Проводка и заливка - Страница 36 - Форум
[ Новые сообщения · Участники · Правила форума · Поиск · RSS ]
Вы вошли как Гость
Текущая дата: Суббота, 2017-04-29, 6:39 AM

Страница 36 из 36«12343536
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Проводка и заливка (Детали разныя)
Проводка и заливка
baigildinsamatДата: Среда, 2017-04-05, 9:14 PM | Сообщение # 526
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 2
Репутация: 0
Статус: Offline
Всем добра! Помогите пожалуйста с советом. Пробовал провести на старом материале окраску с фейри. Из 6 стекол два остались приклеенными, остальные слетели.  Возможные причины: фиксация больше года(примерно 1:1-5), не смешивающийся ИПС:ММ 2:1 и 5:1, 2 порции парафина, толщина среза 6 мкм(мс-2), долгое плавание среза в воде(регулирвание температуры=дист.вод+кипяток(постоянно меняющиеся)), яич. белок,  сушка почти час при 60оС, потряс в фейри. Слетали и в фейри, и в воде. Мне интересны разрывы, они же не связаны с методикой Фейри? Всё до предела у нас кустарно конечно. Попробую фото разместить. Спасибо за ответ!
http://s1.radikale.ru/uploads/2017/4/5/8014bc97c62b870b87c35af44ac17d8c-full.jpg
http://s1.radikale.ru/uploads/2017/4/5/f3f51a1b2af708387842ad2f775f3d00-full.jpg


Сообщение отредактировал baigildinsamat - Среда, 2017-04-05, 9:42 PM
 
MaximДата: Среда, 2017-04-05, 9:56 PM | Сообщение # 527
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 495
Репутация: 25
Статус: Offline
Депарафинирование с фейри имеет некоторые ограничения:
1. С готовностью облазят толстые срезы и плохо фиксированные ткани.
2. Не удерживаются срезы со складками, пузырями и плохо высушенные.
3. Адгезивные покрытия: полилизин, суперфрост, голд +, +, хромовоквасцовый клей. Альбумин куриный - хуже, но держится.
4. Тушь со стекол, даже с матовых поверхностей отмывается сказочно легко. Поэтому только карандаш и только на матовой полосе.

Срезы тканей правильно фиксировать (в этой ветке правила прописаны не один десяток раз). Толщина 3 мкм (лучше). Сушить 60оС термостат не менее 40 минут вертикально. Срезы можно не придавливать к стеклу, просто дать стечь воде.
В процессе депарафинирования аккуратно обращаться, не трясти, активно не макать.
Обязательно последовательная промывка в горячей дист воде и затем в теплой.

Метод дешевле депарафинирования с ксилолом примерно в 850 раз.

Работает на любых тканях. Получается ИГХ с очень красивыми и четкими картинками.

Добавлено (2017-04-05, 9:56 PM)
---------------------------------------------
Да, с фиксацией проблема. Срезы толстоватые. Разрывы не связаны с методом депарафинирования.
Последовательность после 5 смен изопропанола: сначала ИПС/ММ 5/1, затем 2/1. Если используете масло И20А - обязательно нужно использовать термостат 50оС. Лучше сделать смеси вечером, чтобы они за ночь прогрелись. Прогретые смеси прозрачные, без расслойки на масло и спирт. Обязательно потом 4 парафина по 1 часу в 60оС.
Все остальные вещи изложил в предыдущем сообщении.
Фотки подтверждают сказанное здесь и в предыдущем ответе.
Я уверен, что все можно испправить и получить отличные результаты.
Успехов.

 
MaximДата: Среда, 2017-04-05, 10:03 PM | Сообщение # 528
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 495
Репутация: 25
Статус: Offline
С настройками микроскопа или ПО камеры также нужно повозиться.
Вот что получается после некоторого "приведения в чувство" фотографий.
Прикрепления: 2826423.jpg(124Kb) · 3067916.jpg(238Kb)
 
baigildinsamatДата: Среда, 2017-04-05, 10:16 PM | Сообщение # 529
Рядовой
Группа: Пользователи
Сообщений: 2
Репутация: 0
Статус: Offline
Хорошо, Спасибо! ММ - у меня вазелиновое масло, но куплю веретенное масло. Попробую уменьшить толщину срезов. И если что закажу клей. Просто понравился метод, другой так же проведенный срез насыщенно прокрасился, по сравнению с традиционной окраской. Если никак не получится, можно ведь сделать такую последовательность(принцип): ксилол,спирт, окраска, дист.вода, термостат, полистирол(т.е. хоть как то убирается ксилол)?прикрепляю ответ:Авто баланс белого нажимаю, из-за этого наверное. leica и zen pro вроде(2012). Разобраться надо мне со стандартами фото.

10.04.2017 похоже я ошибся, микроскоп - axio imager d2, фото - axio cam mrc5, объектив zeiss. Вроде хорошая аппаратура.  Препарат - печень крысы, токс.гепатит 10х и 40х. Получил кассеты китайские, с ними попробую.


Сообщение отредактировал baigildinsamat - Понедельник, 2017-04-10, 3:46 PM
 
MaximДата: Четверг, 2017-04-06, 5:42 AM | Сообщение # 530
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 495
Репутация: 25
Статус: Offline
Вазелиновое масло практически не смешивается с изопропанолом, даже при нагреве.
Картинки в масле получаются гораздо ярче, четче и насыщеннее, это действительно так.
Перед заключением после эозина срез можно прополоскать в воде и хорошо высушить. Можно сушить спиртами, а потом на воздухе, а можно и сразу на воздухе или в термостате. Потом заключить  в полистирол. Но срез должен быть совершенно сухой, ведь если останется вода, он будет серым, мутным и с черными точками.
Баланс белого в камере - это еще не все. Сначала микроскоп по Келлеру настроить нужно. А после есть редактирование. Не вся оптика позволяет получить хорошую картинку без редактирования. Оно спасает положение и выфравнивает огрехи оптики и освещения.
А какой микроскоп, камера и объективы? (я понял, что Leica - цифры?).
Прикрепления: 6541530.jpg(138Kb)
 
Форум » ОПЕРАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ » Методики » Проводка и заливка (Детали разныя)
Страница 36 из 36«12343536
Поиск: