Вы вошли как Гость
Текущая дата: Пятница, 2024-04-26, 3:49 PM
|
Проводка и заливка
|
|
| Vladpatholog | Дата: Вторник, 2010-07-20, 4:04 PM | Сообщение # 91 |
 Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| Quote но там могут быть трудности, когда предполагается ИГХ
да и не только с ИГХ. У нас многие лаборанты любят подхалтурить на карнуа. Всем запретил такие эксперименты с материалом - негоже уничтожать гепатобиоптаты, нефробиоптаты и т.п. скудный по определению материал.
|
| |
| |
| Чакона | Дата: Вторник, 2010-07-20, 4:46 PM | Сообщение # 92 |
|
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 109
Статус: Offline
| Quote (Vladpatholog) Всем запретил такие эксперименты с материалом - негоже уничтожать гепатобиоптаты, нефробиоптаты и т.п. скудный по определению материал. А что там такого плохого происходит? Эритроциты превращаются в тени, разве что... Впрочем, я рутину на Карнуа никогда не видел, делал его только для специальных целей, когда предполагался Браше (причем оказалось - зря, на формалине Браше получается даже лучше).
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2010-07-20, 4:59 PM | Сообщение # 93 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| В своей бибилиотеке я насчитал около 50 руководств по микротехнике и многих у меня еще нет...
В каждом руководстве можно найти моменты, где рекомендуется что-то сногсшибательное. Это только со временм становится понятно, кто прав (и еще не ясно - редакторская ли это опечатка - глянуть бы на немецкий оригинал). Трое суток для абс. изопропанола - это лишнее подтверждение тому, что объекты не ухудшаются в нем. Поэтому, читая о таких сроках лаборанты смело могут перекреститься, если по какой-то причине все же прийдется оставить кусочки на пару-тройку дней в абс. изопропаноле (например, сломался аппарат для проводки в пятницу вечером, когда все ушли домой) - с ними ничего не произойдет. В овсяком случае он никак не навредит ИГХ, ГХ и Г-Э.
Что касается смешивания с парафином изопропанола - Ромейс действительно прав. при комнатной температуре это действительно так. И скорее всего, у него был небольшой опыт работы с изопропанолом. А то бы он рекомендовал его настоятельно.
|
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Вторник, 2010-07-20, 5:00 PM | Сообщение # 94 |
|
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| не знаю как должно быть - но у наших все было как вареное, смятое какое-то. В общем я вообще не понял зачем оно нужно такое ускорение.
|
| |
| |
| Чакона | Дата: Вторник, 2010-07-20, 5:05 PM | Сообщение # 95 |
|
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 109
Статус: Offline
| Quote (Maxim) В своей бибилиотеке я насчитал около 50 руководств по микротехнике и многих у меня еще нет...
В каждом руководстве можно найти моменты, где рекомендуется что-то сногсшибательное. Это только со временм становится понятно, кто прав (и еще не ясно - редакторская ли это опечатка - глянуть бы на немецкий оригинал). Трое суток для абс. изопропанола - это лишнее подтверждение тому, что объекты не ухудшаются в нем. Поэтому, читая о таких сроках лаборанты смело могут перекреститься, если по какой-то причине все же прийдется оставить кусочки на пару-тройку дней в абс. изопропаноле (например, сломался аппарат для проводки в пятницу вечером, когда все ушли домой) - с ними ничего не произойдет. Да я про книжки не в порядке соревнования написал, просто сам удивился, что у меня их столько. Я-то, в отличие от Вас, их специально не собирал. Что касается Ромейса - в моих глазах это все-таки грех. Здесь ведь важны практически важные параметры веществ, а не сферические кони в вакууме. Кстати, лаборатны могут быть еще смелее - я поставил опыт с трехнедельным лежанием материала в изопропаноле - Г.-Э., ШИК, Браше и прочее прошли отлично, материал резался просто замечательно!
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2010-07-20, 5:07 PM | Сообщение # 96 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Цитата из статьи: Гистология без формалина (Buesa, ADP [12(6) 387-396]):
Фиксатор Carnoy (1887) – это смесь 100% или 95% этанола (6 частей), хлороформа (3 части) и уксусной кислоты (1 часть), является фиксатором выбора, когда особенно необходимы ядерные детали [16]. Когда этанол в формуле заменяется метанолом (6 частей), фиксатор называется метакарнуа, это тоже хороший фиксатор, но он не рекомендуется для большинства поверхностных антигенов [37].
16. Gray P: The Microtomist’s Formulary and Guide. Blakiston, New York, 1954; pp. 794
37. Mitchell F, Ibrahim S, Gusterson BA: Improved immunohistochemical localization of tissue antigens using modified methacarn fixation. J Histochem Cytochem, 1985; 33(5):491-495.
|
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Вторник, 2010-07-20, 5:08 PM | Сообщение # 97 |
|
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| Чакона, А вы пробовали уже депарафинизировать в моющих средствах? Я вот подхожу к этому этапу - думаю...не промахнусь ли?
|
| |
| |
| Чакона | Дата: Вторник, 2010-07-20, 5:12 PM | Сообщение # 98 |
|
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 109
Статус: Offline
| Quote (Vladpatholog) не знаю как должно быть - но у наших все было как вареное, смятое какое-то. В общем я вообще не понял зачем оно нужно такое ускорение. Я делал с Карнуа селезенки, печени, почки, сердца, поджелудочную железу, тонкую кишку и лимфатический узел от мышей (последний по размерам где-то около игольных биоптатов). Получалось очень хорошо, хотя нужно жестко следить, чтобы не перележало, а то Браше перестает получаться. Добавлено (2010-07-20, 5:12 PM)
---------------------------------------------
Quote (Vladpatholog) Чакона, А вы пробовали уже депарафинизировать в моющих средствах? Я вот подхожу к этому этапу - думаю...не промахнусь ли? Нет, пока не пробовал. Сейчас в отпуске, но в августе вернусь в лабораторию - и, наверное, попробую. Интереса ради. 
|
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Вторник, 2010-07-20, 5:13 PM | Сообщение # 99 |
|
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| Ох про Браше молчу - не только у меня - очень у многих коллег ничего с ним не получается, все какое-то зеленоватое и все на том. Лаборанты замучались я и перестал экспериментировать. (Хотя в РОНЦе вот совсем никаких с этим проблем). Многие коллеги говорят, что проблема с реактивами. С другой стороны и без Браше прекрасно обхожусь.
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2010-07-20, 5:16 PM | Сообщение # 100 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Я видел ИГХ кусочков после 2 лет абсолютного изопропанола - отличные окраски. ГХ и Г-Э тоже прекрасные.
У Ромейса нет никаких параметров. Он не приводит ни вязкости ни плотности, ни диэлектрической проницаемости ни других параметров. У него - руководство для микротехников. А эти ребята часто очень часто игнорируют физику. Есть и огрехи, как у любого человека и в любой книге. Но это ничуть не умаляет достоинства этой книги. Именно поэтому прежде чем что-то сделать, я копаюсь и смотрю, а что пишут другие по этому вопросу.
Любят лаборанты фантазировать и пробовать на пустом месте - у них банальное человеческое любопытство и если его не направлять - горе получается патологу.
|
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Вторник, 2010-07-20, 5:19 PM | Сообщение # 101 |
|
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
| Quote часто очень часто игнорируют физику
Ой Maxim, физика - слово-то какое страшное.  Нам скажите что куда влить, а мы уж вам поверим. 
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2010-07-20, 5:20 PM | Сообщение # 102 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Да, для Браше важны классные красители и соблюдение рН. Ацетатный буфер с 4.5-5.5 оптимальный.
|
| |
| |
| Vladpatholog | Дата: Вторник, 2010-07-20, 5:22 PM | Сообщение # 103 |
|
Генерал-лейтенант
Группа: Администраторы
Сообщений: 638
Статус: Offline
|
вот видимо так и есть - мы свои в подвале нашли со времен организации бюро, их там только что мыши не поели. Да и не люблю я этот Браше.
|
| |
| |
| Чакона | Дата: Вторник, 2010-07-20, 5:23 PM | Сообщение # 104 |
|
Полковник
Группа: Патоморфологи
Сообщений: 109
Статус: Offline
| Quote (Vladpatholog) Ох про Браше молчу - не только у меня - очень у многих коллег ничего с ним не получается, все какое-то зеленоватое и все на том. Лаборанты замучались я и перестал экспериментировать. (Хотя в РОНЦе вот совсем никаких с этим проблем). Многие коллеги говорят, что проблема с реактивами. С другой стороны и без Браше прекрасно обхожусь. Без Браше действительно можно обойтись, особенно, если покупка любых антител - не вопрос. Однако в ряде случаев он дает прекрасные препараты, особенно плазмоциты в мозговых тяжах - блеск! Секрет только в том, что нужно жестко соблюдать условия фиксации, как для ИГХ. Т.е., формалин на буфере и не более 2 суток. Потом - да, качество реактивов принципиально. Я пользуюсь старыми мерковскими препаратами (60-х годов) и они прекрасно работают. Да, и не забыть - для Браше годен ТОЛЬКО пиронин G, ни в коем случае не В (он не дает никакой избирательности и, действительно, с ним все будет мутно-розовато-зеленоватым)!!!
|
| |
| |
| Maxim | Дата: Вторник, 2010-07-20, 5:25 PM | Сообщение # 105 |
|
Профессионал
Группа: Модераторы
Сообщений: 555
Статус: Offline
| Для порошкообразных красителей, как и для неорганических солей срок значения не имеет. Большинство моих красителй также с бородой. Важно, где и как они сделаны. Если авторитеный производитель - они будут работать. Не вздумайте выбрасывать. Старые советские реахимовские красители практически все отличного качества.
|
| |
| |
|
|
