стекло.
Я вижу все же причину остатков желез в фиксаторе. Если мы это сможем устранить, с расписанием проводки справимся.
|
| |
| |
| первопроходец | Дата: Понедельник, 2012-11-19, 10:35 PM | Сообщение # 326 |
|
Лейтенант
Группа: Проверенные
Сообщений: 51
Статус: Offline
| Отделения получают формалин из аптеки(местной) уже готовым.Завтра схожу и узнаю как они его готовят. А я готовлю 10% из 37-40%( так написано на 5-литровой бутыли на аптекарском бланке).О буфере и речи нет.Последние закупки делались 6 лет назад, все где-то у кого-то одолжали.А термостат на 40 С есть,буду фиксировать в нем.Есть фосфатный буфер для краски Романовского 7,2 (я еще и по 60-80 стекол цитологии крашу в день), может он подойдет?
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Понедельник, 2012-11-19, 10:54 PM | Сообщение # 327 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Да, в апетеку есть очень большой смысл сходить и слезно попросить аптекарей о том, чтобы они не разводили формалин-концентрат дистиллированной водой, если не добавляется буфер, когда будут готовиить его для выдавчи хирургам, эндоскопистам и гинекологам и т.п.. Для микроскопической техники эти аптекарские рецепты губительны! Только разводить водой из-под крана. Они будут ошарашены, но это так! Это определяющий момент для фиксации кусочков, ведь мы забываем, что за кусочками стоят людские судьбы и они находятся в наших руках. Грош нам цена, если мы это знаем и вредим сознательно.
И еще маленький нюанс: часто при хранении на холоде формалин выпадает в осадок. Если это случится, просто взболтайте хорошо канистру или бутыль, и возьмите для разведения эту самую муть - это и есть настоящий формалин. Разведите такой формалин-концентрат горячей водой или поставьте в термостат 60оС на ночь. Плотно закупоривайте и соблюдайте режим проветривания! Должна получиться в итоге прозрачная однородная жидкость. Если так будет - это правильно.
И огда будет возможность, перейдтие на закупку готового 10% нетрального забуференного формалина у проверенного производителя.
Толку с цитологического фосфатного буфера мало - у него крайне недостаточная буферная емкость для забуферивания формалина. В формалине-концентрате есть несколько % муравьиной кислоты, она проглотит буфер и не заметит. А еще ткани выделяют при фиксации некотрое количество кислот. Поэтому формлиновый буфер гораздо мощнее обычного цитологического - там достаточно сотых долей процента для поддержки рН.
|
| |
| |
| первопроходец | Дата: Вторник, 2012-11-20, 6:33 PM | Сообщение # 328 |
|
Лейтенант
Группа: Проверенные
Сообщений: 51
Статус: Offline
| Естественно аптека готовит формалин на дист.воде,как "завещал" им какой-то химик-аналитик и оставил после себя прописи.По большому секрету они будут готовить на водопроводной,но никто не должен почему-то об этом знать 
Самое интересное,что в папилломах,которые проводятся плохо и режутся еще хуже,структура отлично сохранена,сегодня была классическая фибропапиллома вся в "завитушечках-завитушечках"
Добрые друзья на старой работе отрыли на складе древние аллюмокалиевые квасцы 200гр,как их приспособить?
А как сюда вставлять фото,у меня есть " ШЕДЕВРЫ" моей работы,к сожалению нет "микро" т.к. микроскоп у нас "Ломо"! 
Сообщение отредактировал первопроходец - Вторник, 2012-11-20, 6:35 PM |
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2012-11-20, 11:13 PM | Сообщение # 329 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Вот и отлично, что они гарантировали им соблюдение Ваших пожеланий. Это очень важная подвижка.
Расписание проводки может выглядеть следующим образом.
Эндобиоптаты (мелкие).
Фиксация не менее 24часов.
Промывка в проточной воде 5-10 мин.
2 этанола по 15 минут.
Этанол-хлороформ 1:1, 10 минут
Хлороформ 20 минут
Парафин: хлоформ при 37оС 15-20 минут
2 парафина по 20-30 мин при 60оС.
Общее время: 2 часа (или более).
Обычные хирургии:
Фиксация 24 часа, не меньше.
промывка в воде 10-20 мин.
Спирты
70 % - 1 час
4 этанола 95% по 1 часу.
Хлороформ 2 смены по 1 часу.
Парафин:злороформ 1:1 при 37оС - 1 час или до утра.
Парафин 4 смены по 1 часу.
Всего время: 12 часов или более.
Так бдет все правильно выглядеть. Но лучше избавляйтесь от этих гадостей - ксилол, хлороформ.
Квасцы особо девать некуда, особенно, если гематоксилин покупаете. Или используйте для приготовления гематоксилина. Если они хранились не открытыми,то не пропадают при длительном хранении. Я пользовался квасцами 30-летней давности с отличными результатами.
Собственно говоря, это не такой жуткий дефицит.
Ороговевшая кожа получается относительно хорошо по двум причинам. Во-первых, она была вырезана очень тонко. Во-вторых, в ней мало воды, поэтому обезвоживание ей длительное не нужно - главное хорошее пропитывание. Тонкий кусок пропитывается быстрее толстого.
Максим.
|
| |
| |
| первопроходец | Дата: Среда, 2012-11-21, 7:34 AM | Сообщение # 330 |
|
Лейтенант
Группа: Проверенные
Сообщений: 51
Статус: Offline
| Большое спасибо!!! сегодня проведу по новому,а завтра порежу и отчитаюсь.В проводке операционного 7 часов,а у нас 6-часовой рабочий день, можно выбросить 1 чистый спирт? А гастрики бросать сразу в чистые спирты?
Сообщение отредактировал первопроходец - Среда, 2012-11-21, 9:04 PM |
| |
| |
|
|
